节杆菌β-呋喃果糖苷酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、透析脱盐、Sepharose 6B凝胶色谱等分离纯化技术，从节杆菌培养液分离纯化了β-呋喃果糖苷酶，纯化倍数为18．29，回收率为44．81％，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后有一条明显的蛋白质谱带。相对分子量为55800左右，该酶的最适pH为6．5，最适温度为30℃，在pH6．0-8．0之间和45℃以下稳定，Ag^ 和Cu^2 对该酶有较强烈的抑制作用，EDTA和镁离子对酶活的影响较小。     

节杆菌产β-呋喃果糖苷酶的性质研究

本文研究了节杆菌产β－呋喃果糖苷酶几方面的性质。该酶表现总活力的最适温度为35℃，最适pH为6．5；表现转移活力的适宜温度为42℃，最适pH为7．0。该酶以蔗糖与乳糖混合物为底物表现出最高的转移活力。     

节杆菌10137产β-呋喃果糖苷酶条件及酶学性质

研究表明,节杆菌10137产β 呋喃果糖苷酶的最佳条件为:温度为30℃,pH值7 5,接种体积分数为2%,装液体积为40mL.该条件下β 呋喃果糖苷酶的转移酶活为177.78U/mL,酶作用最适pH值为6.5,最适温度为30℃,在pH值为6.0～8.0和45℃以下稳定.Ag+和Cu2+对该酶有较强烈的抑制作用,EDTA和Mg2+对酶活也有一定影响.     

节杆菌10137β-呋喃果糖苷酶基因克隆及在大肠杆菌表达

以一株高产β-呋喃果糖苷酶的节杆菌10137基因组为模板,成功地扩增出β-呋喃果糖苷酶基因,基因片段长度为1488bp,编码496个氨基酸。将扩增出的目的片段克隆到pFL-B13cl载体上,通过双酶切鉴定,确定该基因已成功克隆至表达载体。研究不同表达条件对β-呋喃果糖苷酶活性的影响,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导温度22℃,诱导12h,比酶活可达1412.30U/g,SDS-PAGE电泳显示融合蛋白分子质量大小约为67u,亲和层析纯化后比酶活为2207.48U/g。将重组大肠杆菌在2L发酵罐中培养,诱导10h后β-呋喃果糖甘酶的比酶活为1208.23U/g。     

黑曲霉产β-呋喃果糖苷酶酶学性质研究

对来源于黑曲霉的β-D-呋喃果糖苷酶的酶学特性进行了研究。结果表明,β-D-呋喃果糖苷酶的最适pH值为5．0,最适温度为50％。在40℃～60℃、pH值5．0～7．0其具有较好的稳定性。金属离子对β-呋喃果糖苷酶活性有影响。Mn^2＋和Ca^2＋能明显增强酶活,而Cu^2＋和Ag^2＋能抑制酶活。     

β-呋喃果糖苷酶合成低聚乳果糖的工艺研究

以蔗糖和乳糖为底物,利用节杆菌β-呋喃果糖苷酶合成低聚乳果糖,通过单因素和正交实验获得酶反应的最佳工艺条件为:酶反应体系的pH为6.5,反应温度37℃,酶用量1500U/g蔗糖,酶反应时间12h,反应体系的固形物含量为40%,蔗糖和乳糖的比例为1∶1,该条件下低聚乳果糖的最大转化率为160.83mg/mL。      

β-呋喃果糖苷酶催化甜菊糖的改性研究

本文用β-呋喃果糖苷酶催化甜菊糖的分子改性,采用蔗糖和甜菊糖的混合反应体系,优化的催化反应条件为:pH 6.5,反应温度40℃,甜菊苷和甜菊双糖A苷与蔗糖的摩尔比为0.007和0.003,加酶量15 U/mL,反应时间15 h.在优化的反应条件下,甜菊苷和甜菊双糖A苷的转化率分别为63.6%和63%.     

产β-呋喃果糖苷酶黑曲霉的固定化研究

对β－呋喃果糖苷酶的黑曲霉采用海藻酸钠包埋的方法。直接制成固定化菌丝生产ＦＯＳ（Ｆｒｕｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｖｉｄｅｓ）的试验,采用两。因素二次饱和Ｄ－最优设计方案,对破碎菌体与海藻酸钠溶液的混合最佳比例以及海藻酸钠溶液的最佳浓度进行研究,并计算其半衰期,结果为：菌体与海藻酸钠溶液混合比为１：１,海藻酸钠溶液浓度定为２％,半衰期为２７３．５ｈ进行研究,并计算其半衰期。结果为：菌体与海藻酸钠溶     

产β-呋喃果糖苷酶菌株的筛选及发酵条件初探

以蔗糖为碳源,对几种日本曲霉、米曲霉、黑曲霉菌株产β-呋喃果糖苷酶能力进行比较研究,其中日本曲霉1产酶能力最强。研究了其β-呋喃果糖苷酶的产生条件:以蔗糖为碳源,酵母膏为氮源时,菌种产酶最高。该菌种产酶在温度30℃,转速200r/min,pH6.0,培养时间为96h时,β-呋喃果糖苷酶酶活达到最高值,Ut为3.10U/mL,Uh为0.86U/mL,Ut/Uh为3.60U/mL。      

产β-呋喃果糖苷酶菌株的筛选及发酵条件初探

以蔗糖为碳源,对几种日本曲霉、米曲霉、黑曲霉菌株产β-呋喃果糖苷酶能力进行比较研究,其中日本曲霉1产酶能力最强。研究了其β-呋喃果糖苷酶的产生条件:以蔗糖为碳源,酵母膏为氮源时,菌种产酶最高。该菌种产酶在温度30℃,转速200r/min,pH6.0,培养时间为96h时,β-呋喃果糖苷酶酶活达到最高值,Ut为3.10U/mL,Uh为0.86U/mL,Ut/Uh为3.60U/mL。     

日本曲霉β-呋喃果糖苷酶基因克隆及在酿酒酵母中的表达

通过反转录PCR法成功地扩增出日本曲霉β-呋喃果糖苷酶基因，基因片断长度为1917bp，编码638个氨基酸。将所得片断定向克隆到pYX212载体上，并转化至酿酒酵母中，通过酵母菌落PCR检验后，确定该基因在酿酒酵母中获得表达，转化子平均酶活为26．4U／mg。     

磁性壳聚糖微球固定化β-呋喃果糖苷酶的研究

以磁性壳聚糖微球为载体,采用戊二醛交联法固定化β-呋喃果糖苷酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究.结果表明:固定化β-呋喃果糖苷酶与游离酶相比,具有较强的耐碱性,在温度低于70℃范围内有良好的热稳定性;固定化酶在4℃下保存15d后,剩余酶活力为80%左右,具有良好的储存稳定性,连续10次操作使用后保持50%的酶活,具有良好的操作性,固定化酶回收率为26%.     

磁性壳聚糖微球固定化β-呋喃果糖苷酶的研究

以磁性壳聚糖微球为载体,采用戊二醛交联法固定化β-呋喃果糖苷酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明:固定化β-呋喃果糖苷酶与游离酶相比,具有较强的耐碱性,在温度低于70℃范围内有良好的热稳定性;固定化酶在4℃下保存15d后,剩余酶活力为80%左右,具有良好的储存稳定性,连续10次操作使用后保持50%的酶活,具有良好的操作性,固定化酶回收率为26%。      

磁性壳聚糖、海藻酸钠固定β-呋喃果糖苷酶研究

分别以海藻酸钠、壳聚糖复合Fe3O4为载体,采用包埋―交联法固定β–呋喃果糖苷酶。对固定化过程氯化钙浓度、戊二醛浓度、加酶量、包埋时间、交联时间等因素进行考察;并采用正交试验对载体制备与酶固定化中主要条件进行优化;通过对固定化酶活力回收比较,磁性海藻酸钠固定化酶活力回收率优于磁性壳聚糖。     

β-呋喃果糖苷酶法合成低聚乳果糖工艺优化

目的：确定β-呋喃果糖苷酶合成低聚乳果糖的最佳工艺条件。方法：以蔗糖和乳糖为底物,利用β-呋喃果糖苷酶粗酶液合成低聚乳果糖,通过单因素和Box-Behnken试验,对酶法合成工艺进行响应面分析,得到酶法合成低聚乳果糖的最佳工艺参数。结果：最佳工艺条件为反应时间22.77h、pH7.0、反应温度35.0℃、底物质量浓度20.0g/100mL、底物与酶的体积比1:1,低聚乳果糖含量为22.70%。结论：Box-Behnken结合响应面优化果糖苷酶法合成低聚乳果糖工艺,模型可靠,方法可行。     

β-呋喃果糖苷酶的生产及对甜菊苷和莱鲍迪A苷的酶法改性研究

用Arthrobacter sp.10137生产一种β-呋喃果糖苷酶(FFase),SDS-PAGE检测纯化后的酶分子质量为48.7ku左右,酶的比活力为19.81U/mg。纯酶的最适pH值和温度分别为6.5和40℃,并在pH6～8及40℃以下稳定。纯酶对甜菊苷和莱鲍迪A苷改性的最适条件是:酶量为15U/mL,莱鲍迪A苷和甜菊苷与蔗糖的摩尔比分别为0.0005:1和0.0012:1,反应时间为15h。在最适条件下,莱鲍迪A苷和甜菊苷的最大转化率分别为69.4%和72.0%。     

β-呋喃果糖苷酶活力高效液相色谱检测法的建立

β-呋喃果糖苷酶被广泛应用于功能性食品低聚果糖的生产,它同时具有水解活力和转移活力,在不同条件下,两种活力分布并不一致.本文比较了β-呋喃果糖苷酶活力的三种测定方法.采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法,样品处理简单、成本低廉,但准确度低,宜于工业化生产和实验室粗放测定时使用;测总还原糖和葡萄糖联用法,是对DNS法的改进,但操作复杂、误差较大;高效液相色谱检测法,操作成本较高,但具有灵敏度和准确度高的特点.建立了β-呋喃果糖苷酶活力的高效液相色谱检测法,以浓度为25%(W/V)的蔗糖为酶反应底物,通过检测反应体系中葡萄糖和果糖的含量可准确计算β-呋喃果糖苷酶的水解活力和转移活力,实验结果令人满意.     

β-D呋喃果糖苷酶合成低聚果糖的工艺研究

以蔗糖为底物 ,采用来源于米曲霉中的 β -D -呋喃果糖苷酶 (EC3 2 1 2 6)合成低聚果糖 ,酶反应最佳条件为 :反应温度 35℃ ,酶反应体系的pH为 8 0～ 8 2 ,酶浓度 2 7IU/ g(蔗糖 ) ,酶反应时间为 8h。低聚果糖的最大转化率为 5 4% ,82 %的蔗糖被转化     

米曲霉中提取的β－D－呋喃果糖苷酶的浓缩与纯化

采用热纯化、乙醇沉淀法、超滤法和盐析法四种方法对从米曲霉中提取的β－D－呋喃果糖苷酶进行浓缩与纯化。试验结果表明热处理对β－D－呋喃果糖苷酶的纯化效果不明显;乙醇法浓缩粗酶液,可以得到浓缩的酶液(2.5倍),活力明显提高;盐析法对β－D－呋喃果糖苷酶活性损失较大;超滤法浓缩酶液时间长,浓缩倍数低,实际应用意义不大。     

植物乳杆菌ST-Ⅲ的β-果糖苷酶在大肠杆菌中的表达及优化

为了了解植物乳杆菌利用低聚果糖的机理,以一株具有良好的利用低聚果糖能力的植物乳杆菌ST-Ⅲ基因组为模板,成功地扩增出β-果糖苷酶基因（sacA）,基因片段长度为1506bp,编码501个氨基酸。将扩增出的目的片段克隆到pet28（a）（+）载体上,在大肠杆菌中进行表达,并优化了表达条件。IPTG浓度0.1mmol/L,诱导温度为16℃,诱导12h是该酶的最佳表达条件,比酶活为3.4U/mg;亲和层析纯化后,比酶活达到107.0U/mg。