贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定

2010年从贵州省黔南州烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本。采用Tas-ELISA检测PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC。结果显示,201个样本中共检测出171个样本受到PVY侵染,其中PVYN37个,占21.6%;PVYO133个,占77.8%;PVYC0个,PVYN和PVYO复合侵染1个,占0.6%。PVY株系分布具有一定规律,侵染黔南州烟草的PVY以PVYO为主要株系,PVYN侵染相对较少,为次要株系,所有样本均没有检测到PVYC侵染,复合侵染零星发生。     

烟草抗PVY育种材料的筛选与应用

马铃薯Ｙ病毒对东北烟区烟草生产危害日趋严重。通过病圃发病情况调查和温室接种鉴定,初步筛选出ＣＶ９１、８７４１４、８０２１三份常规抗马铃薯Ｙ病毒材料,其中ＣＶ９１在田间调查和温室接种鉴定中表现为高抗马铃薯Ｙ病毒;转基因抗马铃薯Ｙ病毒材料８５－２、８６－１,８７－２,８９－１、９４－１、９５－１、９８－１温室接种鉴定结果为对ＰＶＹ免疫,利用ＣＶ９１育成了中抗ＰＶＹ的新品系９１１１－２１。     

马铃薯Y病毒两个黑龙江烟草分离物的全基因组序列分析

为明确黑龙江烟区马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到Harbin和MDJ两个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,2个分离物(GenBank登录号分别为MH933741和MH933742)基因组全长均为9699核苷酸。Harbin与MDJ和比利时分离物GBVC 26(JQ969039)一致率最高,为98.5%;MDJ与Harbin和GBVC 26一致率最高,为98.5%。Harbin是美国分离物Oz和瑞士分离物N-605的重组体,MDJ是美国分离物CW和N-605的重组体。利用全基因组序列构建的系统进化树显示,PVY分离物分为9个组,Harbin和MDJ均属PVYN-Wi组。PVY的11个基因均处于负选择,其中NIa蛋白基因的选择压力最大。      

黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的分子鉴定

为了揭示贵州省黔南烟区马铃薯Y病毒(PVY)株系分布及分子变异规律,先利用血清学方法初步鉴定PVY株系,再选择19个PVY分离物进行分子鉴定.结果表明,克隆的19个PVY cDNA片段全长均为1074 nts,包含1个801 nts的完整cp基因,编码266个氨基酸.序列比对发现,19个黔南PVY分离物cp基因核苷酸序列相似性为87.0％ ～ 99.9％,与GenBank登录的其他17个PVY株系cp基因序列相似性为86.6％ ～ 99.9％.系统进化树分析表明,黔南烟区19个PVY分离物中,有3个PVY分离物与PVYN株系和PVYNTN亲缘关系较近,而其他16个PVY分离物与PVYNN:O株系的亲缘关系最近.     

烟草PVYN辽宁分离物全序列测定与分析

利用引起烟草脉坏死病的马铃薯Y病毒脉坏死株系辽宁分离物（Potato virus Y-vein necrosis strain Liaoning isolate, PVYN-LN）,以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR、3’RACE和5’RACE扩增及序列测定,测得PVYN-LN全长基因组序列（NCBI登录号为JQ971975）包括9714个碱基(含PolyA尾),整条序列仅包含一个由9186个碱基组成的开放读码框（ORF）,编码一条包含3061个氨基酸的多聚蛋白。对所得序列进行BLAST,利用MEGA软件对所测得的PVYN-LN全序列与GenBank中已有的PVY全序列及氨基酸进行系统进化分析,发现PVYN-LN分离物与已报道的PVYN株系具有较高的进化亲缘关系,该分离物属于PVYN株系。序列重组分析软件RDP4分析,该序列无重组。     

烟草PVY隐性抗病基因的分子标记及其适用性

马铃薯Y 病毒(Potato virus Y,PVY)是危害烟草的重要病害, 种植抗病品种是经济有效的防治措施。分子标记辅助选择可提高抗病育种效率。来源于X-射线诱变的Virgin A Mutante(VAM) 的隐性抗PVY 基因位点(va)被广泛应用于烟草抗病育种。为了提高va 位点的育种利用效率, 根据烟草隐性抗PVY 基因(感病基因)eIF4E-1 基因序列, 设计特异扩增的引物CF2GR11,开发eIF4E-1 基因的分子标记, 并检测了该标记与抗性的遗传距离和在常见烟草资源中的适用性。CF2GR11 在云烟87、红花大金元和K326 等感PVY 品种可扩增出500 bp 产物, 在NC102、NC55 和K326PVY 等抗病品种无扩增条带。以抗、感PVY 亲本构建的101 个F₂ 单株为定位群体, 遗传连锁分析表明, CF2GR11 标记与烟草PVY 感病基因的遗传距离为0.99 cM。对46 份PVY 抗性明确的栽培烟草资源的检测表明, 供试资源的标记检测结果与抗性的吻合度为100%, 表明CF2GR11 标记适用性高。该目的基因标记可用于抗PVY 育种的辅助选择和抗PVY 资源的鉴定。      

3个黑龙江烟区烟草花叶病毒分离物的全基因组序列测定与分析

为明确黑龙江烟区烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到HEB1、HEB2和MDJ三个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,3个分离物全长均为6395核苷酸（GenBank登录号分别为MH595919、MH595920和MH595921）。HEB1和MDJ与辽宁分离物Beipiao（HE818412）一致率最高,分别为98.9%和99.6%;HEB2与云南分离物Chuxiong1（HE818417）一致率最高,为97.1%。HEB1是MDJ和HEB2的重组体。在根据全基因组序列构建的系统进化树中,TMV分为3个组,其中HEB1和MDJ均属I（U1）组,HEB2属Ⅱ（Rakkyo）组。TMV的4个基因均处于负选择,其中衣壳蛋白基因的选择压力最大。      

抗马铃薯Y病毒(PVY)和烟草花叶病毒(TMV)单联弱毒疫苗的研制及防效测定

为防治烟草马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）,筛选PVY和TMV基因组中保守且高效表达siRNA的片段,连接到烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）弱毒侵染性克隆,制备成单联弱毒疫苗,获得TVB-PVYF1、TVB-PVYF2、TVB-PVYF3和TVB-TMVF1、TVB-TMVF2、TVB-TMVF3共6个单联弱毒疫苗。室内筛选后选取保护效果最好的TVB-PVYF2和TVB-TMVF3两个单联弱毒疫苗在山东临沂、潍坊和黑龙江哈尔滨等地进行了田间防效测定,TVB-PVYF2对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草PVY的相对防效分别为66.88%、76.46%和60.71%,TVB-TMVF3对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草TMV的相对防效分别为80.74%、87.34%和74.40%。      

烟草马铃薯Y病毒综合防治技术试验报告

试验表明，该病来源于烟田邻近的马铃薯地块的感病马铃薯植株。烟田离马铃薯地近发病率高，反之则低。蚜虫是主要传毒媒介。作业不科学也可传毒。综合预防措施：远离马铃薯地，及时消灭蚜虫，科学进行田间作业等；发病初期喷药物“病毒Ａ”控制该病有较好效果     

烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ,纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８,并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。     

山东烟草番茄黄化曲叶病毒的分子检测和序列分析

2012年7月从山东泰安烟草种植区采集疑似感染番茄黄化曲叶病毒的烟草样品。利用双生病毒的通用引物PA／PB对样品进行扩增和测序,所得序列经NCBIBLAST比对证明,该感病烟草的病毒分离物为番茄黄化曲叶病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus,TYLCV）。随后对TYLCV进行全基因组序列扩增和测序（GenBank登录号JX856172）,经分子比对和进化分析发现,其与山东泰安番茄分离物TYLCV（JF414236）同源性最高为99％,并与山东其他地区和天津、北京等地报道的TYLCV同属一个大的进化分支,均属于以色列株系（TYLcv-IL）。本研究首次明确了在自然条件下烟草受到TYLCV的侵染。     

湖南烟草病毒病种类检测与系统进化分析

为明确湖南烟草病毒病的种类及分布状况,利用小干扰RNA（siRNA）测序和反转录PCR（RT-PCR）对湖南烟区样品进行检测,分析主要病毒侵染类型,最大似然法构建系统进化树确定分类地位。结果表明,湖南烟草受到烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）、番茄斑驳花叶病毒（Tomato mottle mosaic virus,ToMMV）、地黄花叶病毒（Rehmannia mosaic virus,ReMV）和辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMV）等6种病毒的侵染,其中ToMMV、ReMV、PMMV首次被检测到,TMV、CMV和PVY是主要病毒,TMV为优势病毒,复合侵染是主要侵染类型,复合侵染率为71.29%;湖南烟草上的TMV分离物形成3个独立组系,CMV分离物属群组I的亚组IB,PVY分离物属PVY^NTN-a、PVY^E和PVY^SYR-I株系。本研究摸清了湖南烟草病毒种类、分布及侵染情况,明确了TMV、CMV、PVY的分类地位,为病毒病的防治提供了理论依据。     

烟草脉带花叶病毒云南分离物全基因序列分析

应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV。根据GenBank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TVBMV进行克隆及测序,得到一条6047 bp的不完整的病毒基因组核苷酸序列,将该序列与国内报道的TVBMV全基因序列进行对比分析发现该分离物与报道的TVBMV其他分离物具有明显的地域分布差异,即云南获得的分离物均独立聚为一簇。     

贵州烤烟生产用工量分析

通过野外与入户调查、定点与动态监测相结合的方法,对贵州烟区传统烟叶生产过程和现代烟草农业建设过程中的烤烟生产用工量进行了分析。结果表明,传统烟叶生产全过程用工量露地烟为29.81个/667m²,地膜烟为31.67个/667m²;现代烟草农业建设过程中,机械化作业率、集约化水平提高和专业化分工作业用工量减少,露地烟为16.13个/667m²,地膜烟为17.97个/667m²,比传统烟叶生产用工量分别减少13.68和13.70个/667m²,减少幅度分别为43.27%和45.89%。     

烟草MADS-box家族基因保守片段的克隆与序列分析

MADS-box家族基因在植物的生长发育过程中具有重要功能。在烟草生产中出现的早花现象与MADS-box家族基因相关,为了能从烟草中克隆出与开花时间相关的基因,根据不同植物MADS-box家族基因的保守区序列,设计简并引物,采用RT-PCR技术从烟草品种NC82茎尖中成功分离出27条cDNA片段,长度在122～146 bp之间。序列分析表明,其中有16条具有MADS_MEF2类保守结构域,其推导的氨基酸序列与拟南芥等MADS-box家族基因具有同源性,相似性平均能达到76%,并具有15个保守的氨基酸位点,其中7个位点参与蛋白与DNA的相互作用,4个位点具有蛋白二聚化功能。系统发育分析结果表明,这些保守片段分别和拟南芥9个不同的MADS-box家族基因亚类最近似,其中许多亚家族与成花相关,说明NC82中存在具有调控开花的MADS-box家族基因表达,并可能与NC82低温敏感,易早花特性相关。     

烟草灰斑病在贵州烟草漂浮苗上的发生及鉴定

对贵州烟区发生的烟草灰斑病进行了病菌分离、鉴定,确定该病的致病菌为Alternaria pluriseptata。选用了4种杀菌剂对该病菌进行室内药效试验,结果表明,70%甲基硫菌灵WP对菌丝的抑制效果最好,EC50为5.94 mg/L;其它药剂的效果不甚明显。     

烟草马铃薯Y病毒病流行规律的初步研究

根据1996~2002年有关气象因素的数据,建立了气温、降水量与PVY病情指数的相关方程。选用几种模型对PVY的流行规律进行拟合检验,确定Gompertz模型为短期流行过程的最优拟合方程,并建立了流行速率与有翅蚜量关系的模型。根据田间病情调查的结果,初步得出模拟病害近距离传播的时空动态模型。