大米蛋白水解机制研究——Ⅲ酶水解对大米蛋白-糖结合特性的影响

凝胶色谱洗脱组分分析和β-消去反应结果表明,酶水解所溶出的大米蛋白与糖分子仍以N-糖肽键形式连接。红外光谱分析显示酶解后可溶性蛋白和残余物蛋白中均含有糖组分。SDS-PAGE分离和Schiff试剂染色结果表明,13ku亚基是能抵抗碱性蛋白酶水解的糖蛋白。     

高压处理对热变性米蛋白酶解特性的影响

研究高压处理热变性米蛋白在碱性蛋白酶酶解时其溶解性、水解度、-SH含量、分子特征和微观形态的变化特征。结果显示：米蛋白经100～700MPa处理后酶解所得可溶性蛋白的含量均高于未高压处理者,其中500MPa时增加幅度最大,-SH含量也最高。当酶解120min时,高压处理米蛋白可溶性米蛋白的比例达73.0%,而未高压处理米蛋白的可溶性米蛋白只有53.6%,但二者水解度(分别为7.40%和7.05%)的差异并不明显;凝胶过滤色谱分析表明,高压处理后酶解时可溶物的相对分子质量小于未高压处理的酶解物;SDS-PAGE分析表明,高压处理米蛋白不溶性酶解物中大分子组分的含量明显减少,小分子组分明显增加;扫描电镜观察显示,经高压处理的米蛋白形态相对蓬松。因此,适当高压处理有利于米蛋白的酶解,且酶解特性与米蛋白高压处理后的结构变化有直接关系。     

紫菜酶解物的制备及其特性

坛紫菜用纤维素酶和木瓜蛋白酶分别或联合处理,考察了提取物的得率、DPPH自由基清除率、氨基酸组成、蛋白溶解性和乳化性等性质。结果发现,利用木瓜蛋白酶对紫菜进行酶解时,固形物提取率稍微高于纤维素酶,利用这两种酶进行复合酶解时虽然可以提高紫菜的固形物得率,但不会改变蛋白提取率。紫菜酶解物的DPPH自由基清除率与蛋白含量之间存在显著的正相关关系,可能与提取物中具有抗氧化活性的氨基酸含量增加有关。另一方面,紫菜经复合酶酶解4h以上,提取物的蛋白溶解性在任一pH下都接近100%。而且,紫菜酶解物的乳化性在pH9最好,但乳化稳定性在pH7最低。      

不同处理方法对草菇呈味物质释放的影响

以草菇子实体为研究对象,以可溶性糖及糖醇、有机酸、5’-核苷酸、游离氨基酸组成和含量、分子质量分布为指标,研究常压蒸煮、高压蒸煮和酶解3?种处理方法对草菇呈味物质释放的影响,结果表明：常压蒸煮制备液可溶性糖及糖醇的总量显著降低,高压蒸煮制备液可溶性糖及糖醇的总量和原液基本相同,而酶解作用显著地提高了样品中可溶性糖的含量;和原液相比,常压蒸煮和高压蒸煮提取后有机酸总量显著增加,而复合酶解制备液有机酸总量显著降低;3?种处理方法作用后的游离氨基酸总量都有所增加,以高压蒸煮增加最显著,同时高压蒸煮制备液的鲜味氨基酸、甜味氨基酸以及苦味氨基酸的含量均显著增加;常压蒸煮和高压蒸煮制备后,大于3?000?Da组分的含量有所减少,高压蒸煮制备液中小于3?000?Da的组分含量最多,是制备呈味肽的重要来源。因此,不同处理方法对草菇呈味物质的释放有着明显差异,可以根据所需要的呈味物质采用不同的处理方法。     

高压蒸煮法在玉米胚芽蛋白提取中的作用

以提油后的玉米胚芽粕为原料,用高压蒸煮法处理原料后,再利用纤维素酶进行酶解处理,通过测定离心液中的糖量,残渣中纤维素水解率及浓缩后蛋白质含量等指标,考察采用高压蒸煮法后对蛋白提取效果的影响。结果表明,经高压蒸煮处理后,蛋白质提取效果与浸泡48h再酶解的效果相当。处理后蛋白质含量均可达到42%。而高压蒸煮法处理大大缩短了处理时间,优于浸泡法处理原料。     

大米蛋白的酶水解机制研究——Ⅱ酶水解过程中蛋白质的组分变化

凝胶色谱和高效液相色谱分析表明,大米蛋白在碱性蛋白酶Alcalase水解过程中,其可溶性蛋白组分的相对分子质量(Mr.)分布范围相对稳定,但Mr.1350u以下小分子组分的相对含量不断增加;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析显示,随着酶水解反应的进行,Mr.为57、39、26、22ku的亚基逐渐消失,而29ku和13ku两个亚基的含量相应增加,且这两个亚基表现出可抵抗酶水解的特性。氨基酸分析表明,酶解后残余物蛋白中胱氨酸、蛋氨酸等含硫氨基酸的含量显著高于可溶性蛋白中的含量。圆二色光谱(CD)分析显示,酶水解前后大米蛋白的二级结构发生显著变化,在残余物蛋白质组分中自由回转的比例高达71.3%,α-螺旋结构完全消失。     

高压处理-酶解大米蛋白抗氧化肽的制备及其分子量分布

本文以酶解物的抗氧化活性为指标,通过正交试验方法优化了3种高压(0.1 MPa、300 MPa、500 MPa)预处理大米蛋白的酶解条件,用高效液相色谱分析了主要酶解产物的分子量分布。结果表明,三种预处理蛋白在各自优化条件下制备的酶解物在1.0mg/mL时的最大还原力分别为0.125、0.149、0.158。常压对照组(即0.1MPa)中15-10 ku、10-1 ku和 1 ku以下等三段分子量组分所占比例分别为26.6%、46.9%、26.5%;300MPa组中的含量分别为16.5%、39.3%和44.2%;500MPa组中的含量分别为11.8%、33.1%和55.1%;可见,酶解物还原力大小与其分子量的分布之间有明显的关联性。     

牡蛎蛋白酶解物的制备及其抗氧化活性研究

选用中性蛋白酶,研究了前处理方法、E/S、pH、温度和时间对酶解牡蛎蛋白效果的影响,制备牡蛎蛋白酶解物,分析其游离氨基酸含量及分子量分布,体外实验测定其抗氧化活性。结果表明,酶解前100℃热处理10min能够提高酶解物中蛋白肽的含量,E/S为2.0%、pH7.0、温度50℃、时间3.0h为酶解的适宜条件,其DH达到14.95%;所制备的EHOP的主要成分为小分子肽类物质,分子量主要集中在500～3091u,EHOP的还原性较强,且对羟基自由基和超氧阴离子均有较好的清除能力,EHOP浓度为25mg/mL时,其还原力A700为0.44,超氧自由基清除率和·OH清除率分别为68.86%和21.20%。      

高压酶解大米蛋白抗氧化活性及其分子质量分布

以大米蛋白为原料,经不同压力(0.1、300、500 MPa)处理后,用Alcalase酶水解.以酶解物的还原力为指标,通过正交试验方法分别优化了3种压力条件下的酶解条件;用高效液相色谱分析了主要酶解产物的分子质量分布.结果表明,3种预处理蛋白在各自优化条件下制备的酶解物在1.0 mg/mL时的最大还原力分别为0.125、0.149、0.158.常压(即0.1MPa)对照组中10～15 ku、1～10 ku和1 ku以下等3段分子质量组分所占比例分别为26.6％、46.9％、26.5％;300 MPa和500 MPa组中的含量分别依次为16.5％、39.3％、44.2％和11.8％、33.1％、55.1％;可见,酶解物还原力大小与其分子质量的分布之间有一定的关联性.     

大米过敏蛋白的研究进展

大米蛋白可引起食物过敏,激发由IgE介导的速发型超敏反应和主要由T细胞介导的迟发型超敏反应。本文介绍大米中可导致食物过敏的主要蛋白：即14～16 kD的α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂蛋白、磷脂转移蛋白和33 kD具有乙二醛酶Ⅰ活性的蛋白。此外,本文还对预发芽结合加热处理、超高压技术、酶解等可降低大米过敏蛋白致敏性的加工工艺进行阐述,其中,酶解是一种相对成熟的加工方法,能有效降解大米过敏蛋白。预发芽结合加热处理与超高压技术是新兴的食品加工技术,两者均可不同程度地降低大米过敏蛋白的含量。     

Assessment of the residual immunoreactivity of soybean whey hydrolysates obtained by combined enzymatic proteolysis and high pressure

Soybean (Glycine max) whey was hydrolyzed for 15 min using three food-grade proteases (Alcalase, Neutrase, Corolase PN-L) at atmospheric pressure (0.1 MPa) and under high pressure (HP) at 100, 200, and 300 MPa. All hydrolysates were analyzed by SDS-PAGE and their residual immunoreactivity was assessed by immunoblotting using the sera from children allergic to soybean. As shown in SDS-PAGE, Alcalase, Neutrase, and Corolase PN-L produced different patterns of hydrolysis. Each enzyme showed a similar proteolytic activity at atmospheric pressure and at 100 MPa, while an increased degree of hydrolysis was observed at 200 and 300 MPa. No residual antigenicity was observed in the hydrolysates obtained by Alcalase and Corolase PN-L in all considered conditions of hydrolysis. A positive reaction associated with a band having molecular weight of about 70 kDa was observed in the immunoblotting of the hydrolysates obtained with Neutrase at 0.1, 100, and 200 MPa, while no antigenicity was detected for those samples obtained under high pressure, at 300 MPa. These results suggest that high pressure combined with suitable enzymatic activity could be a useful tool for obtaining hydrolysates with low immunoreactivity to be used in special foods (hypoallergenic foods).     

海参皂苷Echinoside A的酶解及其产物结构鉴定与溶血毒性

利用商业酶将海参皂苷Echinoside A(EA)酶解成低溶血毒性的次级苷。为了得到溶血毒性更低的稀有次级海参皂苷,以海参皂苷Echinoside A为底物,选用5种商品糖苷酶,对其进行酶解。利用TLC、高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)和电喷雾串联质谱法(ESI-MS/MS)筛选出具有能将海参皂苷EA降解生成新物质的商品糖苷酶,并进行其酶解产物结构鉴定和溶血毒性研究。结果表明,果胶酶、果胶酶Ultra SP-L和纤维素酶有酶解效果,其中果胶酶酶解生成二糖基次级海参皂苷(化合物1)和一糖基次级海参皂苷(化合物2);果胶酶Ultra SP-L和纤维素酶酶解生成化合物1,其他两种酶对海参皂苷EA没有酶解作用。溶血实验证明酶解产物的溶血毒性相对于海参皂苷EA的溶血毒性有明显地降低,其中化合物2的溶血毒性降低到30%以下,效果显著。     

Evaluation of the residual antigenicity of dairy whey hydrolysates obtained by combination of enzymatic hydrolysis and high-pressure treatment

Dairy whey was hydrolyzed for 15 min with five food-grade enzymes (Alcalase, Neutrase, Corolase 7089, Corolase PN-L, and Papain) at atmospheric pressure (0.1 MPa) and in combination with high pressure (HP) at 100, 200, and 300 MPa, applied prior to or during enzymatic digestion. The peptide profile of the hydrolysates obtained was analyzed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and their residual antigenicity was assessed by immuno-blotting with anti-beta-lactoglobulin monoclonal antibodies and the sera from pediatric patients allergic to cow's milk proteins. Moreover, to evaluate the presence of residual trace amounts of casein in bovine whey hydrolysates, immunoblotting with anti-cow's milk protein polyclonal antibodies was performed. SDS-PAGE analysis showed that HP treatment increased hydrolysis by the proteases assayed, especially when it was applied during the enzymatic digestion. Positive reactions at the band corresponding to beta-lactoglobulin were detected for Corolase PN-L and Corolase 7089 hydrolysates, except for those obtained under 300 MPa by the last protease. However, the immunochemical reaction was lower in the hydrolysis products obtained under HP than in those obtained at atmospheric pressure and after the HP treatment. On the contrary, no residual immunochemical reactivity associated with beta-lactoglobulin was observed in the hydrolysates obtained by Alcalase and Neutrase under HP, and none was observed in any of the hydrolysis products obtained by Papain. The presence of traces of casein was not significant. These results suggest that HP combined with selected food-grade proteases is a treatment that can remove the antigenicity of whey protein hydrolysates for their use as ingredients of hypoallergenic infant formulae.     

枣渣中可溶性膳食纤维的提取

试验以枣渣为原料,分别采用稀盐酸酸解、高压蒸煮和超声分散进行预处理,再用纤维素酶进行酶解提取膳食纤维,根据可溶性膳食纤维(SDF)和不溶性膳食纤维(IDF)得率来选择最佳可溶性膳食纤维提取方法。结果表明:枣渣经121℃,0.1 MPa高压蒸煮30 min后,再加0.5%的纤维素酶水解,SDF的得率达11.3%。和其它方法相比,该工艺过程的水解得率最高。     

酪蛋白水解物替代乳清蛋白的加工性能评价研究

利用复合蛋白酶水解酪蛋白制备适度及深度水解酪蛋白产品,测定酪蛋白水解物的加工性能。结果表明,经过酶解后,适度水解酪蛋白溶解度接近90%,深度水解酪蛋白溶解度接近100%,显著高于酪蛋白和乳清蛋白。此外,适度水解酪蛋白吸油性、起泡性分别约为乳清蛋白的3倍和1.5倍。深度水解酪蛋白在起泡性和乳化性上也显著高于乳清蛋白。可见,两款酪蛋白水解物在起泡性、乳化性、吸油性、溶解性等方面均在一定程度上优于乳清蛋白,可广泛替代乳清蛋白在食品工业中大规模应用。      

Combined effects of high-pressure and enzymatic treatments on the hydrolysis of chickpea protein isolates and antioxidant activity of the hydrolysates

A chickpea protein isolate (CPI) was pretreated before hydrolysis under a pressure that varied between 100 and 600MPa. The hydrolysis rate increased significantly with pressure above 300MPa. At 40min, the DH of the control was 15.3%, while the DH of the CPI treated at 300MPa was 18.5%, which reached 23.74% post treatment at 400MPa. The pretreatment of CPI above 300MPa enhanced the superoxide anion capturing rate of enzymatic hydrolysis. Pretreatment at 400MPa significantly reduced the hydrolysis time with the release of antioxidant peptides. While hydrolysis by Alcalase during treatment at high pressure (100-300MPa) significantly increased the degree of hydrolysis (DH), its maximum value peaked after hydrolysis at 200MPa for 30min. In addition, hydrolysates obtained at high pressure (100-300MPa) had a higher superoxide anion capturing rate. High-pressure treatment at 200MPa for 20min resulted in products with high antioxidative activity. The molecular-weight (MW) determination of the enzymatic hydrolysates indicated that hydrolysis at high pressure could significantly increase the amount of low-molecular-weight peptides.     

酶法制备碎米抗氧化肽的研究

以碎米为原料,采用酶法制备抗氧化肽。以水解物的还原力为评价指标,利用不同蛋白酶水解碎米蛋白,结果得出风味蛋白酶为最佳水解酶;通过单因素和正交实验,得到最佳酶解工艺条件:液料比6∶1(mL/g)、pH6.5、加酶量4000U/g、酶解温度53℃、酶解时间3h,在此条件下水解液还原力最大。      

酶水解米渣蛋白制备大米肽研究

该研究利用米渣蛋白制备大米肽的适宜酶水解条件,结果表明:在pH 8．5、温度55℃、酶用量2．0％条件下水解3h,水解液中5％TCA可溶性肽含量可达37％以上。     

米糠蛋白酶解产物功能特性及乳液稳定性研究

目的 改善米糠蛋白的溶解性,探讨米糠蛋白乳液的稳定性。方法 选用胰蛋白酶对米糠蛋白进行酶法改性,分析其在不同水解度下(1%、3%、7%)酶解产物的功能特性及不同pH、离子强度和温度对米糠蛋白酶解产物乳液的影响。结果 酶解可显著提高米糠蛋白的溶解性,在水解度7%时的溶解性最高;而酶解产物的起泡性、起泡稳定性、乳化性和乳化稳定性呈现先增加后下降的趋势,并在水解度为3%时达到最大值;经酶解后持油性显著增加(P<0.05),而持水性显著降低(P<0.05)。米糠蛋白及酶解产物乳液在不同pH下平均粒径和电位总体上呈现相似变化趋势,在等电点附近极不稳定,在pH 7～8时乳液趋于稳定;低水解度(1%、3%)的酶解产物乳液对高温和盐离子的抵抗能力高于米糠蛋白。结论 水解度为3%的酶解产物,其功能特性显著提升,制备的乳液在高离子强度和加热条件下较为稳定,该结果为米糠蛋白酶解产物制备食品乳液提供理论依据。