酶法合成海藻糖的研究

麦芽糖苷基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽糖苷基海藻糖水解酶(MTHase)可将淀粉转化为海藻糖,以改性壳聚糖为载体固定化海藻糖合成酶,通过比较固定化过程中各个因素的影响,得出结论如下:海藻糖酶液与5%戊二醛交联,交联温度为35℃、交联时间为16h条件下,固定化酶活性最高,再与淀粉溶液反应12h,海藻糖转化率达45.47%,与未固定化酶法制备相比有明显提高,符合工业化生产的需要并为进一步纯化海藻糖打下良好基础。     

AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

利用壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，对AS1．398中性蛋白酶进行了固定化研究，固定化反应的最佳条件是采用1％的戊二醛浓度，壳聚糖和戊二醛的交联反应时间为4h，加入酶固定化反应12h，固定化酶的最适温度35℃，最适pH值8．0。得到的固定化酶的活力回收平均为82．5％，固定化酶的稳定性能好于游离酶。     

以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶的研究

介绍了以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶需首先制备壳聚糖颗粒 ,使用戊二醛、甲醛、乙二醛 3种活化剂处理所得的壳聚糖颗粒 ,确定了以戊二醛为活化剂交联其上的氨基共价结合青霉素酰化酶的固定化方法。从戊二醛的浓度、pH值、固定化时间、固定化pH值、酶用量等条件摸索了最佳固定化条件 ,获得了酶活力为4 0 0 0 0U/ (g·h)、回收率为 5 0 %左右的固定化青霉素酰化酶。     

纤维素酶和果胶酶共固定化研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂进行果胶酶与纤维素酶的共固定化。对固定化过程中戊二醛浓度、加酶量、固定化时间、pH等条件进行探讨,并通过正交试验得出最佳固定化条件。结果表明:以0.40 g壳聚糖微球为载体,在果胶酶与纤维素酶质量比为3∶1的前提下,总加酶量40 mg,以2 mL 8%的戊二醛交联固定化2 h,固定化pH为4.5,制得的共固定化酶活力最佳。     

酸性脲酶的固定化研究

以明胶为包埋材料,戊二醛为交联剂固定化粪产碱菌所产的酸性脲酶。对酸性脲酶的固定化条件(包括明胶含量、戊二醛浓度、吸附时间、交联时间和粗酶液用量)及酶学性质(温度和pH值)进行了研究。结果表明,固定化酶的最适宜条件为：明胶的质量分数15％,戊二醛质量分数0.3％,吸附时间4 h,交联时间20 min,粗酶液用量4 mL。...     

AS1.398中性蛋白酶制备水解明胶(Ⅱ)--酶的固定化研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂 ,探讨了影响AS1 398中性蛋白酶的固定的因素。确定了固定化酶制备的适宜条件 :温度为 30℃～ 45℃ ,pH值为 6 5 ,时间为1 0h ,戊二醛含量为 0 1 2 % (质量分数 )和固定化酶中的酶的含量为 2 % (质量分数 )。     

硫脲修饰交联壳聚糖对天然胶乳蛋白质含量影响的研究

以三聚氯氰为活化剂制备硫脲修饰戊二醛交联壳聚糖，用傅立叶红外吸收光谱对产物进行了初步表征；研究了壳聚糖及其衍生物处理对天然胶乳蛋白质含量的影响．以及处理时间、处理温度和鲜胶乳氨含量对硫脲修饰戊二醛交联壳聚糖处理鲜胶乳后所得浓缩天然胶乳蛋白质含量的影响。结果表明：硫脲修饰戊二醛交联壳聚糖处理鲜胶乳再经离心机浓缩处理可显著降低天然胶乳的蛋白质含量。在适宜的条件下，胶乳胶膜的氮质量分数从未处理的0．430％降至0．132％。鲜胶乳氨含量和处理时间对胶乳的蛋白质含量有较大影响．而处理温度则影响不显著。红外谱图分析表明．硫脲修饰戊二醛交联壳聚糖主要通过与蛋白质形成氢键的形式吸附胶乳中的蛋白质。     

海藻酸钠-明胶协同固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。     

壳聚糖-海藻酸钠微球固定化木瓜蛋白酶的工艺研究

以壳聚糖和海藻酸钠为原材料,采用乳化交联法制备空白微球,通过戊二醛固定木瓜蛋白酶,以固定化木瓜蛋白酶的活性回收率作为最终测定指标,并以星点设计-效应面法优化实验条件。通过一系列的实验,结果表明最优条件为:固定化时间是4 h,壳聚糖与海藻酸钠的质量配比(m/m)为5∶5、加酶量为700 U/mL、戊二醛浓度为1. 0%、固定化温度为40℃。木瓜蛋白酶的固定化效果良好,木瓜蛋白酶活性回收率为68. 9%。     

壳聚糖固定化As1.398中性蛋白酶稳定性的研究

研究了以中空球形壳聚糖固定As1．398中性蛋白酶的方法，分析了戊二醛浓度、给酶量对固定化的影响，并对固定化酶的性质进行了讨论。实验结果显示：戊二醛质量浓度为4％、每克载体给酶量25mg时，酶活力回收为65．4％，固定化酶的热稳定性、pH稳定性及乙醇的稳定性均高于游离酶。     

海藻糖合酶的分离纯化及部分酶学性质

用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析、离子交换层析对一株芽孢杆菌SH-110产生的海藻糖合酶粗酶液进行纯化,用PAGE电泳逐步分析纯化的结果,用SDS-PAGE电泳证明该酶的分子量为62.4 kD。酶反应最适pH值为7.0,最适作用温度为35℃,金属离子Zn2+、K+、Na+对酶活性有激活作用,Ba2+、Ca2+、Mn2+对酶活性有抑制作用。酶底物专一性初步分析结果表明,该酶确实是以麦芽糖为专一性底物来转化生成海藻糖的海藻糖合酶的一种新酶。     

海藻糖对固定化酶的保护作用

研究了海藻糖对固定化纤维素酶在干燥和存放过程中的保护作用 ,发现海藻糖能有效地减少固定化酶干燥过程中酶的热失活 ,而且能提高固定化纤维素酶存放过程中的热稳定性 .但温度越高海藻糖的保护效果越差 .借助红外分析和差示扫描量热方法 ,初步推测了海藻糖对固定化纤维素酶保护的机理为 :一是糖的羟基同酶分子以氢键的形式结合 ,提高了酶的热变性温度 ;二是糖分子包裹在酶分子周围 ,或填充在酶分子的空间结构内 ,特别是酶的活性部位附近 ,并形成玻璃态 ,将酶蛋白的空间结构固定住而避免酶的失活 .     

Synthesis and in Vitro Characterization of Trehalose-Based Inhibitors of Mycobacterial Trehalose 6-Phosphate Phosphatases

α,α′-Trehalose plays roles in the synthesis of several cell wall components involved in pathogenic mycobacteria virulence. Its absence in mammalian biochemistry makes trehalose-related biochemical processes potential targets for chemotherapy. The trehalose 6-phosphate synthase (TPS)/trehalose 6-phosphate phosphatase (TPP) pathway, also known as the OtsA/OtsB2 pathway, is the major pathway involved in the production of trehalose in Mycobacterium tuberculosis (Mtb). In addition, TPP is essential for Mtb survival. We describe the synthesis of α,α′-trehalose derivatives in the forms of the 6-phosphonic acid 4 (TMP), the 6-methylenephosphonic acid 5 (TEP), and the 6-N-phosphonamide 6 (TNP). These non-hydrolyzable substrate analogues of TPP were examined as inhibitors of Mtb, Mycobacterium lentiflavum (Mlt), and Mycobacterium triplex (Mtx) TPP. In all cases the compounds were most effective in inhibiting Mtx TPP, with TMP [IC₅₀=(288±32) μm ] acting most strongly, followed by TNP [IC₅₀=(421±24) μm ] and TEP [IC₅₀=(1959±261) μm ]. The results also indicate significant differences in the analogue binding profile when comparing Mtb TPP, Mlt TPP, and Mtx TPP homologues.     

硫矿硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的克隆与表达

引言 海藻糖(α-D-葡糖基-[1,1]-α-D葡糖苷)是一种广泛存在于低等植物、藻类、细菌、真菌、酵母、昆虫等的非还原性二糖.在自然界中,海藻糖既是一种贮藏性糖类,又是应激代谢的重要产物,具有保护生物细胞和生物活性物质在脱水、干旱、高温、冷冻、高渗透压及有毒试剂等不良环境条件下活性免遭破坏的功能.     

高效液相色谱法测定海藻糖

采用高效液相色谱法（HPLC），以Hypersil NH2柱为分析柱，乙腈-水（4：1）为流动相，采用示差折光检测器，一次进样能同时分离样品中的果糖，葡萄糖，蔗糖，麦芽糖，海藻糖，低聚糖等。测定了样品中的葡萄糖，麦芽糖，海藻糖的含量，线性相关系数0.9998-0.9999，变异系数0.67%-1.0%。回收率98.65%-100.6%。     

海藻糖的性质及应用

海藻糖是一种新型的多功能食品配料,它可用于食品中,以提高现有的产品品质或开发创新型的新产品.本文介绍了海藻糖的理化性质和在食品加工中的功能特性,综述了海藻糖在食品中的应用和应用效果.     

微波强化酵母细胞中海藻糖提取工艺的研究

尝试了微波强化活性干酵母中提取海藻糖的新工艺。采用微波对酵母细胞进行预处理,以乙醇为提取剂在一定温度下提取海藻糖。结果表明,在相同的条件下,经过微波处理过的酵母细胞中海藻糖的提取率较传统的提取方法提高15%,作用效果理想。     

海藻糖合成双酶体系酶性质及酶反应条件的研究

通过对自筛出的一株微球菌 (Microccusroseus)进行海藻糖合成酶的性质及海藻糖合成的酶反应条件的研究 ,建立了使用粗酶不经纯化 ,直接进行酶反应的工艺流程 ,此工艺有可能进一步降低海藻糖的成本。研究得到了酶反应的一系列优化条件 :2 0 %细胞悬液 ,2 5℃下用 3 %甲苯处理 1h ;然后在 1 0 0mmol/L缓冲液中 ,pH值 8 0、30℃下与 5 %淀粉液化液进行酶反应2 4h ,得到海藻糖转化率达 75 %。研究了该酶体系的性质 ,发现该反应体系不存在底物和产物抑制 ,但存在对其产生抑制的金属离子 ,同时发现海藻糖对该酶体系有异常的激活作用     

海藻糖对变性溶菌酶的促进复性作用及动力学

研究了海藻糖促进变性还原溶菌酶的复性作用,考察了不同盐酸胍浓度下海藻糖浓度对复性收率的影响,并利用表观竞争反应动力学模型分析了海藻糖辅助溶菌酶的复性动力学特性.结果表明,在海藻糖存在下,聚集体生成速率常数k_A明显减小,但复性速率常数k_N变化不大;随海藻糖浓度的增大,k_A先降低后升高,在合适浓度时k_A出现最小值,由于此时k_N/k_A出现最大值,因此复性收率最大.说明海藻糖的主要作用是有效抑制蛋白质分子间聚集,因此在一定范围内提高其浓度可促进蛋白质复性,从而提高复性收率.     

Scalable Trehalose‐Functionalized Hydrogel Synthesis for High‐Temperature Protection of Enzymes

Herein, a scalable, two‐step synthesis of a trehalose hydrogel for the thermostabilization of enzymes is reported. A reaction between vinylbenzyl chloride and trehalose in base, followed by a redox‐initiated radical polymerization of the resulting mixture, produces the gel in 88% yield. The reaction scale can be increased 100‐fold while maintaining a 76% yield. Additionally, various solvents are investigated for purification, and more sustainable manufacturing solvents are selected. When the three major enzymes utilized in animal feed, phytase, β‐glucanase, and xylanase, are heated to 90 °C in the hydrogel, greater than 98% activity is retained. Lastly, quantitative release of enzyme from the gel within 4 h is demonstrated. The scalable synthesis of the trehalose hydrogel, combined with its ability to stabilize and release a variety of animal feed enzymes, makes this technology promising for use with enzymes important in animal food production.