河北省2000～2001年初免儿童白喉、破伤风和百日咳免疫水平监测

为更好地开展计划免疫工作 ,河北省每年开展初免儿童白喉、破伤风和百日咳免疫水平监测。现将两年监测结果报告如下。1 监测范围和对象监测范围为全省所有的县 (区 ) (以下同 ) ,每年每市抽一个县 ,采用多阶段随机抽样 ,采集耳血或静脉血 ,分离血清 ,冻存 ,由省疾病预防控制中心统一检测。监测对象为 1～ 2岁完成基础免疫的儿童。2 检测方法白喉和破伤风抗毒素检测采用间接血凝试验 (ＩＨＡ) ,白喉和破伤风抗毒素均以≥ 0 .0 1ＩＵ/ｍｌ为达保护水平 ,计算阳性率。百日咳抗体采用微量凝集试验 ,以≥ 1∶32 0为达保护水平 ,计划阳性率。试剂…     

应用ELISA与中和试验测破伤风抗毒素的比较

用ELISA间接法测得的TT，DT．DTP免疫豚鼠后的破伤风毒素水平，与用中和试验所得结果之间有很好的相关性。ELISA毒素结合抑制法测得的标抗、马抗TT血清、DTP免疫的豚鼠血清的抗毒素水平与中和毒素试验所得结果之间也有很好的相关性。ELISA方法简单、经济，结果可靠，适于检测破伤风抗毒素水平。     

扬中县部分人群白喉、破伤风免疫水平调查

为了解我县人群白喉、破伤风免疫水平，评价近几年儿童计划免疫工作，预测白喉、破伤风流行态势，我们抽取各年龄组部分人群进行抗体测定，现将结果报告如下。选择1、3、5岁组儿童各30名，小学各年级15～20人，初高中各年级30～40人，在全县体检的驾驶员中每年龄段抽取20～30人，医院妇产科采脐带血13份，可供检测的血样共551份。应用间接血凝法检测血清抗体，结果换算成IU／ml，在0．0039～2．0IU／ml范围内统计，按≥0.01IU／ml计算保护率，同时计算GMT。结果学龄前儿童抗体水平较高，表明近年基础免疫较满意。学生、成人抗体水平较低…     

基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法的建立

目的建立基于Luminex技术的多组分百日咳疫苗血清抗体效价快速检测方法。方法将百日咳类毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)、百日咳杆菌黏附素(pertactin,PRN)、百日咳菌鞭毛蛋白2,3型(fimbrial-2 and fimbrial-3,FIM 2,3)分别与4种不同型号的微球耦联,耦联的抗原在同一孔中与血清孵育,通过生物素标记抗体和链霉素标记藻红蛋白双重识别,用Luminex荧光检测得到荧光中位数值(MFI),进行效价分析,并通过百日咳标准血清建立五组分百日咳疫苗血清抗体检测的标准曲线。采用ELISA法检测同一组血清样品中的抗体效价,并对两种方法的检测结果进行比较。结果与ELISA法相比,Luminex法的线性范围更宽。两种方法检测五组分百日咳疫苗血清抗体效价的分布范围接近,Luminex法检测50份五组分百日咳疫苗免疫小鼠血清抗体效价的平均值分别为PT 65.365 IU/ml、FIM 15.052 IU/ml、FHA 545.236 IU/ml、PRN 7.876 IU/ml,ELISA法检测的平均值分别为PT 72.640 IU/ml、FIM 16.480 IU/ml、FHA 589.474 IU/ml、PRN 7.345 IU/ml,两种检测方法的检测结果具有良好的相关性,相关系数(R2)分别为:PT 0.905 8、FIM 0.979 1、FHA 0.930 9、PRN 0.997 6。结论与ELISA法相比,基于Luminex的多重分析物的检测方法具有减少样品消耗量、节省成本和测定时间、使多种目标分子之间相关性的分析更准确等优点,可用于五组分百日咳疫苗血清抗体效价的检测。     

上海市虹口区青少年人群百日咳全抗体水平监测

目的分析上海市虹口区青少年人群中百日咳全抗体水平,为人群百日咳免疫策略提供依据。方法 2010年在上海市虹口区内随机选择6~10岁、11~14岁及15~19岁的健康青少年225人,对青少年百日咳疫苗免疫史和持续≥14 d咳嗽史进行调查。采集静脉血样,分离血清,用ELISA法检测百日咳全抗体Ig G。结果实际纳入研究的对象共214人,百日咳疫苗全程接种率为93.93%,持续2周以上咳嗽患病率为15.42%;青少年人群百日咳全抗体GMT水平为21.88 U/ml,全抗体阳性(Ig G≥50 U/ml)率为26.64%,高抗体水平(Ig G≥100 U/ml)阳性率为15.42%;各年龄组百日咳全抗体GMT(F=19.90)、抗体阳性率(χ2=18.19)和高抗体水平阳性率(χ2=9.73)差异均有统计学意义(P0.01),随年龄增长均呈显著上升趋势(P0.01);1年内有持续2周以上咳嗽史人群百日咳全抗体GMT(t=2.505)、抗体阳性率(χ2=7.071)和高抗体水平阳性率(χ2=6.626)均明显高于无2周以上咳嗽史人群(P均0.05)。结论虹口区青少年人群中存在百日咳感染病例被漏诊或未发现;现行百日咳疫苗免疫程序对青少年不具有持久的保护作用。为虹口区青少年人群的百日咳疫苗免疫策略提供科学依据,有必要进一步开展医院/社区百日咳病例的前瞻性主动监测。     

破伤风抗体体外结合ELISA检测方法的建立及初步验证

目的建立破伤风抗体体外结合ELISA检测方法,并进行初步验证。方法将破伤风疫苗免疫后获得的小鼠血清与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)在体外进行结合,将结合后的血清转移至已包被的酶标板中,分别加入二抗、酶标抗体和底物等进行检测,建立破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法。对建立的方法进行特异性、线性范围、检测限、重复性和准确性初步验证。结果建立的破伤风抗体体外结合双抗夹心ELISA法的标准曲线在浓度为0.016~1 U/ml之间时,可获得最佳线性,相关系数R=0.999 8;检测限为0.009 U/ml;与白喉-百日咳抗体无交叉反应;重复性验证中高浓度和低浓度质控血清的变异系数(CV)分别为4.467%和5.419%;准确性验证中高浓度和低浓度质控血清的相对偏差分别为-8.03%和-14%。结论建立的破伤风抗体体外结合ELISA检测方法具有良好的特异性、重复性和准确性,为破伤风疫苗效价检测新方法的建立奠定了基础。     

德州地区健康人群破伤风免疫水平分析

为了解我区健康人群破伤风免疫水平，并评价1990～1992年的计划免疫工作质量，按卫生部《计划免疫技术管理规程》中间接血凝法，对＜2岁、2～岁、5～岁、8～岁、11～岁，15～岁和20岁以上7个年龄组人群进行了破伤风抗毒素单位检测，以。0．016IU／ml为阳性。现将结果报道如下。1990～1992年破伤风抗体阳性率分别为51．32％（194／378）、5522％（127／230）和7879％（130／165）；破伤风抗毒素几何平均滴度分别为0．0203IU／ml、0．0277IU／Ynl和0．0426IU（ffi。这是由于我区健全了基层防保组织，加强了专业技术人员培训（曾举办过8期…     

吸附精制白喉—破伤风二联类毒素成人接种后的血清学效果

本文报告用两种配方的吸附精制白喉—破伤风二联类毒素(DT),在浙江省黄岩县中学生和青工中进行免疫效果观察。免疫后1个月、 1年和3年白喉抗体保护水平分别达95％、88％和80％以上。免疫后1个月和1年破伤风抗体保护水平分别达85％和81％以上。白喉和破伤风免疫后抗体滴度的几何平均值(GMT)分别比免疫前增加4～28倍和7～11倍。表明该制剂接种1次即可获得较为满意的血清学效果,可供青少年和成人作加强免疫或应急接种用。     

百日咳毒素兔多克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立和验证

目的 制备百日咳毒素（pertussis toxin,PT）兔多克隆抗体（简称多抗）,建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用。方法 采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗。优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证。采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白（fimbriae proteins,FIM）原液中PT抗原含量进行检测。结果 PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8 000。此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25～400 ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27%、91.48%、103.52%;酶标板内和板间的变异系数（CV）均小于10%;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL。检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取...     

人类乳头瘤病毒特异性抗体单一稀释度ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100及500倍稀释),建立HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,并验证方法的特异性、准确性、线性范围、检测限度及精密性。采用建立的方法检测自然感染HPV及接种疫苗后的血清样本(各28份),并与假病毒中和试验(pseudovirus-based neutralization assay,PBNA)检测结果进行比较。结果 100份阴性血清样本HPV16及HPV18 IgG抗体均为阴性;HPV16及HPV18抗体滴度的平均回收率分别为74%和73%;HPV16及HPV18抗体的定量检测范围分别为0. 049～0. 370 IU/mL及0. 030～0. 231 IU/mL;该方法重复性CV在2. 9%～6. 6%之间,日间精密性CV在7. 7%～11. 9%之间。接种疫苗后的血清样本检测值显著高于自然感染样本(P 0. 05),接种疫苗后的血清样本检测值与PBNA法检测结果具有显著相关性(HPV16和HPV18抗体检测结果的r值分别为0. 727和0. 800)。结论成功建立了HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,且具有较好的特异性、准确性、精密性,可用于HPV疫苗免疫效果评价及疫苗上市后抗体水平的监测。     

Pre-Omicron Vaccine Breakthrough Infection Induces Superior Cross-Neutralization against SARS-CoV-2 Omicron BA.1 Compared to Infection Alone

SARS-CoV-2 variants raise concern because of their high transmissibility and their ability to evade neutralizing antibodies elicited by prior infection or by vaccination. Here, we compared the neutralizing abilities of sera from 70 unvaccinated COVID-19 patients infected before the emergence of variants of concern (VOCs) and of 16 vaccine breakthrough infection (BTI) cases infected with Gamma or Delta against the ancestral B.1 strain, the Gamma, Delta and Omicron BA.1 VOCs using live virus. We further determined antibody levels against the Nucleocapsid (N) and full Spike proteins, the receptor-binding domain (RBD) and the N-terminal domain (NTD) of the Spike protein. Convalescent sera featured considerable variability in the neutralization of B.1 and in the cross-neutralization of different strains. Their neutralizing capacity moderately correlated with antibody levels against the Spike protein and the RBD. All but one convalescent serum failed to neutralize Omicron BA.1. Overall, convalescent sera from patients with moderate disease had higher antibody levels and displayed a higher neutralizing ability against all strains than patients with mild or severe forms of the disease. The sera from BTI cases fell into one of two categories: half the sera had a high neutralizing activity against the ancestral B.1 strain as well as against the infecting strain, while the other half had no or a very low neutralizing activity against all strains. Although antibody levels against the spike protein and the RBD were lower in BTI sera than in unvaccinated convalescent sera, most neutralizing sera also retained partial neutralizing activity against Omicron BA.1, suggestive of a better cross-neutralization and higher affinity of vaccine-elicited antibodies over virus-induced antibodies. Accordingly, the IC50: antibody level ratios were comparable for BTI and convalescent sera, but remained lower in the neutralizing convalescent sera from patients with moderate disease than in BTI sera. The neutralizing activity of BTI sera was strongly correlated with antibodies against the Spike protein and the RBD. Together, these findings highlight qualitative differences in antibody responses elicited by infection in vaccinated and unvaccinated individuals. They further indicate that breakthrough infection with a pre-Omicron variant boosts immunity and induces cross-neutralizing antibodies against different strains, including Omicron BA.1.     

接种人用狂犬病疫苗后的抗体水平分析

599例犬咬伤患者常规接种狂犬病疫苗后，用ELISA方法检测抗体阳性515人，阳性率为85．98％，未检出抗体84人，其中69人又加强接种2针疫苗，有57人抗体阳转，阳转率为82．60％。在抗体阳性的515人中，不同性别间的抗体水平无显著差异，但20岁以下年龄组抗体阳性率高于21岁以上年龄组（P＜0．01）。     

吸附百白破乙肝(CHO)四联疫苗接种反应及血清学效果观察

目的　考察百日咳、白喉、破伤风、乙肝四联疫苗的接种反应及血清学效果。方法　选择足月分娩、母亲乙肝表面抗原阴性、身体健康的新生儿为接种对象。一期观察 6 0例 ,随机分为 3组 ,第 1组按 2、4、6月龄接种四联疫苗 ;第 2组按 3、4、5月龄接种四联疫苗 ;第 3组按 3、4、5月龄接种三联疫苗。二期观察 35 0人 ,随机分为3组 ,第 1组按 2、4、6月龄接种四联疫苗 ,118人 ;第 2组按 2、4、6月龄左臂接种乙肝疫苗 ,右臂接种三联疫苗 ,114人 ;第 3组按 0、1、6月龄接种乙肝疫苗 ,3、4、5月龄接种三联疫苗 ,118人。结果　一期观察 1组、2组和 3组体温弱反应分别为 5 0 %、10 %和 2 0 % ,无中强反应和局部反应。二期观察试验组体温弱反应为 4 2 4 % ,中反应 1 6 9% ,无强反应。局部弱反应为 0 85 % ,无中、强反应。血清学检测百日咳、白喉、破伤风、乙肝阳转率均大于 90 %。结论　吸附四联疫苗具有较好的安全性 ,采用 2、4、6月龄接种程序可有效诱导产生百日咳、白喉、破伤风、乙肝的保护性抗体反应     

b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫学特性

目的制备ｂ型流感嗜血杆菌结合疫苗,观察免疫学特性。方法通过已二酸二肼（ＡＤＨ）,将纯 化的荚膜多糖抗原与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合,制备ｂ型流感嗜血杆菌结合物。以２．５μｇ多糖或含２．５μｇ 多糖结合物经皮下免疫ＮＩＨ雌性小鼠,用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＰＲＰ抗体及Ｔ抗体水平。结果用本实验方法提 取的多糖、合成的多糖衍生物、多糖－蛋白结合物都具有ｂ型流感嗜血杆菌的抗原特异性,其化学组成及结构特性 与国外文献报道结果基本一致。单独用多糖免疫小鼠未能诱导高水平的血清ＰＲＰ抗体,而用结合物免疫小鼠却诱 导出高水平的血清ＰＲＰ抗体及ＴＴ抗体,并存在免疫记忆性。结论本实验为进一步临床评价结合物的体内保护 性效果提供了实验基础。     

破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒的研制

目的 研制检测破伤风IgG的酶联检测试剂盒。方法 以精制破伤风类毒素进一步纯化后作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG作为抗体制备ELISA试剂盒,并进行敏感性、特异性及重复性检测。结果 试剂盒敏感性可达0.003 9 IU/ml,特异性达95％以上,重复性好,CV<7％,试剂盒置于37℃、7 d敏感性无明显改变。结论 成功地制备了破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒。     

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制

目的 制备安全有效的Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法 通过碳二亚胺（ＥＤＡＣ）将Ａ群脑膜 炎球菌多糖－ＡＨ衍生物与破伤风类毒素（ＴＴ）蛋白共价结合,制备Ａ群脑膜炎球菌多糖结合疫苗。结果 所结合 成的多糖－蛋白结合物,具有Ａ群脑膜炎球菌多糖和破伤风类毒素抗原特异性。单独用多糖免疫小鼠未能诱导出 高水平的血清Ｐｓ抗体,而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清Ｐｓ抗体及ＴＴ抗体,并有免疫记忆性。结论 为进一步临床评价该疫苗的人群免疫效果提供了实验基础。     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

森林脑炎纯化疫苗和灭活疫苗的接种反应及免疫效果观察

目的　观察森林脑炎纯化疫苗及森林脑炎灭活疫苗的接种反应和免疫效果。方法　两种疫苗分别于接种后 ,观察局部反应和全身反应 ,免疫血清用酶联免疫吸附法 (ELISA)和蚀斑减少试验法检测其中和抗体效价。结果　森林脑炎灭活疫苗局部反应和全身反应的发生率分别为 2 3 0. 8%和 15 . 38% ,人群抗体 2针接种后约 1/3检出阳性 ,3针接种后约 1/ 2检出阳性 ;森林脑炎纯化疫苗无 1例全身反应 ,局部反应为注射部位一过性轻度疼痛 ,发生率为 1 .13% ,2针接种后 85 %人检出阳性 ,免疫剂量 1 0ml组优于 0. 5ml组 ,差异有显著意义。结论　森林脑炎灭活疫苗副反应发生率高 ,免疫效果差 ,森林脑炎纯化疫苗副反应轻微 ,免疫后中和抗体阳转率高。     

狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用

目的建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFIT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定最佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性。结果狂犬病病毒抗原AG∶CTN-1=4∶1为最适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00～33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),最低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU。该方法检测人血清白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%～7.84%之间;回收率在97.25%～104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801。结论已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查。