大肠杆菌定量检测用标准物质的研制

采用平板计数法考察复合保护剂对大肠杆菌标准物质冻干粉的保护效率以及均匀性、稳定性。结果显示:复合保护剂对大肠杆菌保护率达到53.19%,可以在冻干过程中有效保护菌体。将大肠杆菌与冻干保护剂混合后,经冷冻干燥制备成干粉状标准物质,形态好、复水速度快、均匀性良好,可以稳定保存半年。该标准物质可用于食品检测实验室质量控制和食品中大肠杆菌检测结果的评价。     

鸡肉中单核细胞增生李斯特氏菌标准物质的研制

将一定浓度的菌种添加至经过辐照灭菌的鸡肉基质中,经冻干脱水制成鸡肉基质中单核细胞增生李斯特氏菌准标准物质,研究其均匀性与稳定性.实验结果表明:该准标准物质的均匀性试验的相对重复性标准差为3.596%,相对再现性标准差为3.514%;批次内与各批次间验证试验表明:批次内与各批次之间测试结果无显著差异,半年内稳定性良好.     

食源性单核细胞增生李斯特菌快速检测研究进展

食品安全是人类健康非常关注的问题,其中微生物污染是其主要的风险因素之一。单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原体,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。该菌广泛存在于自然环境中,低温条件下仍可生长繁殖,是威胁人类健康的主要病原菌之一。传统细菌检测方法耗时长,不能满足现场检测的需求。因此开发快速、准确、高效、可靠的单核细胞增生李斯特菌检测方法是目前研究的热点。基于免疫学、分子生物学、生物传感器和噬菌体等技术的检测方法成为单核细胞增生李斯特菌检测的重要手段。该文综述各类检测技术的研究进展,阐述各个方法在致病菌检测中的原理、特点、应用现状和发展,并讨论各方法的优缺点,以期为单核细胞增生李斯特菌检测新技术的研发提供参考。     

阴沟肠杆菌定量标准物质的研制

采用真空冷冻干燥法和滤膜法定值技术,研制了球状的阴沟肠杆菌定量标准物质。经保护剂配方及冻干程序参数优化后,阴沟肠杆菌的平均存活率达51%,形状均匀一致、外观光滑无塌陷,能完全复水速溶。通过结晶紫中性胆盐琼脂培养基平板计数法考察均匀性和稳定性,证明该标准物质均匀性良好,-80 ℃至少可稳定保存6个月。该标准物质由6家实验室采用滤膜法联合定值,经不确定度评定,标称值为（2.0±0.1）log10 (cfu/瓶),相对扩展不确定度为10%(k=2)。标准物质中阴沟肠杆菌活菌数含量水平为10² cfu/瓶,可以直接溶解使用,无需稀释,使用方便,同时减少了测量不确定度来源。     

人体骨髓基质干细胞冷冻干燥的探索性实验

人体骨髓基质干细胞已成为组织工程、细胞移植和基因治疗等领域的重要研究对象,目前对它已有低温保存的研究,而通过冷冻干燥的方法对其进行保存国内外未见报导.实验尝试用冻干的方法来保存骨髓基质干细胞.文中选取海藻糖、PVP、HES等作保护剂,应用差示扫描量热仪(DSC)测量其结晶温度和玻璃化转变温度;随后对加入保护剂的细胞溶液进行冻干实验,并应用流式细胞仪对冻干样品复水后的细胞活性进行了测定,其中30%PVP 20%海藻糖对细胞的保护效果较好,细胞成活率达到16.40%.     

甘油对人的红细胞冷冻干燥保存效果的影响

就甘油对人红细胞冷冻干燥保存效果的影响进行了实验研究。实验中先用不同浓度的甘油对红细胞进行处理，用PVP、柠檬酸钠、蔗糖和胎牛血清作为冻干保护剂对红细胞进行冻干保存，冻干后的样品用质量浓度为30g／L的NaCl复水，用血球分析仪和光镜进行检测。实验结果表明；用甘油进行处理后，红细胞的回收率明显高于没有用甘油处理的红细胞组。其中，采用质量浓度为400g／L的甘油处理后，红细胞冻干回收率达到51．4％。     

LEA蛋白特征片段及海藻糖对热敏性蛋白药物胰岛素冻干的协同保护

热敏性蛋白药物胰岛素的热稳定性较差,极易受制备方式和保存条件等影响而失活。故本研究分别利用高效液相色谱(HPLC)测定冻干样品中胰岛素的效价和差示扫描量热仪(DSC)测定冻干样品的玻璃化转变温度等重要参数,来研究胚胎发育晚期富集蛋白特征片段(LEA-motif,LEAM)和海藻糖冻干保护剂对胰岛素冻干保护效果的影响。冻干实验表明,两种保护剂均对胰岛素的活性具有保护效果,且LEAM的活性保护效果优于海藻糖。在效价和热稳定性方面,LEAM保护的胰岛素冻干品均高于海藻糖保护的胰岛素冻干样品。更为重要的是,两种保护剂协同保护时,少量海藻糖对于LEAM的保护特性具有增效作用。在冻干过程中,可有效提升药物玻璃态的稳定性,防止热致变性失活。由此可见,这种LEAM和海藻糖保护剂复合保护方法有望也可以应用在热敏性蛋白药物冻干粉针制备过程以保护药物活性。     

LEA蛋白特征片段及海藻糖对热敏性蛋白药物胰岛素冻干的协同保护研究

热敏性蛋白药物胰岛素的热稳定性较差,极易受制备方式和保存条件等影响而失活。故本研究分别利用高效液相色谱（HPLC）测定冻干样品中胰岛素的效价和差示扫描量热仪（DSC）测定冻干样品的玻璃化转变温度等重要参数,来研究胚胎发育晚期富集蛋白特征片段（LEA-motif, LEAM）和海藻糖冻干保护剂对胰岛素冻干保护效果的影响。冻干实验表明,两种保护剂均对胰岛素的活性具有保护效果,且LEAM的活性保护效果优于海藻糖。在效价和热稳定性方面,LEAM保护的胰岛素冻干品均高于海藻糖保护的胰岛素冻干样品。更为重要的是,两种保护剂协同保护时,少量海藻糖对于LEAM的保护特性具有增效作用。在冻干过程中,可有效提升药物玻璃态的稳定性,防止热致变性失活。由此可见,这种LEAM和海藻糖保护剂复合保护方法有望也可以应用在热敏性蛋白药物冻干粉针制备过程以保护药物活性。     

冷冻干燥保存人脐血实验研究

尝试用冷冻干燥法来长期保存脐血和有核细胞,并对冻干效果进行比较分析.选用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖和甘露醇等作为冻干保护剂,先将样品冻结到-38℃,随后在-30℃搁板温度下进行升华干燥,最后在15℃搁板温度下进行解吸干燥.冻干后的样品用磷酸盐缓冲液复水,然后用血细胞计数板、流式细胞仪和扫描电镜进行检测.实验结果表明:在400 g/L PVP 200 g/L蔗糖 100 g/L甘露醇作为保护剂时细胞数目恢复率最高,为(75.0±4.1)%(P＜0.01),PI染色鉴定测得单个核细胞拒染率在400 g/L PVP 200 g/L蔗糖 10%胎牛血清作为保护剂时最高,为(98.57±0.68)%(P＜0.01),CD34 细胞回收率最高为35.59%.最终确定有核细胞的冻干效果比全血的要好,初步判定冷冻干燥法保存脐血是可行的.     

人血小板的冷冻干燥保存:细胞内外保护剂的作用

通过液相内吞途径将13mmol／L海藻糖载入人血小板内,采用牛血清白蛋白和海藻糖作细胞外保护剂,研究细胞内海藻糖和细胞外保护剂在血小板冻干保存中分别所起的作用。实验结果表明冻干血小板的活性主要依靠细胞外保护剂提供的保护作用而得以保存,13mmol／L的细胞内海藻糖只起到有益的补充作用。在13mmol／L细胞内海藻糖和1％牛血清白蛋白＋1％海藻糖细胞外保护剂同时存在的情况下,冻干保存40天的血小板复水后的数值恢复率约85％,显微镜观察细胞形态完整,对1U／ml凝血酶的聚集百分比为97．3％。     

医疗器械开口灭菌包装密封性验证标准及测试

在灭菌或运输储存过程中,灭菌包装内外会有产生压力差的情况,若装入器械过于紧绷,或灭菌袋剥离强度略有下降,就会导致潜在的泄露和爆开风险。本文通过对GB/T19633-2005和ASTM F1140两种标准关于密封性的解读,详细论述了医疗器械开口灭菌包装的密封性测试方法。     

医疗器械灭菌包装密封性验证标准及测试

在灭菌或运输储存过程中,灭菌包装内外会有产生压力差的情况,若装入器械过于紧绷,或灭菌袋剥离强度略有下降,就会导致潜在的泄露和爆开风险。本文通过对GB/T19633-2005和ASTMF1140两种标准关于密封性的解读,详细论述了医疗器械开口灭菌包装的密封性测试方法。     

用于批量快速筛选最佳低温保存程序的生物芯片技术

低温生物学应用中,筛选最佳的冻结、复温程序以及相应的保护剂配方,通常需要大量繁琐、费时且高度重复性的测试工作.将样品准备及其活性检测功能加以集成,首次在低温保存程序优化方面引入了生物芯片技术的概念.设计制作了相应的原型器件并开展实验研究.结果表明,流道式芯片用于样品分配时效果不佳,而点样式芯片则可实现快速、可靠的样品加载,红外实验进一步表明其传热一致性较好.在此基础上,利用点样式芯片与集成化的半导体制冷器件相结合,对多种生物样品的低温冷冻及复温效果进行了测试,基于对结果的比较分析可以筛选出最优的降温、复温程序及低温保护剂浓度配比.此外,还对批量测定低温保护剂溶液的热物性也进行了考察.研究表明,借助于功能集成化及检测自动化的生物芯片,可以实现大规模快速优化复杂低温保存程序.     

人肝癌细胞Hep-G2的冷冻干燥保存初探

冷冻干燥是长期有效保存细胞的手段之一。本文以肝癌细胞Hep-G2为研究对象,选取了不同体积分数的Me2SO、丙三醇及不同质量浓度的PVP、复方保护剂进行冷冻干燥保存,筛选出最佳保护剂配方。此外,将细胞在不同摩尔浓度的海藻糖溶液中孵育,通过检测细胞回收率、存活率和24 h贴壁率,探究胞内海藻糖对细胞冷冻干燥的影响。结果表明:添加40%PVP(w/v)+10%甘油(v/v)+15%FBS(v/v)+20%海藻糖(w/v)保护剂的细胞,在复水后回收率、存活率和24 h贴壁率分别为29.58%、42.18%和18.71%,与对照组相比三项指标均得到有效提高,该种保护剂的效果最佳;当胞外海藻糖摩尔浓度为800 mmol/L时,冻干效果最好,肝癌细胞Hep-G2在复水后回收率、存活率和24 h贴壁率分别为27.81%,66.65%和33.68%,存活率和贴壁率显著高于其他组。     

不同功率的超声波预处理对罗非鱼片冻干性能的影响

为了探讨超声波预处理在维持肉类食品冻干品质和加快冻干过程的综合效果,以罗非鱼为实验材料,进行了不同功率(200 W,250 W,300 W,350 W,400 W,450 W,500 W)的超声波预处理罗非鱼片的真空冷冻干燥实验,获得了不同功率预处理条件下的冻干曲线,水分分布曲线和系列品质指标变化规律曲线。结果表明,经超声波预处理的样品冻干前期升温速度慢,后期升温速度快,且以450 W功率预处理的样品升温和达到平缓状态最快。在相同的冻干参数和冻干时间条件下,不同功率超声波预处理的冻干样品、干基含水率、水分活度、白度值、复水率、质构和水分状态及其分布等都存在着一定的差异,且均优于无预处理的对照样品。以各指标的加权综合评分值为比较标准,不同超声波功率预处理的样品与对照组相比提升幅度在68.55%~273.42%不等,且以450 W超声波预处理的样品品质提升幅度最大,综合性能较优。结论能为超声预处理在冻干肉类产品中的应用提供参考。     

蛋黄卵磷脂对冻干红细胞恢复率的影响

蛋黄卵磷脂可以用来修复红细胞细胞膜在冻干过程中的损伤.将不同浓度、不同粒径的蛋黄卵磷脂加入红细胞样品中,孵育不同的时间后冻干、复水,研究蛋黄卵磷脂浓度、粒径、孵育时间对冻干红细胞恢复率的影响.实验结果表明,蛋黄卵磷脂能够提高冻干红细胞的恢复率,当蛋黄卵磷脂的粒径为0.8μm、浓度为0.88mM、孵育时间为15min时,红细胞恢复率达到(59.7±4.8)%.     

生物安全柜防护性能评价用标准物质研制

生物安全柜的防护性能不仅影响实验结果的准确性和可靠性，而且也关系到实验人员的人身安全，因此其防护性能需要及时评价与校准。枯草芽孢杆菌作为国内外生物安全柜标准中规定的性能评价用指示菌，其芽孢标准物质的研制十分必要。通过将不同浓度的枯草芽孢杆菌芽孢添加到保护剂中，经冻干制备成干粉状标准物质，并研究标准物质的均匀性和稳定性。结果表明制备的枯草芽孢杆菌芽孢计数系列标准物质均匀性良好，在4℃下可以稳定保存24个月，3种不同浓度的标准物质标准值分别为(5.4±1.3)×10⁸ CFU/mL、(5.2±1.3)×10⁶ CFU/mL和(5.3±1.4)×10⁴ CFU/mL,可分别用于生物安全柜人员、产品和交叉污染保护性能评价。     

基于露点法判断冻干过程的一次升华结束点

本文根据冻干过程干燥室内的露点值和物料的水分含量有关提出一种新的方法--露点法来监控冻干过程物料的水分迁移情况.以浓度为2%(W/V)的甘露醇(冻干保护剂)为研究对象,分别取80个,160个,20个小瓶,通过不同的过充小瓶数(1个,2个),不同的溶液高度(溶液高度6.5 mm,0.32 mm)来检验露点法在监测整批样品冻干过程的灵敏性.与称重法对照,称重法即在冻干过程不同的时刻取出样品测量整批样品质量.实验结果表明露点法即使当过充小瓶率为0.625%,或者溶液高度为0.32mm时仍有足够的灵敏度,露点法得到的一次升华结束点与称重法结果一致.这说明非接触法露点法是一种可靠,便利的监测一次升华结束点的方法,将其应用于控制成批冻干样品大有可为.     

聚苯乙烯红外波长标准物质的研制

采用物化性能稳定的聚苯乙烯薄膜(厚度为38μm)作为红外光谱仪波长标准物质的原材料,以F检验法对样品的均匀性进行检验,用线性拟合法对样品的稳定性进行考察,通过溯源至国家基标准的方式解决了溯源性,确定了聚苯乙烯薄膜波长的特性量值。     

人肝癌细胞Hep-G2的低温保存研究

在细胞的低温保存中,低温保护剂的种类与浓度对复温后的存活率有着重要影响。本文以人肝癌细胞Hep-G2为研究对象,利用慢速冷冻法,筛选最佳的冻存液配方。通过配比不同浓度的甘油、Me2SO以及在Me2SO中添加一定浓度的蔗糖、海藻糖,一周后复温细胞,对台盼蓝染色存活率、MTT存活率以及24 h贴壁率三种检测结果进行比较分析,结果表明:以Me2SO作为低温保护剂时,冻存液浓度为10%(v/v)的Me2SO复温后细胞的三种检测指标最优;以甘油作为低温保护剂时,冻存液浓度为20%(v/v)的甘油复温后细胞的三种检测指标最优;再将以上分别得到的最佳浓度(即体积浓度20%甘油、10%Me2SO)与5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L蔗糖、5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖这四种低温保护剂进行冻存与比较,5%Me2SO(v/v)+0.3mol/L海藻糖检测指标高于其他实验组,并且差异显著(P0.05)。最终得到5%Me2SO(v/v)+0.3 mol/L海藻糖为慢速冷冻保存Hep-G2细胞的最优保护剂配方。