不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒抗体检测试剂性能评估

目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。     

人类免疫缺陷病毒抗体ELISA S/CO比值、核酸定量检测结果与确证检测阳性结果的相关性分析

目的探讨人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体ELISA检测S/CO比值、核酸定量检测结果与确证检测阳性结果的相关性。方法应用2种国产[北京万泰生物药业股份有限公司(以下简称万泰)和上海科华生物工程股份有限公司(以下简称科华)]抗-HIV诊断试剂(ELISA法)、1种进口(美国Bio-Rad公司,以下简称Bio-Rad)HIV抗原抗体诊断试剂(ELISA法)、1种核酸检测试剂(RT-PCR-荧光探针法)及WB确证试剂(Western blot法)对86份抗-HIV初筛阳性血浆样本进行检测,并进行相关性分析。结果 86份样本中,3种ELISA试剂检出的53份共同阳性样本WB确证结果均为阳性;25份共同阴性样本WB确证结果 20份为阴性,5份为不确定;检测结果不一致的8份样本WB确证结果 3份为不确定,5份为阴性。万泰和科华试剂检测样本S/CO比值≥10时,96.30%和100%的样本为WB确证阳性,1≤S/CO比值<10时,均有20%的样本为WB确证阳性;Bio-Rad试剂检测样本S/CO比值≥5时,100%的样本为WB确证阳性。核酸检测病毒载量≥103IU/ml时,97.87%的样本为WB确证阳性;0 IU/ml<病毒载量<103IU/ml时,53.85%的样本为WB确证阳性。86份样本中有15份ELISA检测、核酸检测及确证检测结果不完全一致,其中4份样本为核酸检测阳性,确证试剂检测结果为不确定,疑似HIV-1感染者样本。结论抗-HIV ELISA S/CO比值及核酸定量检测结果与确证检测阳性结果有一定相关性,S/CO比值及病毒载量对确证检测阳性结果的判定具有一定参考价值。     

3种不同方法检测梅毒的结果比较分析

目的 探讨与分析3种不同方法检测梅毒的临床价值。方法 对我院98例梅毒患者与50例健康体检者均分别采用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)检测血清梅毒,对3组检测方法的结果进行比较分析。结果 TRUST的试验检验符合率为86.7%,TPPA的试验检验符合率为100%,胶体金的试验检验符合率为99.0%。TPPA与TRUST相比(χ2=13.92,P<0.01)有统计学差异。胶体金与TRUST相比(χ2=11.08,P<0.01)有统计学差异。结论 胶体金法的检出率明显优于TRUST,但与TPPA相比则无明显差异,故胶体金法在对梅毒的检测中比TRUST的准确率高,比TPPA更易操作,且成本较低。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。     

白斑综合征病毒胶体金免疫层析试剂板的研制

目的研制检测对虾中白斑综合征病毒(white spot syndrome virum,WSSV)的胶体金免疫层析试剂板。方法分别制备抗WSSV单克隆抗体和多克隆抗体,并用胶体金标记单克隆抗体,将胶体金标记的抗WSSV单克隆抗体包被在金标垫上,抗WSSV多克隆抗体和羊抗鼠Ig G分别包被在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上,组装成试剂板,通过双抗体夹心法检测样品中WSSV含量。确定试剂板检测WSSV的最低检出限,验证其特异性,并检测其与ELISA结果的符合率及稳定性。结果该试剂板对WSSV的最低检出限为1.0 mg/kg,特异性强,与ELISA实验结果相符,在室温条件下(20~25℃)可保存12个月。整个检测所需时间为8~10 min。结论该试剂板能快速有效地筛查WSSV,适合现场快速检测。     

梅毒螺旋体抗体快检试剂国家参考品的研制

目的建立梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)抗体快检试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对134批TP血浆的复核、确证,组建TP抗体快检试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果 TP抗体快检试剂国家参考品由20份阴性、10份阳性、3份最低检出限及1份重复性样品组成。质量标准为20份阴性参考品中应至少18份为阴性,10份阳性参考品中应至少9份为阳性,最低检出限参考品中应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,重复性参考品检测10次,应均为TP抗体阳性,其颜色反应应一致。参考品的均匀性及稳定性均符合国家参考品标准。结论研制的参考品可作为TP抗体快检试剂的质量控制及评价使用。     

梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品的研制

目的建立梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品。方法通过对84份血浆的复核、确证,组建梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品,并将3份效价检测用参考品溯源至国际标准品,经5家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品由25份阴性及25份阳性样品组成,3份效价检测用参考品的效价定值分别为12、10和5 IU/mL。协助标定确证25份阴性参考品均为阴性,25份阳性参考品均为阳性,效价参考品的效价检测值均≤0. 625 IU/mL。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论研制的参考品可作为梅毒非特异性抗体检测试剂的质量控制和评价使用。     

酶联免疫双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒抗体试剂的质量评价

目的评价酶联免疫双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体试剂的质量。方法采用3个厂家间接酶联免疫法的HCV抗体试剂各1批(A-1、A-2、A-3)和酶联免疫双抗原夹心法的HCV抗体试剂各1批(B-1、B-2、B-3),分别检测经Ortho和Dia Sorin公司抗HCV EIA试剂、CHIRON公司RIBA HCV 3.0 SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测的304份血浆样本(抗-HCV阳性139份及抗-HCV阴性165份);并经HCV BLOT 3.0确证试剂检测HCV假阴性样本的抗体谱。结果试剂A-1、A-2、A-3的阳性检出率分别为95.0%、97.8%、97.1%,阴性检出率分别为98.2%、92.7%、95.2%;试剂B-1、B-2、B-3的阳性检出率分别为98.6%、98.6%、99.3%,阴性检出率分别为95.8%、95.8%、96.4%,总符合率分别为96.7%∶97%、95.1∶97%、96.1%∶97.7%,不同厂家酶联免疫双抗原夹心法的HCV抗体试剂灵敏度均有提高,两种酶联免疫法的6种HCV抗体试剂检测均有不同份数的假阳性样本出现,该6种HCV抗体试剂的特异性无显著差异(P0.05)。HCV假阴性样本抗体谱分析结果表明,各HCV抗体试剂均有漏检现象。结论酶联免疫双抗原夹心法检测HCV抗体试剂具有较高的灵敏度和特异性,可在献血源筛查中推广应用。     

胶体金法检测血清Hp-IgG抗体的应用价值

目的比较胶体金法检测血清Hp-IgG抗体与酶联免疫吸附试验(ELISA)法、尿素酶法检测血清Hp-IgG抗体结果之间的差异。与诊断标准进行对比,评价胶体金法检测Hp-IgG抗体的可行性。方法对36例尿素酶试验阳性和26例尿素酶试验阴性患者做ELISA、胶体金法检测血清Hp-IgG抗体。结果对比3种方法结果无显著差异(P>0.05)。结论胶体金法检测Hp-IgG抗体灵敏度高,特异性强,快速方便,对人体刺激性小,不需特殊的仪器设备,是较为理想的幽门螺杆菌(Hp)感染者的筛查实验。     

戊型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒制备及功能验证

目的：建立一种快速、简单实用的检测戊型肝炎病毒IgM抗体的胶体金免疫层析法。方法：用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用鼠源人IgM单克隆抗体进行胶体金标记,采用胶体金免疫层析技术及间接法原理检测戊型肝炎病毒IgM抗体,优化抗体最适宜浓度、抗体稀释度及包被抗原浓度,利用市售ELISA免疫吸附试剂对100例临床血清标本进行比较实验。结果：鼠抗人-IgM抗体标记最适合蛋白用量为10 μg/mL、金标鼠抗人-IgM抗体最适合的稀释度为8%、最佳抗原包被浓度为1.0 mg/mL;与酶联分析法对比,阳性符合率98.1%,阴性符合率100%。结论：HEV-IgM胶体金免疫层析试剂,方法简便、快速,适应戊型肝炎早期感染的快速检测及科研工作需要。     

尿液HIV-1抗体室内质控品的制备及应用

目的制备尿液HIV-1抗体室内质控品(简称尿液室内质控品),并对其进行均一性、稳定性评价及应用,以保证实验室检测的精密度。方法用HIV-1抗体阴性尿液样本倍比稀释HIV-1抗体阳性尿液样本,采用HIV-1尿液抗体检测试剂盒(ELISA)进行检测,根据检测结果吸光度/临界值比值(S/CO)来确定呈弱反应性的尿液样本的稀释倍数,制备尿液室内质控品。采用HIV-1尿液检测试剂盒评价尿液室内质控品的均一性和稳定性。连续检测20次尿液室内质控品,建立Levy-Jennings质控图并进行分析。结果 HIV-1抗体阳性尿液样本按1∶4比例稀释后所得样本为尿液室内质控品。均一性评价中,随机抽取的20支尿液室内质控品检测结果的变异系数(CV)为15.89%;稳定性评价中,随机抽取的20支尿液室内质控品在37℃、室温、2~8℃、-20℃放置不同时间检测结果的CV分别为8.69%、17.47%、18.08%和23.04%。Levy-Jennings质控图的S/CO比值的平均值为5.54,标准差为0.48。在常规条件下,尿液室内质控品均在控;在不同反应条件下,尿液室内质控品出现告警或失控。结论制备的尿液HIV-1室内质控品的稳定性、均一性较好,可用于控制实验室尿液HIV-1抗体检测的质量。     

人心肌脂肪酸结合蛋白胶体金快速检测试剂条的研制

建立一种以胶体金为基础的心肌脂肪酸结合蛋白质(H-FAB)免疫层析快速检测方法。方法以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析试纸条,并对其特异性、灵敏度以及临床应用进行评价。最低检出限为10 ng·m L-1;10 min内即可观察结果;检测急性心肌梗塞(AMI)患者46例、正常人群85例,试纸条的敏感度为86.96%,特异度为97.65%,约登指数为0.8461,kappa值为0.8633,表明试纸条与临床确定的结果几乎一致。该方法方便、快捷,能有效的检测H-FAB,胶体金免疫层析试纸的研制为心肌梗塞的快速诊断与筛查奠定了基础。     

罗式电化学发光法在乙型肝炎疫苗质量控制中的应用

目的用罗式电化学发光法检测乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的体外相对效力(RP),以取代雅培珠式EIA法。方法分别用科华板式EIA法、雅培MUREX板式EIA法、罗式电化学发光法与雅培珠式EIA法对比检测重组乙型肝炎疫苗(酵母)生产过程中纯化工序关键样品的HBsAg含量和疫苗的RP值,并分析3种方法的精密性。结果科华板式EIA法和雅培MUREX板式EIA法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量结果与雅培珠式EIA法比较,差异均有统计学意义,且精密性均不佳;罗式电化学发光法检测纯化工序关键样品的HBsAg含量及疫苗的RP值结果与雅培珠式EIA法比较,差异均无统计学意义,且精密性均良好。结论罗式电化学发光法可以替代雅培珠式EIA法,检测乙肝疫苗(酵母)生产过程中HBsAg含量和疫苗的RP值。     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

2种不同试剂筛查无偿献血者HIV抗体结果分析

目的 了解不同试剂对无偿献血者HIV抗体进行初筛检测有无差异,以评价其质量及实用性,确保血液质量。方法 通过使用国产和进口试剂酶联免疫吸附试验对30125份相同献血者样本进行HIV抗体初筛检测,对2种试剂的筛查结果进行比较。结果 2种试剂初筛检测结果阳性47例,其中国产单种试剂初筛检测阳性25例,进口单种试剂阳性18例,国产与进口双试剂阳性4例,经送检CDC确认实验室确认有3例样本为抗-HIV抗体阳性。这3例样本均为国产与进口双试剂检测阳性的样本。通过以上数据对比,经配对χ2检验,国产试剂和进口试剂初筛检测HIV抗体的阳性率无显著性差异。结论 提示有必要提高目前国产与进口酶联免疫法试剂的特异性,减少假阳性反应,减少血液浪费与血源流失。     

不同企业生产的HIV抗体确认试剂检测结果的比较

目的比较3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂的检测结果。方法分别应用3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂,检测64份经多家HIV抗体酶联免疫试剂检测不一致的样本,比较检测结果的差异,并对不确定样本的常见非特异性条带进行分析。结果 3家不同企业生产的HIV抗体确认试剂检测64份样本均为阴性或不确定,但各试剂检测为阴性和不确定样本的比例差别较大,INNO-LIATMHIVI/ⅡScore与NEWLAVBLOT1试剂、INNO-LIATMHIVⅠ/ⅡScore与HIVBLOT2.2试剂及NEWLAVBLOT1与HIVBLOT2.2试剂检测结果的符合率分别为57.8%、28.1%和48.4%,且每两家试剂检测结果之间差异均有统计学意义(P均<0.01)。最易产生不确定结果的条带主要集中在p24和p17上。结论 HIV抗体确认试剂质量差别较大,应加强其质量控制并规范检测标准。     

ELISA试验灰区设置方法的探讨

目的探讨ELISA试验灰区设置方法,以防止弱阳性标本漏检。方法对不同浓度的HBsAg强阳性血清进行ELISA检测,得出一系列的S/CO()值和变异系数(CV)值;以S/CO()值为自变量、CV为应变量,拟合方程,得到反映S/CO值与CV值的对应关系的方程式;根据方程计算S/CO()值为1时(临界值血清)的CV;根据灰区计算公式1±2×CV,计算灰区上下限,即为灰区的范围。结果HBsAg强阳性血清ELISA试验的S/CO()随血清浓度的增加而增大,CV则相应变小。HBsAgELISA诊断试剂试验灰区范围(S/CO值)为:0.686～1.314。结论本方法得到的ELISA试验灰区范围比较接近真实状态,比按固定比例设定灰区更具合理性和科学性。     

抗新型冠状病毒抗体样本盘在其胶体金测试卡质量评价中的应用

目的 建立抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)抗体样本盘,并应用于SARS-CoV-2抗体胶体金测试卡的质量评价.方法 采用新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)康复者恢复期经病毒灭活的血浆样本建立SARS-CoV-2抗体样本盘,并进行优化.收集国内3个厂家(厂家S、...     

呼吸道合胞病毒抗体效价3种检测方法的建立及比较

目的建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)抗体效价的3种检测方法,并进行比较。方法棋盘滴定法优化ELISA法的包被抗原及酶标二抗的浓度,并检测该方法的线性范围及重复性;同时建立微量细胞中和试验法和蚀斑减少中和试验法,检测两种方法的重复性。用建立的3种方法及市售RSV抗体ELISA检测试剂盒同时检测55份健康人血清样本,并将两种ELISA法与两种中和抗体效价检测方法间的相关性进行两两比较。结果 ELISA法中包被抗原为10μg/ml及HRP标记的山羊抗人Ig G稀释度为1∶30 000时是最佳组合;在38.00~2.375 U/ml范围内,抗体浓度与A_(450/630)值呈良好线性关系,R~2=0.981 4;高、中、低3个浓度样本的变异系数(CV)均10%。微量细胞中和试验7 d后,细胞病变明显,细胞成片脱落;连续6次检测抗RSV多克隆抗体中和效价的CV值为4.2%。RSV感染Vero细胞7 d后出现明显的蚀斑形态,结晶紫染色后蚀斑边缘清晰;连续6次检测兔抗RSV抗血清效价的CV值为6.81%。本实验建立的ELISA法与市售ELISA试剂盒的相关系数(R)为0.787,微量细胞中和试验与蚀斑减少中和试验的R为0.937。结论成功建立了3种RSV抗体效价检测方法,本实验建立的ELISA法与市售ELISA试剂盒间及两种中和抗体检测方法间具有良好的相关性。     

国产第四代HIV血液筛查试剂的质量评价

目的评价国产第四代HIV血液筛查试剂的质量。方法利用HIV-1 p24抗原国家参考品和HIV抗体国家参考品,对2012年3月²013年3月间7个厂家(A2013年3月间7个厂家(A^G)生产的33批第四代HIV血液筛查试剂进行评价。分析A(进口)、B、C试剂对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5检测的S/CO值的变化趋势,及其对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5、强阳性HIV-2型抗体国家参考品18号和中等强度阳性HIV-2型抗体国家参考品19号检测的批间变异系数,计算不同试剂的最低检出量理论值。结果各试剂均符合国家参考品的要求,除A(进口)和C试剂外均有非特异阳性出现。国内、外试剂检测结果均较稳定,未见超过±3 SD的异常结果。P5、18号、19号参考品的批间变异系数均不高于25%,A(进口)试剂的批间精密性优于国产同类试剂。p24抗原参考品最低检出量均值为3.2 IU/ml。82%(27/33)试剂优于HIV-1 p24抗原最低检出量国家标准要求,70%(23/33)的试剂优于HIV抗体最低检出量国家标准要求。结论 2012年3月G)生产的33批第四代HIV血液筛查试剂进行评价。分析A(进口)、B、C试剂对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5检测的S/CO值的变化趋势,及其对HIV-1 p24抗原弱阳性国家参考品P5、强阳性HIV-2型抗体国家参考品18号和中等强度阳性HIV-2型抗体国家参考品19号检测的批间变异系数,计算不同试剂的最低检出量理论值。结果各试剂均符合国家参考品的要求,除A(进口)和C试剂外均有非特异阳性出现。国内、外试剂检测结果均较稳定,未见超过±3 SD的异常结果。P5、18号、19号参考品的批间变异系数均不高于25%,A(进口)试剂的批间精密性优于国产同类试剂。p24抗原参考品最低检出量均值为3.2 IU/ml。82%(27/33)试剂优于HIV-1 p24抗原最低检出量国家标准要求,70%(23/33)的试剂优于HIV抗体最低检出量国家标准要求。结论 2012年3月²013年3月期间国产第四代HIV血液筛查试剂均符合国家现行标准,但与进口试剂相比,国产第四代HIV血液筛查试剂在最低检出量和批间精密性上尚有提高的空间。