外泌体—电离辐射诱导旁效应的另一种机制

采用条件培养液转移的方法,以微核形成和克隆形成为终点,检测X-射线在H460非小细胞肺癌细胞中诱导经培养液介导的旁效应;采用差速离心法从未受照射和受照H460细胞培养液中提取、纯化外泌体,用透射电镜观察其形态,激光粒度仪分析其粒径分布,并用Western blot检测其标志蛋白hsp90β的表达。通过荧光探针共定位实验观察外泌体进入接收细胞的情况,采用结晶紫实验检测外泌体对接收细胞增殖的影响。结果表明:X-射线可在H460细胞中诱导经培养液介导的旁效应,表现为旁效应细胞的微核增加和克隆存活率下降;未受照射和受照细胞均分泌外泌体,但不同条件下细胞分泌外泌体的尺寸分布不同;当将外泌体加入到接收细胞时,外泌体可能通过膜融合的方式很快进入接收细胞,进而促进接收细胞的增殖;受照射H460细胞分泌的外泌体不影响接收细胞的克隆存活率,但增加接收细胞的微核形成率,并且这种现象在用RNA酶处理外泌体后消失。以上结果表明,受照射H460细胞分泌的外泌体可能是介导电离辐射旁效应的机制之一,并且其中RNA可能是介导电离辐射诱导旁效应的一种重要信号分子。     

一氧化氮在亚细胞结构精确照射诱导旁效应中的作用

研究了肿瘤细胞的亚结构在荷能离子照射下所诱导的旁效应及其信号分子.以氦离子微束装置所产生的精确数量离子定位照射神经胶质瘤细胞T98G细胞核或细胞质,检测细胞染色体损伤和胞内一氧化氮(Nitric Oxide,NO)自由基的产额,探索NO清除剂对它们的影响,并以(Diethylamine nitric oxide,DEANO)研究NO的细胞效应.结果表明,无论是细胞核照射还是细胞质照射,只要1个细胞受到1个离子的照射,就可通过损伤的级联放大形成辐射旁效应,引起周围数十个细胞的损伤.对比核、质照射的生物效应,细胞核照射比细胞质照射具有更加显著的直接作用,但这两种照射所诱导的旁效应程度却相当.而NO自由基清除剂c-PTIO(2-(4-carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)可抑制旁效应的产生.NO分子探针DAF-FM(4-amino-5-methylamino-2',7'-difluorofluorescein diacetate)原位检测表明,即使只有1%的细胞核或细胞质受到单离子照射,具有NO阴性表达的细胞百分数增加了30%,使NO引起的细胞荧光密度增加15%.DEANO实验表明,NO可引起细胞微核的产生.因此,NO是亚细胞结构照射引起旁效应的一个重要信号因子.     

125I籽源照射对壳聚糖涂层的聚乙丙交酯载体支架体外降解性能的影响

研究125I籽源持续低剂量率照射对壳聚糖涂层的聚乙丙交酯(Poly(glycolide-co-lactide),PGLA)薄层支架体外降解性能的影响。在离体条件下,模拟人体环境采用磷酸盐缓冲液(Phosphatebufferedsolution,PBS)作为降解介质,125I籽源单粒表观活度为29.6MBq,在薄层支架中5粒125I籽源按一定规律排布。采用质量损耗、弹性回复率测试和扫描电镜观察等方法来评价PGLA薄层支架的体外降解性能。照射后第2周,PGLA薄层支架的质量损耗仅减少了10%左右,弹性保持率维持在60%以上,材料纤维结构保持完好,降解行为不明显;照射第4周时,材料受照剂量最高点处的累积剂量达2.2×103Gy,PGLA薄层支架质量损耗率未超过50%,弹性保持率仍有36%,扫描电镜观察显示,部分材料纤维开始出现裂纹和缝隙,较对照组明显,表明125I籽源持续低剂量率照射4周能使PGLA薄层支架降解速率有所加快,但仍维持了约59%质量和一定的弹性,形态结构保持较好,能有效维持125I籽源的空间分布。     

乏氧条件下X射线诱导神经胶质母细胞瘤T98G细胞的旁效应

采用条件培养基和共培养处理方式,应用微核形成试验研究人神经胶质母细胞瘤 T98G 细胞,在乏氧条件下经 X 射线诱导的旁效应及其发生机制.研究发现,乏氧条件下,X 射线诱导未照射组细胞的微核率与相应的照射剂量之间存在显著的正相关关系;条件培养基方式下自由基抑制剂二甲基亚砜相似文献   

质子辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞的DNA损伤影响研究

为研究质子辐射对人恶性黑色素瘤的杀伤效应,本研究利用北京HI-13串列加速器提供的15 MeV质子,以0、1、2、4、8 Gy剂量辐照A375细胞,以细胞克隆术和流式细胞术检测A375细胞的克隆形成率、周期阻滞及凋亡率,用免疫荧光法检测2 Gy辐照后细胞的γH2AX焦点数,并与相同条件下的γ射线辐射对比。结果表明,在1～8 Gy剂量下,随着剂量的增加,A375细胞的存活率下降,在4～8 Gy剂量下,细胞的存活率明显低于γ射线。辐照后12 h,细胞G2/M期阻滞随剂量的增加而增加,质子辐射诱导的周期阻滞强于γ射线;辐照后48 h, γ射线诱导的细胞周期阻滞已基本解除,但质子诱导的细胞周期阻滞除1 Gy外,2～8 Gy均未完全解除。辐射诱导的细胞凋亡随照射剂量的增加而增加,随着时间的延长,凋亡比例有所增加,且质子诱导的细胞凋亡率高于γ射线。辐照2 Gy后,γ射线和质子诱导的γH2AX焦点峰值均在照后1 h出现,质子辐射诱导的γH2AX焦点数和大小均高于γ射线。以上结果表明,质子辐射可有效杀伤恶性黑色素瘤A375细胞,在黑色素瘤治疗中有潜在应用价值。     

60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变的剂量率效应

为准确估算受不同剂量率照射者的生物吸收剂量,分别采用低、中、高三种不同剂量率的60Coγ射线照射离体人血,一步法培养52h收获制片,根据染色体双着丝粒 环畸变率拟合剂量效应曲线.结果表明,相同吸收剂量点不同剂量率诱发的畸变率随剂量率的增加而增加,存在明显的剂量率效应,用低剂量率曲线估算的吸收剂量明显高于用高剂量率曲线估算的吸收剂量.因此,在估算吸收剂量时须考虑剂量率效应,应根据辐照的实际情况尽量选择剂量率相近的刻度曲线进行估算,结果才更为准确.     

重组抗人CD22嵌合抗体SM03的 125I标记及生物活性

为了探讨125I标记的重组抗人CD22嵌合抗体SM03的生物活性,采用Iodogen法进行单克隆抗体SM03的125I标记, Sephacryl S-300 HR色谱柱分离标记混合物,测定分离后样品的纯度与浓度.采用竞争结合法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定纯化后样品的活性.抗体经过放射性标记后,放化纯度>99%,回收率>47%.125I-SM03的生物活性与未标记抗体差异没有显著性,P=0.907.用125I-SM03筛选CD22抗原表达量最多的细胞,在Raji、Daudi和Ramos细胞中,SM03与Ramos细胞的特异性结合量最多,每个细胞的结合量为1.3 pmol.以上结果表明,Indogen法可以用于单克隆抗体SM03的标记,标记后不影响SM03的生物活性.     

Biological effects of human lung cells MRC-5 in CBCT positioning for image-guided radiotherapy

Image-guided radiotherapy (IGRT) provides precise positioning for the tumor target,but it may bring extra irradiation dose in the target positioning with a cone beam CT (CBCT) which has been increasingly used in IGRT.In this work,we focused on biological effects of thelow-dose irradiation in IGRT,which have not been considered so far.Primary human fibroblasts cells from the lung and MRC-5 were irradiated by a CBCT.DNA doublestrand breaks (γ-H2AX foci) and micronucleus frequency of the irradiated samples were analyzed.Compared to the control,the γ-H2AX foci yields of the samples irradiated to 16 mGy increased significantly,and the micronuclei rate of the samples irradiated for 3 days increased notably.The dose by imaging guidance device can be genotoxic to normal tissue cells,suggesting a potential risk of a secondary cancer.The effects,if confirmed by clinical studies,should be considered prudentially in designing IGRT treatment plans for the radiosensitive population,especially for children.     

硫酸镁对人脐静脉血管内皮细胞的辐射防护作用

对数生长期的人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分3组进行不同处理后采用流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况;RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA的表达情况。结果显示,硫酸镁可以在X-射线照射24 h后改善HUVECs细胞G2/M期阻滞;在辐照后24、48、72 h可以提高细胞对X-射线的辐射敏感性,并增加细胞凋亡率(t=4.24、7.19、3.20,p0.05);在辐照后48、72 h能明显抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达;照后24、48、72 h的Bcl-2 mRNA表达量减少(t=3.034、6.182、3.957,p0.05)。结果提示,硫酸镁可以缓解X-射线照射后细胞G2/M期阻滞,增加照射后HUVECs的细胞凋亡率,降低X-射线诱导的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。