双水相萃取藻蓝蛋白的研究

双水相萃取是近年来发展起来的蛋白纯化方法。本研究运用双水相技术分离提取钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白,对构成双水相体系中不同分子量PEG和酒石酸钾钠浓度的影响进行了分析。确定了双水相组成体系为16%的PEG 2000（w/w）和25%的酒石酸钾钠（w/w）,pH值为6.0,在此体系中藻蓝蛋白主要分布在上相,最高纯度3.69,分配系数20.7,回收率94.56%。多次双水相萃取有利于藻蓝蛋白纯度提高,3次双水相萃取后,藻蓝蛋白纯度高达4.15。     

双水相萃取地皮菜中藻蓝蛋白的研究

采用单因素实验和正交实验法对双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白技术进行优化。研究PEG1000/硫酸铵体系中PEG1000含量、硫酸铵含量及离子强度对地皮菜藻蓝蛋白纯化的影响,以回收率为检验指标,确定了双水相萃取纯化地皮菜藻蓝蛋白的优化条件。结果表明,通过正交实验发现3种因素对地皮菜藻蓝蛋白回收率的影响大小依次为硫酸铵>氯化钾>PEG1000;并得到最优组合：双水相体系总质量为20 g,加入藻蓝蛋白粗提液5 g时,PEG1000质量分数为14%、硫酸铵质量分数为15%、氯化钾质量分数0.5%,得到藻蓝蛋白纯度为0.302,回收率为96.43%。     

逐级盐析法结合双水相萃取纯化葛仙米藻蓝蛋白

利用逐级盐析法结合双水相萃取对葛仙米藻蓝蛋白进行纯化,设计三因素二次回归正交旋转组合试验对提取工艺进行优化,并应用Design-Expert 7.0软件建立了各影响因素与萃取纯度的数学回归模型。结果显示最佳的提取工艺为:20%(NH4)2SO4盐析去沉淀后用40%和50%(NH4)2SO4盐析得藻蓝蛋白,再用质量分数10%的聚乙二醇6 000、质量分数18%的(NH4)2SO4进行双水相萃取。所得产物纯度可达到8.6,回收率为71.40%。对所得产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得到清晰的两条条带(条带1和条带2),其分子质量分别在35 ku和15 ku左右。通过质谱分析可知,条带2的分子质量为15 ku左右,等电点5.35,部分肽的氨基酸序列为TPLTEAVAAADSQGR和DIGYYLR。通过SWISS-MODEL网站模拟蛋白质结构得出,条带2可能是葛仙米藻蓝蛋白的α亚基。     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白提取和纯化工艺研究进展

藻蓝蛋白不仅是藻类的主要捕光色素蛋白，而且具有重要的开发利用价值。钝顶螺旋藻是藻蓝蛋白提取纯化的主要来源。简要介绍了螺旋藻和藻蓝蛋白的主要应用前景，综述了近些年从钝顶螺旋藻中提取和纯化藻蓝蛋白工艺的进展和现状，列举并比较了一些主要的提取和纯化方法。     

双水相技术分离纯化藻胆蛋白的研究进展

综述了双水相萃取技术的原理,应用于藻胆蛋白分离机纯化的特点,工艺流程,以及蛋白分离纯化的影响因素.并对双水相萃取技术在藻胆蛋白分离纯化中的应用前景作了展望.     

螺旋藻中藻蓝蛋白提取、纯化及稳态化研究进展

藻蓝蛋白是螺旋藻中一种主要功能性蛋白质,能占到螺旋藻(干基)的20％,也是一种天然着色剂(CNS:08.137).根据纯度(purity,P)藻蓝蛋白分为食品级(P>0.7)、试剂级(0.74.0)等多种规格,可以广泛应用于食品、化妆品及医药等领域;但藻蓝蛋白的光、热易敏性,以及不耐受酸碱的...     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取螺旋藻藻蓝蛋白的研究

对聚乙二醇-硫酸铵双水相体系直接从螺旋藻破碎液中萃取藻蓝蛋白的技术进行了研究。结果表明,对于藻蓝蛋白含量为0.282mg/mL的螺旋藻细胞破碎液,10%PEG2000与20%的硫酸铵双水相体系萃取藻蓝蛋白的效果最佳,经2次萃取,藻蓝蛋白总萃取率为96.1,藻蓝蛋白纯度达到1.2。     

红毛藻藻蓝蛋白的提取方法研究

采用多种方法从红毛藻中提取藻蓝蛋白。研究表明,组织捣碎法破碎细胞效率较高,60%饱和度硫酸铵盐析效果较好,并确定了最佳的提取工艺线路。     

红毛藻藻蓝蛋白的提取方法研究

采用多种方法从红毛藻中提取藻蓝蛋白。研究表明,组织捣碎法破碎细胞效率较高,60%饱和度硫酸铵盐析效果较好,并确定了最佳的提取工艺线路。      

鱼腥藻藻蓝蛋白的提取

以鱼腥藻 (Anabeana)为材料 ,利用超声波进行细胞破壁 ,采用正交试验 ,从中选出最优工艺条件 ,即原料重 (鲜重 ) 8倍体积的磷酸缓冲液 ,超声波功率 6 0 0W ,作用 9min后 ,静止 30min ,藻蓝蛋白释放完全 ,饱和度为 4 0 %的硫酸铵使藻蓝蛋白盐析的效果较好 ,紫外可见光谱、荧光光谱等测定表明 ,所提藻蓝蛋白分别在 6 5 1 6nm和 6 96 6nm处有明显特征吸收峰。     

逐级盐析结合双水相法纯化贯筋藤凝乳酶

为了高效制备贯筋藤凝乳酶,利用逐级盐析结合双水相萃取对贯筋藤凝乳酶进行纯化,研究成相物质、聚乙二醇(PEG)/盐最佳纯化配比及酶用量对酶凝乳纯化的影响,应用SDS-PAGE电泳技术检测贯筋藤凝乳酶的纯度。结果表明:当硫酸铵饱和度区间为20%~40%,贯筋藤粗酶比活力较高,为167.846 MCA/mg;当PEG相对分子质量为6000且质量分数为20.57%、盐相为硫酸铵且质量分数为14.74%,酶用量为1.0 mL时,贯筋藤凝乳酶活力提高1.87倍。电泳图显示贯筋藤凝乳酶纯度较高,分子量约为25 kDa。利用双水相法分离纯化可获得高纯度的贯筋藤凝乳酶,可为贯筋藤凝乳酶后续规模化生产及应用提供参考价值。     

盐析法联合离子液体双水相纯化木瓜蛋白酶

本实验以海南产番木瓜为研究对象,采取盐析法联合离子液体双水相对其富含的木瓜蛋白酶进行提取纯化。以不同饱和度的(NH4)2SO4对粗酶液进行盐析,通过实验结果分析,确定了以饱和度分别为20%和45%的两步盐析法的最佳条件。然后再进行双水相萃取,通过单因素试验结果设计3因素3水平的响应面试验,优化双水相萃取条件为离子液体[C4mim]N(CN)2质量分数29.76%、(NH4)2SO4质量分数16.08%、pH?8.18,在此最优条件下木瓜蛋白酶萃取率为89.01%,酶活力回收率为86.72%,所得到木瓜蛋白酶比活力为1?056?U/mg,纯化倍数达到9.6?倍。然后对实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,经纯化的酶中杂条带明显减少,验证了分离纯化的效果。     

废弃食用菌栽培块中纤维素酶的提纯工艺研究

利用废弃食用菌栽培块通过浸提、膜浓缩、盐析和双水相萃取等方法提取加工工业级和高纯度纤维素酶制剂。结果表明：采用含体积分数0.2% Triton X-100 的pH5.0、0.2mol/L 乙酸- 乙酸钠缓冲液作为酶浸提液,在25℃浸提3h 条件下可以抽提出102.64U/mL 的纤维素酶溶液,再在质量分数60% 的(NH4)2SO4 饱和度条件下可回收65.54% 的纤维素酶总活力,制备成酶活力达到2865.47U/mL 的工业级纤维素酶制剂;再经质量分数22% 聚乙二醇6000(PEG6000)-20%(NH4)2SO4 双水相体系在pH5.5、7mmol/L NaCl 条件下常温萃取,可获得酶活力为10208.46U/mL,酶比活力106.62U/mg 的高纯度纤维素酶,酶总活力得率为51.22%,纯度是浸提液的12.85 倍。     

双水相法提取木聚糖酶的初步研究

采用双水相法从黑曲霉AS3.4309 的发酵液中提取木聚糖酶,通过正交试验对双水相的组成进行优化。结果表明,双水箱体系最佳组成为：选用PEG4000,其浓度为19%(W/W),磷酸氢二钾浓度为10%(W/W),氯化钠浓度为0(W/W)。此条件下,木聚糖酶的提取效果较好,分离系数(K)和上相产率(Yt)分别为6.23 和88.67%。     

超声波辅助双水相提取条斑紫菜黄酮类物质及其抗氧化活性研究

利用超声波辅助丙醇-硫酸铵双水相体系提取紫菜中总黄酮,并优化提取条件,测定总黄酮提取物对羟自由基(·OH)的抑制活性。结果表明：本方法可有效地从紫菜中提取总黄酮,紫菜总黄酮提取率为0.148%,明显高于乙醇-水回流提取法。最优提取条件为醇水比为0.6、硫酸铵质量浓度0.30g/mL、超声时间20min、料液比0.04。紫菜中含有较丰富的黄酮类物质,提取物对·OH具有良好的抑制作用,是一种有效的天然自由基清除剂,具有很大的开发利用前景。     

双水相体系萃取藤茶蛇葡萄素工艺的优化

本文研究了聚乙二醇-硫酸铵双水相体系的组成对藤茶蛇葡萄素萃取率的影响。通过单因素实验研究了聚乙二醇相对分子质量、聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH和NaCl质量分数对萃取率的影响。其次通过Plackett-Burman设计筛选出对萃取率影响显著的三个因素,分别为聚乙二醇质量分数、硫酸铵质量分数、pH。利用响应面法对影响显著的因素进行进一步的优化。优化后的最佳萃取工艺为:聚乙二醇1000质量分数28%、硫酸铵质量分数11.2%、pH为6.0。在该条件下的理论萃取率为98.82%,经过工艺验证实际萃取率为98.53%,与预测值接近,比优化前萃取率（71%）提高了约17.53%,有利于蛇葡萄素的进一步分离纯化或应用。     

响应面优化双水相萃取分离酵母源MT工艺

采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件：PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。     

利用双水相萃取栀子黄废液中的栀子苷酶法生产栀子蓝色素的研究

研究有机溶剂/ 磷酸氢二钾双水相体系对栀子黄废液中栀子苷的萃取条件,并将萃取后的栀子苷用于栀子蓝色素的生产。根据分相后上下相中栀子苷的分配系数及两相体积比,选择合适的双水相体系,并改变溶剂与废液的体积比、磷酸氢二钾加入量、废液pH 值以及萃取温度等参数,研究萃取栀子苷的最佳条件。实验结果表明,乙醇/ 磷酸氢二钾为合适的萃取体系。当双水相体系总量为10ml 时,乙醇与栀子黄废液的体积比为6:4,加入磷酸氢二钾1.0g,体系分相完全后栀子苷分配系数(K)为4.56,两相体积比(R)为6.38,栀子黄废液pH 值及萃取温度在正常条件下对K 值及R 值影响不大。放大实验表明,以乙醇/ 磷酸氢二钾体系萃取栀子黄废液中的栀子苷,所得栀子苷纯度可达62.12%,收率可达96.32%。萃取后的栀子苷经β- 葡萄糖苷酶水解精氨酸显色后得到栀子蓝色素,色价E1% (590nm)65.92。