逐级盐析法结合双水相萃取纯化葛仙米藻蓝蛋白

利用逐级盐析法结合双水相萃取对葛仙米藻蓝蛋白进行纯化,设计三因素二次回归正交旋转组合试验对提取工艺进行优化,并应用Design-Expert 7.0软件建立了各影响因素与萃取纯度的数学回归模型。结果显示最佳的提取工艺为:20%(NH4)2SO4盐析去沉淀后用40%和50%(NH4)2SO4盐析得藻蓝蛋白,再用质量分数10%的聚乙二醇6 000、质量分数18%的(NH4)2SO4进行双水相萃取。所得产物纯度可达到8.6,回收率为71.40%。对所得产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得到清晰的两条条带(条带1和条带2),其分子质量分别在35 ku和15 ku左右。通过质谱分析可知,条带2的分子质量为15 ku左右,等电点5.35,部分肽的氨基酸序列为TPLTEAVAAADSQGR和DIGYYLR。通过SWISS-MODEL网站模拟蛋白质结构得出,条带2可能是葛仙米藻蓝蛋白的α亚基。     

响应面优化双水相萃取分离酵母源MT工艺

采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件：PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

双水相萃取地皮菜中藻蓝蛋白的研究

采用单因素实验和正交实验法对双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白技术进行优化。研究PEG1000/硫酸铵体系中PEG1000含量、硫酸铵含量及离子强度对地皮菜藻蓝蛋白纯化的影响,以回收率为检验指标,确定了双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白的优化条件。结果表明,通过正交实验发现3种因素对地皮菜藻蓝蛋白回收率的影响大小依次为硫酸铵>氯化钾>PEG1000;并得到最优组合：双水相体系总质量为20 g,加入藻蓝蛋白粗提液5 g时,PEG1000质量分数为14%、硫酸铵质量分数为15%、氯化钾质量分数0.5%,得到藻蓝蛋白纯度为0.302,回收率为96.43%。     

盐析法联合离子液体双水相纯化木瓜蛋白酶

本实验以海南产番木瓜为研究对象,采取盐析法联合离子液体双水相对其富含的木瓜蛋白酶进行提取纯化。以不同饱和度的(NH4)2SO4对粗酶液进行盐析,通过实验结果分析,确定了以饱和度分别为20%和45%的两步盐析法的最佳条件。然后再进行双水相萃取,通过单因素试验结果设计3因素3水平的响应面试验,优化双水相萃取条件为离子液体[C4mim]N(CN)2质量分数29.76%、(NH4)2SO4质量分数16.08%、pH?8.18,在此最优条件下木瓜蛋白酶萃取率为89.01%,酶活力回收率为86.72%,所得到木瓜蛋白酶比活力为1?056?U/mg,纯化倍数达到9.6?倍。然后对实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,经纯化的酶中杂条带明显减少,验证了分离纯化的效果。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素

本文建立了一种从紫花油豆中快速高效分离凝集素的方法,采用PEG-盐双水相体系进行分离,以上相蛋白得率和纯化倍数作为评价指标,分别考察了(NH4)2SO4质量分数、PEG600质量分数和体系p H值三种显著单因素,同时用SDS-PAGE电泳对其进行检测,探究凝集素在PEG600/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配规律。结果表明:双水相体系分离凝集素的最优条件为(体系共5m L):3m L25%(w/w)的(NH4)2SO4溶液、1m L 90%(w/w)的PEG600溶液、1m L的粗蛋白提取液、调p H值为7.5,此时上相蛋白得率为42.32%,纯化倍数为3.08。     

槐花蛋白萃取与营养评价的研究

采用响应面对双水相体系萃取槐花蛋白进行优化,并对其进行营养评价。考察了PEG4000质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH、萃取温度等因素对槐花蛋白萃取率的影响,采用氨基酸自动分析仪进行营养分析评价。结果表明:最佳萃取条件为PEG4000的质量分数28%、(NH4)2SO4质量分数45%、pH5、萃取温度50℃,槐花蛋白中必需氨基酸比例比较均衡,符合WHO/FAO的推荐标准,有较高的营养价值,极具开发利用价值。      

灰树花漆酶的双水相萃取及酶学性质

研究双水相萃取法分离灰树花漆酶。以PEG6000/(NH4)2SO4作为成相系统,通过单因素试验研究酶液添加量、PEG6000质量分数、(NH4)2SO4质量分数和体系pH对灰树花漆酶萃取效应的影响,并通过正交试验确定最佳萃取条件,同时进行纯化漆酶的酶学性质研究。结果表明,在pH为6时,PEG6000/(NH4)2SO4双水相萃取的最佳条件为:酶液添加量5%,PEG6000质量分数25%,(NH4)2SO4质量分数17%,此时漆酶的分配系数和酶活收率分别高达7.6和96.6%。纯化漆酶的最适反应温度和最适pH分别为45℃和2.97,在30~45℃和pH 3.5~5.0之间具有很好的稳定性。金属离子Cu2+、Zn2+、Mg2+、Mn2+、K+、Ca2+对漆酶酶活有促进作用,其中Cu2+和Mg2+的促进作用最显著,而Co2+、Fe2+、Na+对漆酶酶活有抑制作用,其中Fe2+的抑制作用最明显。     

双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合分离猪胃蛋白酶

探索双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合分离猪胃蛋白酶,考察PEG分子质量、相质量分数、壳聚糖添加量、复合pH对分离效果的影响,结果表明:双水相萃取法中PEG分子质量为1000、其质量分数为20%、(NH4)2SO4的质量分数为15%,壳聚糖沉淀法中壳聚糖添加量为2.5mg/mL上相溶液、复合时pH为5.9时猪胃蛋白酶的纯化倍数最大,最大值为7.83。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取猪胃蛋白酶工艺研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/（NH4）2SO4]建立稳定的双水相体系以分离猪胃蛋白酶。通过上下相体积比（VR）、比活力（SA）、纯化因子（PF）、酶活回收率（η）和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析测定萃取效果。结果表明,萃取猪胃蛋白酶的最佳配比体系为25%PEG1000:18%（NH4）2SO4,所萃取的猪胃蛋白酶酶活回收率为91.5%,SDS-PAGE结果显示,萃取的蛋白质和猪胃蛋白酶对照品分子量大小一致。      

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取松花粉中总黄酮的工艺研究

采用聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取纯化松花粉中的总黄酮,确定双水相体系组成为26%PEG400-20%（NH4）2SO4,以萃取率和分配系数为指标,考察p H、温度和Na Cl添加量对双水相萃取分配行为的影响,并结合正交实验优化萃取工艺参数。确定最佳萃取工艺条件为Na Cl添加量为2.0%、p H4、温度为40℃,在此条件下松花粉总黄酮萃取率达到98.93%,其中Na Cl添加量对于萃取分配行为的影响最大。此方法操作简便,水环境温和,分相时间短、萃取率较高,是松花粉总黄酮等天然活性产物分离纯化的一种有效方法。      

废弃食用菌栽培块中纤维素酶的提纯工艺研究

利用废弃食用菌栽培块通过浸提、膜浓缩、盐析和双水相萃取等方法提取加工工业级和高纯度纤维素酶制剂。结果表明：采用含体积分数0.2% Triton X-100 的pH5.0、0.2mol/L 乙酸- 乙酸钠缓冲液作为酶浸提液,在25℃浸提3h 条件下可以抽提出102.64U/mL 的纤维素酶溶液,再在质量分数60% 的(NH4)2SO4 饱和度条件下可回收65.54% 的纤维素酶总活力,制备成酶活力达到2865.47U/mL 的工业级纤维素酶制剂;再经质量分数22% 聚乙二醇6000(PEG6000)-20%(NH4)2SO4 双水相体系在pH5.5、7mmol/L NaCl 条件下常温萃取,可获得酶活力为10208.46U/mL,酶比活力106.62U/mg 的高纯度纤维素酶,酶总活力得率为51.22%,纯度是浸提液的12.85 倍。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG（聚乙二醇）／（NH4）2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究，考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响，结果表明：双水相最佳提取条件为PEG 100027％，（NH4）2SO419％，Na-Cl0．002％，pH5．0，温度50℃，在此条件果胶酶分配系数可达到14．0。