四君子汤及其拆方对胃癌SGC-7901侧群细胞增殖、侵袭能力的影响

目的: 探讨含四君子汤及其拆方的药物血清对胃癌细胞株SGC-7901侧群细胞（side population,SP）增殖、侵袭能力的影响。方法: 制作含四君子汤及其拆方的兔药物血清;流式细胞仪分选体外培养的胃癌SGC-7901细胞株中的SP;平板克隆实验观察含四君子汤及其拆方的药物血清干预后SP细胞与非侧群细胞（non side population,NSP）体外增殖能力的变化;Transwell侵袭实验观察含四君子汤及其拆方的药物血清干预后SP细胞与NSP细胞侵袭能力的变化;比较药物血清干预后SP与NSP细胞的不同。比较四君子汤与其各拆方对SP与NSP细胞干预能力的强弱。结果: 胃癌SGC 7901细胞株中分选出SP,比例为（2.68±0.58）%;含四君子汤及其拆方药物血清干预后,SGC-7901 SP与NSP细胞体外增殖、侵袭能力均受到抑制（P<0.05）;相同干预条件对SGC-7901 SP与NSP细胞体外增殖、侵袭能力的影响有差异（P<0.05）。四君子汤的抑制作用强于各拆方。结论: 胃癌SGC-7901细胞株中存在且能成功分选出SP;含四君子汤及其拆方的药物血清能够抑制胃癌SGC-7901细胞株SP的体外增殖、侵袭能力;药物血清干预后,SP细胞的增殖、侵袭能力仍强于NSP。四君子汤对SP、NSP细胞的抑制作用均强于各拆方。     

四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群细胞的生长抑制研究

目的: 考察四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群(Side population,SP)细胞的生长抑制作用。方法: 选择不同分化程度的人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823,以荧光染料Hoechst 33342染色,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪检测并分选出SP细胞和non-SP细胞;MTT法观察两组细胞的体外增殖活性;克隆形成实验考察两组细胞的集落形成能力;应用中药血清药理学方法,酶标仪MTT比色法观察四君子汤及拆方不同剂量、不同浓度含药血清对胃癌细胞SP细胞的生长抑制作用。结果: 胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823中SP细胞比例分别为 3.40%、2.00%、1.07%,与non-SP细胞相比,SP细胞具有较强的体外增殖活性(P<0.05)和较强的克隆形成能力(P<0.01);加药组以20%高剂量血清组最为明显。四君子汤及拆方含药血清对这3株细胞的SP细胞增殖均有明显的抑制作用,呈剂量和浓度依赖性。结论: 四君子汤及拆方含药血清能明显抑制胃癌SP细胞的生长。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分I对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分I(Agkistrodon halys venom antitumor component I,AHVAC-I)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法: 取生长状态良好的浓度为1×10⁷个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液 0.1 mL 接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AHVAC-I高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果: AHVAC-I在 1.0 mg/kg 剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达 42.2%;在 3.0 mg/kg 剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达 78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-I能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。     

胃瘤安不同组方对人胃癌SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的: 通过观察胃瘤安(全方、三棱莪术方、无三棱莪术方)小、中、大3个剂量作用于人胃癌SGC-7901细胞24、48 h,探讨其对胃癌细胞的生长抑制作用及细胞周期和凋亡的影响,并对3种组方的胃瘤安进行比较。方法: 用RPMI1640 培养液对人胃癌细胞SGC-7901进行传代培养,采用MTT法检测胃瘤安不同组方对SGC-7901的生长抑制作用,采用流式细胞术检测胃瘤安不同组方对SGC-7901细胞凋亡及周期的影响。结果: 胃瘤安3种不同组方均可抑制SGC-7901细胞增殖;3种不同组方的胃瘤安均可促进正常的SGC-7901细胞凋亡,细胞周期分析提示胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)将细胞SGC-7901阻滞于S期,胃瘤安(三棱、莪术)将SGC-7901细胞阻滞于G₀ /G₁期,效应均呈浓度和时间依赖性。结论: 胃瘤安3种不同组方均能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,可将细胞阻滞在S和G₀/G₁期,其中以胃瘤安(全方)、胃瘤安(无三棱、莪术)效果最为明显。     

塞来昔布联合放射治疗对异位裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的: 探讨塞来昔布联合放射治疗对异位裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法: 建立裸鼠人鼻咽癌皮下移植模型,成瘤后40只裸鼠随机分成4组,即对照组、塞来昔布组、放射治疗组、联合组（塞来昔布与放射治疗）,观察肿瘤大小,计算抑瘤率;采用RT PCR方法考察肿瘤中COX-2的mRNA表达,并用免疫组化法以Ki-67为指标测肿瘤细胞增殖水平,末端脱氧核苷转移酶标记法（TUNEL）测凋亡细胞。结果: 对照组、塞来昔布组、放射治疗组、联合组瘤体体积分别为（1880±358）、（1574±265）、（1258±262）、和（881±197）mm³;塞来昔布组、放射治疗组、联合组抑瘤率分别为16%、33%和53%。四组中Ki-67阳性率分别为44%、29%、22%和11%;肿瘤细胞凋亡指数（AI）分别为9%、22%、30%和38%;塞来昔布组、联合组肿瘤组织中COX-2 mRNA表达显著低于对照组和放射治疗组。 结论: 塞来昔布可显著抑制裸鼠人鼻咽癌模型中肿瘤细胞COX-2 mRNA表达,抑制肿瘤细胞Ki-67表达,诱导肿瘤细胞凋亡,与放射治疗联合应用可提高抗肿瘤效果。     

扶正康复合剂联合顺铂抑制胃癌SGC7901细胞荷瘤裸鼠肿瘤增殖作用的实验研究

目的:探讨扶正康复合剂联合顺铂抑制小鼠移植性胃癌的增殖作用。方法:将28只裸鼠随机分为4组：模型对照组，扶正组，顺铂组，顺铂+扶正组，每组7只。皮下注射胃癌SGC7901细胞株，建立胃癌荷瘤裸鼠模型，顺铂及扶正康复合剂连续给药7 d，称取体重及瘤重，计算抑瘤率，并利用PCR法和免疫组化法分别检测瘤体内细胞凋亡靶点（Bcl-2、Bax、Survivin）和血管新生促进因子（VEGF）的mRNA和蛋白的表达情况。结果:在抑瘤率方面，与模型对照组相比，各组裸鼠瘤重均有不同程度的减轻（P<0.05），且顺铂+扶正组抑瘤率最高（66.67%）。在细胞凋亡方面，扶正康复合剂联合顺铂能明显上调Bax的表达，下调Bcl-2、Survivin和VEGF的表达（P<0.05）。结论:扶正康复合剂联合顺铂具有抑制肿瘤增殖的作用。     

芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的: 探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响。方法:采取对数生长期的人胃癌SGC-7901细胞作为研究对象,应用MTT法检测药物对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率;Hoechst33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法分析SGC-7901细胞中caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:芦丁(100、200、300 μmol/L)、奥沙利铂均可抑制SGC-7901的增殖,且呈剂量相关性;芦丁联合奥沙利铂与相同浓度奥沙利铂单用处理SGC-7901细胞相比,前者对SGC-7901细胞的抑制作用更显著(P<0.05);不同浓度芦丁与奥沙利铂联合处理SGC-7901细胞与奥沙利铂单用相比,前者显著提高了SGC-7901细胞的凋亡率(P<0.05)。芦丁作用后,caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值则明显降低(P<0.05)。结论:芦丁和奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3、Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白表达水平有关;两者联合应用具有一定的协同效应。     

沉默NOTCHI基因对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞生物学的影响

目的: 探讨沉默NOTCH1基因对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖和凋亡的影响。方法: 针对人NOTCH1基因序列构建NOTCH1 shRNA真核表达载体,用Lipofectamine^TM2000脂质体转染RPMI 8226细胞,筛选出最佳干扰表达载体。观察NOTCH1 shRNA表达载体对RPMI 8226细胞增殖的影响;使用流式细胞仪分析细胞的周期分布;Western blot 法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后NOTCH1蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P27、P21的表达含量变化,ELISA法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后对IL-6分泌量的影响。结果: 沉默NOTCH1基因抑制细胞增殖,阻滞RPMI 8226细胞于G0/G1期,转染组、阴性对照组及空白组增殖率分别为（49.09±2.31）%、（91.73±2.67）%、（98.10±0.41）%,差异具有统计学意义（P<0.05）;三组的G0/G1期细胞分别为（66.23±3.71）%、（42.27±3.65）%、（40.70±0.92）%（P<0.05）;三组S期细胞分别为（31.03±1.49）%、（56.53±1.76）%、（51.83±1.45）%（P<0.05）。NOTCH1 shRNA诱导细胞凋亡,三组凋亡率分别为（46.67±1.31）%、（1.37±0.63）%、（0.85±0.43）%（P<0.05）;转染组NOTCH1蛋白表达下调,P21、P27表达上调。NOTCH1 shRNA可下调与疾病相关的IL-6分泌能力。三组IL-6分泌的吸光度值分别为28.18±3.50、167.08±7.97及185.86±5.61（P<0.05）。结论: NOTCH1 shRNA能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导凋亡,下调与多发性骨髓瘤发病有关的IL-6,有望成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点。     

益肾抗瘤方联合IL-2腹腔灌注治疗卵巢癌相关腹水的疗效观察

目的: 探讨益肾抗瘤方联合白细胞介素-2（IL-2）腹腔灌注治疗卵巢癌相关腹水的疗效。方法: 采用随机数字表法将98例卵巢癌相关腹水患者分为试验组49例与对照组49例，两组均给予紫杉醇联合卡铂化疗。在此基础上，对照组给予IL-2腹腔灌注治疗，试验组IL-2腹腔灌注联合益肾抗瘤方治疗。观察并比较两组患者的腹水控制有效率、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、人附睾蛋白4（HE4）、血管内皮生长因子（VEGF）、T淋巴细胞亚群变化、免疫球蛋白（Ig）A、IgM、IgG水平变化、不良反应及Karnofsky评分变化情况。比较两组的无进展生存期（PFS）。结果: 试验组腹水控制总有效率显著高于对照组（P＜0.05）。试验组的CA125总缓解率及控制率分别为71.4%、95.9%，均显著高于对照组的46.9%、83.7%（P＜0.05）。治疗后，试验组CEA、CA125、HE4及VEGF水平显著低于治疗前及对照组治疗后（P＜0.05）。试验组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞及IgM、IgG水平显著高于治疗前和对照组（P＜0.05）。试验组胃肠道反应、白细胞下降、血小板降低、转氨酶升高、尿素氮升高及周围神经症状的发生率显著低于对照组（P＜0.05）。试验组的PFS为6.0（3~12）个月，显著长于对照组的4.0（2~10）个月（χ2=8.113，P<0.01）。结论: 益肾抗瘤方联合IL-2腹腔灌注治疗卵巢癌并发恶性腹水疗效确切，可有效抑制肿瘤细胞的增殖，改善患者生存质量，安全性较高，值得推广。     

CD40调节胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的: 研究CD40L对胰腺癌细胞生物学特性、干性的影响。方法: CCK-8活细胞计数法分析CD40可溶性配体（sCD40L）不同浓度（0、1、2、4 μg/mL）在不同时间对人胰腺癌细胞系panc02生长增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测凋亡;细胞划痕实验检测迁移的改变。Q-PCR检测4 μg/mL sCD40L处理panc02 48 h后c-Myc、OCT-4、Sox-2水平的改变。建立Balb/c裸鼠胰腺癌荷瘤模型,随机分为2组,对照组（生理盐水）和sCD40L（10 mg/kg）组,分别腹腔注射sCD40L 10 mg/kg以及等体积生理盐水,每天注射3次,游标卡尺测量0、7、14、21、28 d时肿瘤体积。结果: 与对照组比较,浓度为1、2、4 μg/mL的sCD40L处理panc02 96 h时可显著抑制panc02的增殖（P＜0.01）,并促进panc02的凋亡（P＜0.01）,并呈剂量依赖性地抑制panc02的迁移能力（P＜0.01）;sCD40L 4 μg/mL组可明显抑制panc02细胞的c-Myc、OCT-4、Sox-2的表达（P＜0.01）。在裸鼠荷瘤实验中,与对照组比较,sCD40L处理28 d明显抑制肿瘤体积（P＜0.01,252±13 vs. 189±9）。结论: CD40通路的活化能够抑制胰腺癌细胞增殖迁移、促进凋亡,同时抑制胰腺癌细胞系体内的增殖能力,而这一效应可能与CD40L抑制胰腺癌细胞系干性相关。     

新一代胸苷酸合成酶抑制剂ZD1694 的体内外抗肿瘤作用

目的: 观察ZD1694 对小鼠体内S180 肉瘤生长的抑制作用及其在体外对人胃腺癌SGC-7901 细胞增殖的影响。方法: 采用荷瘤小鼠模型, 腹腔注射不同剂量的ZD1694, 分单次给药与连续5 d 分次给药两种方案。处死动物后称取肿瘤组织重量, 计算抑瘤率。另外采用MTT 比色法及流式细胞仪观察ZD1694 对人SGC-7901 胃腺癌细胞株生长的影响。结果: ZD1694 可抑制小鼠体内S180 肉瘤的生长, 其抑瘤率无论是单次给药组(200 、100 、50 mg·kg^-1) 还是连续5 d 给药组(40 、20 、10 mg·kg^-1 ·d^-1), 均可见剂量依赖性增加。ZD1694(0.001 ~ 1 000 mmol·L^-1)对SGC-7901 人胃腺癌细胞的生长抑制率呈浓度依赖性和时间依赖性增加, 可使G₀-G₁ 期细胞增多,S 期和G₂-M 期细胞减少。结论: ZD1694 对荷瘤小鼠产生明显的抗瘤作用, 一次性给药的抑瘤率大于相同剂量分5 次给药的抑瘤率。该药在体外可抑制人胃腺癌SGC-7901 细胞生长, 使细胞发生G₁ 期阻滞。     

miR-222、MBD2在胃癌患者中的表达及对铂类化疗敏感性的影响

目的:研究miRNA-222与甲基化CpG结合结构蛋白2（MBD2）水平在胃癌组织中的表达水平及其对铂类化疗敏感性的影响。方法:选择2016年2月至2017年5月在本院就诊的75例原发性胃癌患者作为研究对象。检测患者癌组织及癌旁组织中miR-222、MBD2表达水平；分析miR-222、MBD2水平与胃癌临床病理参数的相关性。将miR-222 inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中，RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中miR-222和MBD2的表达水平，MTT法、流式细胞术分别检测转染对细胞增殖、凋亡的影响。结果:胃癌组织中miR-222的阳性表达率显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中miR-222相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中MBD2的阳性表达率显著低于癌旁组织（P<0.05）。miR-222及MBD2表达水平与分化程度、TNM分期有明显相关性（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组SGC-7901细胞中miR-222表达水平均显著低于空白对照组（Control组）和miR-NC组（NC组）（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞中MBD2 mRNA和蛋白表达水平显著高于Control组和NC组（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞的增殖率显著低于Control组和NC组（P<0.05），且miR-222 inhibitor+顺铂（Cisplatin，CDDP ）组的细胞增殖率显著低于miR-222 inhibitor组及CDDP 组，细胞凋亡率显著高于miR-222 inhibitor组及CDDP 组（P<0.05），且与CDDP联合运用能够更明显地抑制肿瘤细胞的增殖率，促进细胞的凋亡。结论:miR-222在胃癌组织中表达明显上调，MBD2显著下调，其表达高低与胃癌分化程度、TNM分期有明显相关性。miR-222可增强 CDDP 对胃癌的化疗敏感性，其可能通过抑制胃癌中的靶基因MBD2发挥作用。     

硼替佐米对胃癌细胞的抗肿瘤作用及其机制

目的: 观察硼替佐米对胃癌细胞的抗肿瘤作用,并探讨其相关的作用机制。方法: MTT生长抑制实验检测硼替佐米对胃癌SGC-7901细胞的细胞毒作用;PI和Annexin V-FITC双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot实验检测蛋白的表达变化。结果: 硼替佐米对胃癌SGC-7901细胞的IC₅₀值为(54.6±4.1) nmol/L。0、50、100 nmol/L 硼替佐米作用于SGC-7901细胞 48 h 后,细胞的凋亡率分别为(1.8±0.7)%、(26.5±4.6)%、(41.7±5.8)%,各组之间具有统计学差异(P<0.01)。50和 100 nmol/L 的硼替佐米作用SGC-7901细胞 48 h 后,细胞出现了Parp和caspase-3蛋白的裂解带。50和 100 nmol/L 的硼替佐米作用SGC-7901细胞 48 h 后,细胞Bmi-1蛋白的表达出现了显著的降低。结论: 硼替佐米对胃癌SGC-7901细胞具有显著的抗肿瘤活性,下调Bmi-1蛋白可能是其诱Anti-inflammatory effects of carboxyamidotriazole on carrageenan-induced acute inflammationZHU Lei, LI Juan, WU Dan-wei, YU Xiao-li, GUO Lei, YE Cai-ying, ZHANG De-changDepartment of Pharmacology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences & School of Basic Medicine, Peking Union Medical College, Beijing 100005, ChinaABSTRACT AIM: To investigate the preventive effects of carboxyamidotriazole (CAI) in rat model of carrageenan-induced paw acute inflammation and its mechanisms.METHODS: The paw acute inflammation in rats was induced by carrageenan. The paw swelling was measured, and myeloperoxidase (MPO), NO, PGE₂, TNF-α, IL-1β, cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1 (CNCI-1) and iNOS in the paw tissues were determined.RESULTS:CAI attenuated the carrageenan-induced paw swelling. CAI decreased the contents of MPO, NO, PGE₂, TNF-α, IL-1β and CNCI-1 in the inflamed paw tissues. Also, the protein expression of iNOS was reduced by CAI.CONCLUSION: CAI has anti-inflammatory effects against carrageenan-induced acute inflammation by decreasing the inflammatory mediators and the neutrophils infiltration.KEY WORDS Carboxyamidotriazole; Acute inflammation; Carrageenan; Myeloperoxidase; Inflammatory mediators本文编辑:储冀汝导胃癌细胞凋亡的主要作用机制。     

CO2气腹压力对胃癌细胞侵袭黏附分子表达的影响

目的: 探讨不同压强CO₂气腹对胃癌细胞侵袭黏附能力的影响。方法: 建立体外CO₂气腹模型,选胃中分化腺癌株SGC-7901,分别暴露在6、9、12、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和常规细胞培养环境下各3 h。Real-time PCR法检测胃癌细胞中黏附侵袭分子E-cadherin、细胞黏附侵袭分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和细胞黏附分子CD44v6的表达水平;Western-blot检测胃癌细胞中E-cadherin、ICAM-1、MMP-2和CD44v6蛋白的表达水平。结果: 随着CO₂压强升高,在 15 mm Hg 时,E-cadherin的mRNA相对表达水平较对照组明显下降(P<0.05);MMP-2和CD44v6的mRNA相对表达水平较对照组明显上升(P<0.05);而ICAM-1 mRNA的相对表达水平也有上调趋势,但各组与对照组比较均无统计学差异。Western-blot检测结果显示蛋白的表达水平与基因检测结果一致。压强为 15 mm Hg时,CD44v6和MMP-2的表达上调,E-cadherin 的表达下调,具有统计学差异。结论: 在压强不高于 12 mm Hg 时,不同压强的CO₂气腹对胃癌细胞株的黏附侵袭能力无明显影响,并不增加肿瘤的转移几率。     

阿霉素诱导小鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和抑制增殖的体内实验研究

目的: 探讨阿霉素对荷瘤鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响。方法: 建立小鼠MCF-7 乳腺癌细胞模型, 用TUNEL 法和免疫组化法检测阿霉素作用下MCF-7 乳腺癌细胞的凋亡和PCNA 表达的变化。结果: 1.25 mg·kg^-1 阿霉素的抑瘤率为43 %。MCF-7 乳腺癌细胞的凋亡指数为1.93 %, 较荷瘤对照组的1.11 %明显升高(P <0.05)。增殖指数为35.75 %, 较荷瘤对照组的56.38 %明显下降(P <0.01)。结论: 阿霉素有诱导小鼠MCF-7 乳腺癌细胞凋亡和抑制其增殖的作用。