金黄色葡萄球菌定量检测能力验证结果与分析

采用Baird-Parker(BP)平板计数法、显色培养法分别对金黄色葡萄球菌能力验证的两个样品进行定量检测,考核样品16-K717、16-Y374的菌落数分别为173 000、86 CFU/mL。试验结果由中国检验检疫科学研究院检测中心给予评价,Z值分别为0.68、0.38,都取得了满意结果。结果表明显色培养法比Baird-Parker更适合于金黄色葡萄球菌的定量检测。     

金黄色葡萄球菌定性定量检测中显色培养基的效果评价

目的 评估显色培养基对金黄色葡萄球菌定性定量的检测效果。方法 对金黄色葡萄球菌标准菌株、食品样本分离菌株：30株金黄色葡萄球菌、30株其他葡萄球菌,5株常见食源性致病菌分别用金黄色葡萄球菌显色培养基和Baird-Parker培养基进行培养试验,并用国标法和全自动微生物鉴定药敏分析系统对培养结果进行确证鉴定。结果 试验定性结果显示金黄色葡萄球菌在显色培养基上呈紫红色,30株其他葡萄球菌呈蓝色或乳白色,5株常见食源性致病菌其中单核细胞增生李斯特氏菌呈蓝绿色、表皮葡萄球菌呈乳白色、其余3株不生长,可在直观上对几种食品中常见葡萄球菌进行有效区别,而且目标菌在显色培养基和Baird-Parker培养基上计数值无显著差异(P＞0.05),确证结果显示全自动微生物鉴定药敏分析系统结果与GB 4789.10-2016方法结果一致。结论 显色培养基能快速锁定疑似目标菌落,为溯源调查指明方向,定量计数直观有效,配合全自动微生物鉴定药敏分析系统更提高了对目标菌的鉴定效率,更适用于金黄色葡萄球菌定性定量检测。     

食品中金黄色葡萄球菌计数方法的比较研究

比较食品中金黄色葡萄球菌计数的两种方法,寻找再现性较好的金黄色葡萄球菌计数方法。采用Baird-Parker琼脂倾注法与涂布法,对含一定浓度的金黄色葡萄球菌标准菌液、加菌样液进行计数,通过结果分析两种方法哪一种稳定性、重复性更好。金黄色葡萄球菌计数方法,利用Baird-Parker琼脂倾注法操作简便、结果稳定、再现性好。金黄色葡萄球菌计数方法,采用Baird-Parker琼脂倾注法,更加简便,便于推广。     

TaqMan探针荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

建立了检测乳中产肠毒素D的金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR方法,以SED基因为肠毒素D的检测靶序列,设计荧光定量PCR引物和Taq Man探针,将构建的重组质粒作为阳性对照,建立了对产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速检测的Taq Man探针荧光定量PCR方法,并评价该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,Taq Man探针实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素D的方法具有极强的特异性,标准曲线的相关系数为0.999,最低可检测到40copies/m L的阳性质粒,检测乳中产肠毒素D金黄色葡萄球菌的灵敏度为1.0×102CFU/m L。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,在产肠毒素D金黄色葡萄球菌快速筛查方面具有良好的应用前景。     

金黄色葡萄球菌定量检测中四种培养基的比较

使用Baird-Parker平板、RPF平板、金黄色葡萄球菌显色培养基平板及3M PerifilmTM金黄色葡萄球菌测试片对金黄色葡萄球菌检测,浓度范围在103~104 CFU/m L,3M测试片、金黄色葡萄球菌显色培养基、RPF平板与BP平板结果相当。在实际检测中,选择适当的培养基辅助检测,结果更加准确可靠。     

Baird-Parker琼脂上被抑制的金黄色葡萄球菌的筛选与特征研究

目的对在Baird-Parker琼脂平板上被抑制的金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)的遗传特征进行深入研究,并提出针对性检验措施。方法通过对127株不同来源的金葡菌和8株金葡菌标准菌株在Baird-Parker琼脂平板上进行测试,筛选在Baird-Parker琼脂平板上被抑制的金葡菌,并对菌株的遗传特征进行分析,同时检测Baird-Parker琼脂平板中的抑菌成分对金葡菌的抑制作用。结果 3株分离自北京猪肉馅中的菌株和金葡菌标准菌株(CMCC 26112)在Baird-Parker琼脂上生长率低于万分之一,Baird-Parker琼脂基础培养基中添加甘氨酸(12.0 g/L)可明显抑制这4株金葡菌的生长,而六水合氯化锂(5.0 g/L)、丙酮酸钠(10.0 g/L)和卵黄亚碲酸钾(50 ml)的添加对这4株金葡菌的生长没有明显影响;这4株菌在高盐甘露醇琼脂和科马嘉显色平板上的生长率均高于60%;脉冲场电泳(PFGE)分析发现,北京来源的3株金葡菌为同一PFGE型别,与标准菌株(CMCC 26112)存在明显差异。结论为保证食品安全国家标准检验方法 GB 4789.10—2010对不同金葡菌计数的覆盖性,计数检验过程中应使用两种或两种以上金葡菌选择性平板。     

应用测试片快速检测食品中金黄色葡萄球菌的研究

采用法国进口的金黄色葡萄球菌显色培养基为主要原料,运用微生物测试片专有技术将其制成一次性的快速测试片.经测试,该测试片的检测灵敏度高,特异性强,重复性好.其对纯菌的检测下限可达3 cfu/mL.与营养琼脂计数、Baird-Parker培养基计数和显色培养基计数比较,检测结果均无显著性差异(P>0.05).对染菌样品的检测结果.测试片与3MTMPetrifilm法无显著性差异(P>0.05),而检测下限明显低于GB标准方法.     

金黄色葡萄球菌两种检测方法的比较研究

目的比较Baird-Parker平板计数法和3M Petrifilm~(TM)测试片法检测金黄色葡萄球菌的优缺点。方法采用GB 4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、SN/T 1895-2007《食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法Petrifilm~(TM)测试片法》检测金黄色葡萄球菌菌悬液,并对结果进行分析比较。结果在高浓度菌液(102 CFU/mL)时,国标法和测试片法检测金黄色葡萄球菌有显著差异,测试片法计数较困难,国标法检测结果值更准确,但测试片法在简便性、检测时间等方面都优于Baird-Parker法。结论对不同样品进行检测时应注意根据实际金黄色葡萄球菌污染程度选择合适的方法。     

消除食品背景杂菌干扰的金黄色葡萄球菌分离方法的改进

采用国家标准GB4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》对冷冻肉及肉制品进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,受背景杂菌干扰严重,产生大量假阴性结果,金黄色葡萄球菌的分离率偏低。为了解决这一问题,本研究通过改进国标方法,使用质量分数10%氯化钠肉汤进行增菌,增菌后划线于Baird-Parker琼脂平板上,挑取疑似菌落在含有质量分数4%琼脂和体积分数2%乙醇的胰蛋白酶大豆琼脂上进行分离纯化,再进行验证,食品中金黄色葡萄球菌的分离率由2.61%提至19.98%。通过该改进方法可有效避免假阴性结果。     

食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法的研究

探讨一种金色葡萄球菌定量检测的操作方法。采用GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》第二法Baird-Parker平板法,以接种量0.3、0.3、0.4 m L和0.1 m L两种方法对同一浓度的金色葡萄球菌进行检测,将各数据进行记录对比分析。计数结果在10、100 CFU/m L和1 000 CFU/m L 3个数量级菌浓度上两种操作方法相近,其中接种量0.1 m L的方法计数值较高,但是此方法操作简单,涂布均匀。在实际非仲裁检验过程中,经过方法验证,可以根据需要采用此方法,以减轻工作量。     

快速测试片与国标方法测试脱盐乳清粉中金黄色葡萄球菌的对比

使用快速测试片法和国标法对脱盐乳清粉中金黄色葡萄球菌进行计数比对,对比两种方法的差异。结果表明,经过对脱盐乳清粉的本底试验确定,Baird-Parker平板和快速测试片在10?1的稀释度下均无菌落生长,菌落数均小于10 CFU/g,表明本实验中选用的脱盐乳清粉不对标准菌株的添加量产生影响。此外,对选取的金黄色葡萄球菌标准菌株进行的适应性试验结果表明,该脱盐乳清粉不会对本实验选取的标准菌株生长产生抑制。在此基础上,对18个经人工污染的（加入定量金黄色葡萄球菌标准菌株）脱盐乳清粉分别进行了快速测试片法和国标法的计数对比,重复性试验中重复性限在r≤0.25的偏差范围内,结果符合ISO 4833-1:2013对于重复性偏差的要求;经t检验验证两种方法无显著性差异。因此,快速测试片法可快速、准确、有效地应用于脱盐乳清粉的金黄色葡萄球菌计数的检测。     

典型菌落计数对金黄色葡萄球菌检测结果的影响

本文分析总结了盲样考核样品中金黄色葡萄球菌在Baird-Parker琼脂平板上的典型菌落计数对检验结果准确性的影响。结果显示当实验人员挑取典型菌落不正确或没有对典型菌落进行分类鉴定时结果将存在很大的差异。这表明金黄色葡萄球菌在Baird-Parker琼脂平板上出现不同类型典型菌落应通过分类计数鉴定,以减少典型菌落计数干扰,增加检测结果的准确性。     

3个厂家即用型Baird-Parker琼脂平板性能评测

目的通过对3个厂家产品的性能评测,寻找最适宜的即用型Baird-Parker琼脂平板。方法对3个厂家的Baird-Parker琼脂平板分别进行产品外观、质量控制测试、金黄色葡萄球菌菌落形态、特征性反应和菌落计数5个方面的比较,选择适合实验室的产品。结果 3个厂家的Baird-Parke琼脂平板均符合GB4789.28-2013的质控要求,但A厂家产品不稳定首先排除,B和C厂家产品的主要区别表现在外观和菌落大小方面,综合考虑实验室最终选择B厂家产品供日常检验使用。结论不同厂家的培养基产品存在差异,运输过程中保存条件的变化也会导致产品性能方面发生变化,使用前应进行严格的筛选和质量控制。     

TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(PCR)技术定量检测婴幼儿配方食品中的金黄色葡萄球菌

靶向于耐热核酸酶基因nuc,研究建立了Taq Man实时荧光聚合酶链式反应(PCR)(qRT-PCR)法用于婴幼儿米粉及乳粉中金黄色葡萄球菌的快速定量检测。经优化的qRT-PCR体系特异性强,仅在金黄色葡萄球菌中产生典型扩增曲线;方法灵敏度高,对标准质粒、纯菌液、模拟染菌米粉及奶粉样液的检测限分别为17.94拷贝、1.2 CFU、0.42 CFU和0.74 CFU/PCR反应体系;10倍系列梯度稀释的标准质粒、纯菌及人工染菌样液的浓度对数与qRT-PCR的Ct值线性相关度良好,拟合方程的决定系数均≥0.99;平板计数法与qRT-PCR法对模拟米粉及乳粉盲样中金黄色葡萄球菌的定量检测结果间无统计学差异。文中所建立的qRT-PCR定量法特异性强、灵敏度高,简便快捷、可靠性佳,可为婴幼儿米粉及乳粉中金黄色葡萄球菌的快速、准确定量检测提供有效手段。     

梯度金黄色葡萄球菌DNA杂交分子信标激发荧光初探

验证不同浓度黄色葡萄球菌DNA与特殊设计的分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并验证该探针对于金黄色葡萄球菌DNA的特异性。利用特殊ATMND染料特异性嵌入缺失DNA位点的独特分子信标设计,并巧妙利用了能与DNA茎环结构杂交互补金黄色葡萄球菌特异DNA序列,导致茎环结构构相改变,而使ATMND染料离开缺失位点被重新激发荧光。将不同浓度黄色葡萄球菌DNA与分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并选择标准菌株DNA对该探针进行特异性验证。证实了这种探针能够特异性的选择杂交金黄色葡萄球菌目标序列,随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增强,荧光信号也随之增强,与其它沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌和铜绿假单胞菌DNA相比,具有更为明显的荧光恢复功能。荧光信号随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增高而增强,该探针在金黄色葡萄球菌DNA的识别上具有一定的特异性。     

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

金黄色葡萄球菌标准物质的定值方法

对含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质进行定值,包括金黄色葡萄球菌计数方式的选择,标准值的测定,以及不确定度的分析。总不确定度以扩展不确定度表示。结果显示,金黄色葡萄球菌3种计数方式,BP平板倾注法计数结果与PCA计数法测定一致,BP平板倾注法SD值BP平板涂布法SD值,表明采用BP平板倾注法计数金黄色葡萄球菌的结果精密度、再现性较好,有利于试验结果的复现。标准值测定结果为275 CFU/瓶;总不确定度为6。因此,标准物质定值结果为(275±6)CFU/瓶。     

微滴式数字PCR技术定量检测发酵乳中金黄色葡萄球菌

基于微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术,建立发酵乳中金黄色葡萄球菌定量检测方法。以金黄色葡萄球菌nuc基因为目的片段设计特异性的引物和探针,优化反应体系,通过活菌提取和ddPCR方法对靶标基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对定量结果进行分析。本研究建立了发酵乳中ddPCR技术定量检测金黄色葡萄球菌的方法,检测特异性良好,检测灵敏度为3.3×10~1 CFU/g,定量的偏差率为+10.18%,证明了ddPCR用于绝对定量检测的可行性,为其他食品污染菌和致病菌标准化控制体系提供有益的示范作用。     

碳纳米生物传感检测金黄色葡萄球菌

目的建立一种基于碳纳米材料的适配体传感器快速检测金黄色葡萄球菌的方法。方法利用核酸适配体与其靶标之间的特异性结合能力以及碳纳米管的荧光猝灭特性,构建一种新型快速的金黄色葡萄球菌检测方法。结果该方法特异性良好,与非目标菌株无交叉反应。同时,该方法对金黄色葡萄球菌的检出限为10~5 CFU/mL,线性范围为10~5～10~9 CFU/mL,而且在此浓度范围之间呈现良好的线性关系,线性方程为Y=53.22X-39.99,线性相关系数r~2=0.992。结论该方法具有检测速度快、操作简便、检测成本低等特点,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效手段。     

Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

建立了Taqman探针实时PCR方法,针对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。研究所设计的引物具有良好的特异性,而且Taqman探针实时PCR方法检测sea基因的灵敏度高,最低检出限为69 fg,并且该方法可在8 h内完成人工污染乳中金黄色葡萄球菌的检测,最低检出限为83 cfu/mL。研究所建立的方法具有特异性强、灵敏性高及操作简便等优点,适宜于牛乳中金黄色葡萄球菌污染的调查及监测。