一次敲除BAT2同时过表达Lg-ATF1对啤酒酵母产醇酯的影响

乙酸乙酯和高级醇是啤酒中的重要风味物质,为了探究BAT2基因和Lg-ATF1基因对啤酒酵母产醇酯能力的影响,进而解决啤酒中存在的醇高酯低的问题。本研究通过酶切连接法构建重组质粒p UC-PLABBK,采用醋酸锂转化法和胞内同源重组技术,以多倍体啤酒酵母菌株S5为出发菌株,Kan MX基因作为筛选标记,最终获得过量表达Lg-ATF1基因同时敲除BAT2基因的重组菌株S5-Lg。通过啤酒发酵实验和数字PCR探究重组酵母菌株S5-Lg与出发菌株S5醇酯含量与相关基因表达量的变化。结果显示,与出发菌株相比,S5-Lg的总高级醇生成量降低9.12%,其中异丁醇和异戊醇的生成量分别降低了10.63%和9.55%,乙酸乙酯生成量提升了26.81%,BAT2基因表达量降低45.72%,Lg-ATF1基因表达量大幅提升。BAT2基因和Lg-ATF1基因可以影响啤酒酵母产生高级醇和乙酸乙酯的含量,对改善啤酒风味有重要参考意义。     

空间诱变优良上面啤酒酵母发酵性能研究

以中德啤酒技术中心303上面啤酒酵母为出发菌株,将经过"神舟九号"宇宙飞船搭载进行航天诱变的303上面啤酒酵母菌进行分离得到若干菌株,对其中3株酵母的酵母凝聚性、发酵度、双乙酰还原能力、外观糖度变化、高级醇和酯类物质进行检测,从而选出1株优良的上面啤酒酵母菌。     

BDH2基因过表达对啤酒酵母双乙酰代谢的影响

利用基因工程手段,采用PCR技术扩增啤酒酵母S2中的双乙酰还原酶基因BDH2,构建了BDH2基因整合过表达的重组酵母菌株B2Z。利用real-time PCR的方法对酵母BDH2基因的表达水平进行了检测,相比于出发菌株,其BDH2基因的表达水平提高到原来的7.35倍。啤酒发酵实验表明,BDH2基因的过表达对双乙酰的降低有效果,B2Z双乙酰的峰值和双乙酰最终含量比出发菌株S2分别降低42.61%和32.73%,其他啤酒指标如酒精度、发酵度、残糖和风味物质与出发菌株略有变化,但各物质的浓度都在优质啤酒建议的范围之内,符合啤酒发酵的指标要求。     

航天诱变啤酒酵母菌株的复壮与筛选

对经航天诱变的啤酒酵母菌进行复壮,并对复壮后的酵母菌株从细胞大小、菌落形态、发酵力、增殖情况以及死灭温度等几方面进行了筛选。试验结果表明,诱变后菌株的发酵力、生长速度均优于出发菌株,死灭温度基本相同。并依此筛选出了1株各种生理性状都较好的诱变菌株,其适宜的生长培养基为麦芽汁培养基,适宜的培养时间为24h。     

谷氨酸棒杆菌L-色氨酸营养缺陷型突变 及其高产菌株的选育

目的以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)HX-22为出发菌株,研究了目标发酵产物L-色氨酸合成途径交叉反馈抑制途径代谢突变与色氨酸分解代谢类似物抗性的营养缺陷型突变诱导过程及L-色氨酸高产复合突变菌株的筛选。方法采用硫酸二乙酯、紫外线、钴60γ-射线等诱变方法交叉处理起始与突变菌株,通过营养缺陷表型和自杀代谢底物抗性的筛选方法,定向突变和选育L-色氨酸合成与分解代谢突变的色氨酸高产菌株。结果通过多次连续营养缺陷型诱变选育,筛选出一株具有分支酸-Trp/Phe/Tyr代谢途径L-Phe和L-Tyr合成缺陷型和L-Trp分解代谢自杀代谢底物抗性的L-色氨酸高产菌HX22-118(ΔPhe~--ΔTyr~--5FT~r-4FP~r-SG~r);通过连续传代10次发酵,色氨酸产酸最高达到28.4 g/L,平均27.1g/L,较出发菌株HX22产酸水平提高81.8%。结论选育出的高产菌株具有多重代谢途径突变(ΔPhe~--ΔTyr~--5FT~r-4FP~r-SG~r),突变体具有良好的遗传稳定性,具有后续工业化生产应用潜力。     

航天诱变啤酒酵母菌株的复壮与筛选

对经航天诱变的啤酒酵母菌进行复壮,并对复壮后的酵母菌株从细胞大小、菌落形态、发酵力、增殖情况以及死灭温度等几方面进行了筛选.试验结果表明,诱变后菌株的发酵力、生长速度均优于出发菌株,死灭温度基本相同.并依此筛选出了l株各种生理性状都较好的诱变菌株,其适宜的生长培养基为麦芽汁培养基,适宜的培养时间为24h.     

超高压诱变选育富锌啤酒酵母菌株的研究

以啤酒酵母为出发菌株,采用超高压诱变方法诱变选育高富集锌的酵母菌株。优化了超高压处理的工艺条件,并基于菌株对锌离子的耐受性和富集性,对菌株进行筛选。结果表明,培养10 h的啤酒酵母菌处于对数生长期,适宜于诱变;超高压处理压力250 MPa、保压时间20 min为诱变的最佳工艺条件;成功选育出一株高富集锌的突变菌株,其细胞锌含量达2.75 mg/g,是出发菌的6.55倍。     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌诱变选育及基因克隆表达

为获得β-1,3-1,4-葡聚糖酶高产菌株,以高地芽孢杆菌YC-9为出发菌株,通过亚硝基胍(nitrosoguanidine,NTG)和低能N+束诱变育种,筛选和选育得到两株突变株N-2-2和10-30s-3,发酵培养60 h,酶活力分别达到28.6 U/m L和36.1 U/m L,分别是出发菌株的2.36倍和2.98倍,与YC-9菌株相比,突变菌株菌体生长下降但发酵产酶量增加。进一步将β-1,3-1,4-葡聚糖酶克隆并在大肠杆菌中成功表达,经过30℃诱导6 h后,胞内酶活力达79.2 U/m L,为出发菌株的6.5倍。     

ATF1过表达和BAT2敲除酿酒酵母发酵性能的研究

以啤酒酵母工业菌株S5为对照,对过表达醇乙酰基转移酶编码基因ATF1同时敲除氨基酸转氨酶编码基因BAT2酿酒酵母工程菌株S5-1进行发酵性能的研究。结果表明,与出发菌株相比,突变株生长状况、发酵速度、酒精度等基本发酵性能没有明显变化,而突变株发酵后的乙酸酯总量有较大程度的提升,为85.44mg/L,提高了6.96倍,高级醇总量有较大程度的下降,为79.25mg/L,降低了27.28%。研究结果为啤酒风味的改善奠定了良好的基础。     

激光-氯化锂复合诱变选育絮凝性适中的啤酒酵母

以絮凝性弱而其他发酵指标皆可的啤酒酵母菌Fs为出发菌株,以激光-氯化锂为复合诱变剂诱变啤酒酵母得到一株絮凝性适中的啤酒酵母,絮凝性为37.9%,比原菌株提高了1.61倍.用该菌株酿造的啤酒,发酵液中双乙酰含量为0.048mg/L,风味指标几乎不变.     

超高浓酿造下抗葡萄糖阻遏啤酒酵母的筛选

根据高浓发酵下(16°P)发酵度的高低,挑选下面啤酒酵母C12作为出发菌株。经过2-去氧-D-葡萄糖的定向驯养、抗性平板分离初筛以及复筛验证等步骤,筛选出一株抗葡萄糖阻遏效应的菌株CM23。将该菌株在18°P麦汁15℃条件下进行3L的EBC小型啤酒发酵实验并测定发酵指标。结果表明:与出发菌株相比,CM23的降糖速度提高了37%,达到1.8°P/d,真正发酵度达到66%,且双乙酰还原能力以及啤酒中主要风味物质含量基本不变。CM23是一株具有工业应用前景的啤酒超高浓酿造酵母菌株。     

啤酒屋酵母菌株筛选技术的探讨

鲜啤酒以其独特的风味、营养、时尚而流行于都市生活。啤酒酵母菌株的特性直接决定着鲜啤酒的质量,在生产中采用不同的菌株和生产工艺,可酿造出不同类型的啤酒。笔者根据实际经验,提出了啤酒屋酵母菌株分离的技术要点,并依此进行了啤酒屋酵母菌株的筛选。.     

抗老化啤酒酵母菌株的诱变选育

谷胱甘肽（GSH）在啤酒中具有抗老化作用,选育高产谷胱甘肽的啤酒酵母菌株有助于改善啤酒抗老化性能。以啤酒酵母S5为出发菌株,经紫外诱变和硫酸二乙酯（DES）诱变后,获得突变株SC67,其GSH胞内生成量为15．238mg／L,胞内含量为11．292mg／g,较S5分别提高91．4％和57．8％。SC67发酵所得啤酒中胞外谷胱甘肽含量（6．43mg／L）较S5（1．35mg／L）显著提高,啤酒抗氧化性能得到明显改善,DPPH自由基清除率较s5提高1312％;TBA值下降7．1％;RSV值提高49．2％。     

基因重组酵母菌株的发酵特性研究

采用现代生物技术，获得具有β-葡聚糖酶基因序列兼具蛋白酶A缺陷型的基因重组酵母菌株。本研究通过实验室扩培和200L小试设备的生产试验，鉴定了该菌株具有β-葡聚糖酶和蛋白酶A的酶活特性，且遗传稳定。研究还表明，使用该菌株，啤酒的易滤性和泡持性都得到了提高，且发酵的各项主要性能正常。     

GABA高产菌株的筛选、鉴定及诱变选育

从火龙果果实表面上筛选出一株发酵产γ-氨基丁酸(GABA)白色菌株,经形态学观察、生理生化试验和18S rDNA测序分析,鉴定为假丝酵母菌菌株(Candida.sp),命名为C2。C2作为出发菌株,分别采用紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变方法选育高产γ-氨基丁酸菌株。与出发菌株相比,紫外诱变菌株γ-氨基丁酸产量增加了40.25%,亚硝基胍诱变菌株γ-氨基丁酸产量增加了62.83%。通过紫外线和亚硝基胍复合诱变,得到正向突变株,其中Y6突变株遗传性状稳定,γ-氨基丁酸产量达2.561 g/L,产量比诱变前提高了3.1倍。     

双重筛选产甘油假丝酵母营养缺陷型菌株及其发酵性能

运用化学诱变的手段 ,以亚硝基胍为诱变剂 ,以产甘油假丝酵母WL2 0 0 2 5为出发菌株 ,诱变获得 2 7株尿嘧啶缺陷型突变株 .并对所获菌株进行了传代稳定性试验和稳定性试验 ,其中 1# 、2 2 # 、2 3# 、2 5 # 、2 6 # 菌株稳定性优良 ,适宜作为进行酵母转化的带有遗传标记的工具菌株 .同时 ,从所获突变株中选出两株进行生长特性的研究和发酵性能的检测 .研究表明 ,缺陷型菌株的生长速度明显慢于亲株 ,但其产甘油的性状并没有较大的改变 .     

新疆哈萨克族奶酪中潜在益生酵母菌的筛选

前期,从新疆哈萨克族奶酪中分离到127株酵母菌,选取其中生长状况良好18株菌进行潜在益生酵母菌筛选试验。在不同胆盐质量浓度、不同p H值、模拟人体胃液及温度的条件下进行培养,并以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,观察其抑制有害菌的能力,同时对菌株的表面疏水性及自动聚集能力也进行测定,系统的分析了菌株的益生特性。最终,在18株酵母菌中得到4株菌(Y1、H1、Y36-6、L4)在以上条件下有较好的存活率,为潜在益生酵母菌。并对这4株酵母菌进行生理生化试验及26S r DNA序列测定,将结果同NCBI数据库中提供的酵母菌序列进行比对,以DNA Star软件进行相似性分析,得到H1菌株属于马克斯克鲁维酵母菌属(Kluyveromyces)相似度为99%,Y1菌株属于酿酒酵母属(Saccharomycete)相似度为99%,Y36-6和L4属于毕赤酵母属(Pichia kudriavzevii)相似度99%。     

利用亮氨酸缺陷型酵母降低啤酒中杂醇油含量

通过研究α-氨基氮总量及不同氨基酸对啤酒发酵过程中杂醇油生成的影响，得出亮氨酸的影响最为显著。用4株亮氨酸缺陷型突变株与出发菌株进行发酵性能比较，杂醇油生成量比出发菌株减少了20％以上。在啤酒发酵过程中，麦汁中的游离α-氨基氮含量190mg／L时，杂醇油生成量最低，过高或过低都会增加杂醇油的生成。当麦汁中游离α-氨基氮含量为140mg／L时，出发菌株SC-4的杂醇油生成量增加了48．93％，突变株的杂醇油生成量仅增加了7．66％；当麦汁中α-氨基氮含量为240mg／L时，出发菌株SC-4的杂醇油生成量增加了35．95％．突变株的杂醇油生成量仅增加了4．40％。     

乙醛法筛选抗乙醛啤酒酵母菌株的应用研究

乙醛是使啤酒产生硬纸板味、烂苹果味的主要来源,对啤酒品质有较大影响。本实验采用紫外诱变与高浓乙醛平板选育结合法,将筛选得到的菌株(共20株)与出发菌株进行低温发酵实验,然后利用气相色谱法测定菌株发酵液乙醛含量,并将其与出发菌株乙醛含量相比较。对具有较大乙醛降幅的菌株(共3株)进行乙醇脱氢酶活性的验证及稳定性实验,由此筛选出抗乙醛啤酒酵母菌株。该菌株可抵抗高浓度乙醛环境,从而快速还原代谢产生的乙醛,其乙醛含量为4.42 mg/L±0.14 mg/L,较出发菌株降低了71.13%;乙醇脱氢酶(ADH1、ADH3与ADH4)活性显著高于出发菌株(增幅为88.80%),且遗传稳定性表现良好。     

啤酒厂酵母菌株筛选技术

酵母菌株的质量直接关系到啤酒的质量。文中系统地介绍了啤酒酵母菌株的分离及测定各项生理性能技术，从而有效地防止了生产中菌株的变异。