基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌的筛查

目的采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法对金桔表面细菌进行筛查,初步掌握金桔表面细菌分布情况,为金桔的食用安全提供科学依据。方法以4种常见食源性致病菌(沙门氏菌、阪崎肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌)为目标菌,同时分离未知菌,通过基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法进行鉴定。结果共从17个样品中分离到12种细菌,分别为产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、肺炎克雷伯菌、腐生葡萄球菌、木糖葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生癌肠杆菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、阪崎肠杆菌、分散团菌和恶臭假单胞菌。结论本方法能快速鉴定未知细菌,从金桔上分离到的细菌多数为条件致病菌,存在一定的食用风险。     

基于MALDI-TOF MS技术快速检测产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌

该研究探讨了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪快速鉴别产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的方法。通过对标准品进行分析,重新对特征峰进行定位并测定其灵敏度,并用正交试验分析不同培养条件下检验结果的差异,用优化后的培养条件对49株野生蜡样芽胞杆菌及3株标准菌株进行特异性检验。研究表明,MALDI-TOF MS可检测到产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌中呕吐毒素相应m/z值为1 175的[M+Na]+和m/z值为1 191的[M+K]+加合物特征峰,具有较高的灵敏度（0.01 μg/mL）,经极差分析显示,选用MYP培养基30 ℃培养12 h后的菌落能获得最稳定、响应值高（>104）的检验结果;方法应用验证表明,49株野生菌株中2株含ces基因的蜡样芽胞杆菌均检出,其余未含有ces基因的菌株均未检出。该研究建立的MALDI-TOF MS检测方法能直接快速准确检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,该方法检测特异性强（100%）,灵敏度高（0.01 μg/mL）,对于食品安全事故快速精准分析研判有重要的意义。     

MALDI-TOF质谱法分析与鉴定羊乳中的磷酸肽

基于基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立一种羊乳中磷酸化肽段的检测方法。以商品化二氧化钛(Ti O2)为富集材料用于羊乳中低丰度磷酸肽的富集,并优化了商品化Ti O2富集羊乳中磷酸肽的最佳吸附洗脱条件,得到的结果为,孵育缓冲液为乙腈∶水(50∶50,体积比)+1%三氟乙酸,洗脱液为氨水15%。接着探讨了脱脂对检测结果的影响,结果表明,通过MALDI-TOF MS分析实际乳磷酸肽时,需要对乳类样品进行脱脂才能更完整的鉴定磷酸肽,从羊乳中鉴定出八个磷酸化肽段通过Mascot数据库检索。本研究为乳类磷酸肽指纹图谱的建立提供了理论基础,指纹图谱的建立能够应用于掺假乳的快速鉴定。     

Fe 3O 4-COOH纳米材料对大肠杆菌菌株水平的指纹峰确定

通过合成Fe ₃O ₄COOH纳米颗粒提高MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌株水平的鉴别,并利用Fe ₃O ₄-COOH纳米对大肠杆菌K-12和大肠杆菌DSM 30083T裂解液中的菌体蛋白进行富集,不仅增加MALDI-TOF MS检测的分辨率和灵敏性,而且可以大大增加大肠杆菌菌株水平的指纹峰,根据实验结果,大肠杆菌K-12有4个匹配的指纹峰,而大肠杆菌DSM 30083T获得8个指纹峰,从而提高MALDI-TOF MS对大肠杆菌菌株水平的鉴别。     

MALDI-TOF质谱法分析与鉴定骆驼乳中的磷酸肽

建立一种基于基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）为基础的方法检测并鉴定骆驼乳中的磷酸化肽段。通过商品化的二氧化钛（Ti O₂）材料富集驼乳中低丰度的磷酸肽,并优化出Ti O₂富集材料与驼乳中磷酸肽相互作用最适宜的吸附洗脱条件,孵育缓冲液:乙腈/水（50∶50,v/v）+1%三氟乙酸,洗脱液为10%氨水。再将得到的磷酸肽溶液用MALDI-TOF MS方法检测,用Mascot数据库进行数据检索,能够从驼乳中鉴定出四个磷酸化肽段。本研究为不同哺乳动物乳中磷酸化肽段的检测提供了一些新的思路且能够应用于掺假乳的鉴别。      

MALDI-TOF-MS方法检测、鉴定副溶血性弧菌

目的 应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立快速检测和鉴定副溶血性弧菌的方法。方法 采用副溶血性弧菌标准菌株,在不同的培养基或不同的培养时间进行MALDI-TOF-MS检测,同时对长时间冷冻保存的菌株进行检测,以验证该方法的稳定性和重复性。对不同来源的菌株进行检测,以确认方法的准确性。结果 用PW、TCBS琼脂和弧菌显色培养基等3种培养基,以及分别培养18 h、42 h和72 h的细菌,对该菌的蛋白质谱图影响很小;保存2年的菌株,其MALDI-TOF-MS鉴定分值保持稳定;对来自不同国家和地区的不同来源的菌株都可以得到同样准确的结果。结论 MALDI-TOF-MS方法可以快速、准确地鉴定副溶血性弧菌。因其具有很好的稳定性和重复性,可用于副溶血性弧菌的日常检测。     

不同孵化时期鸡蛋蛋清小分子多肽的鉴定及功能分析

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF MS/MS)技术,比较不同孵化时期鸡胚蛋蛋清中产生的小分子多肽,研究肽段与鸡胚发育之间的联系。结果显示在孵化第0、6、14、16 d分别得到837、879、872和842条肽段(共3430条)。除丛生蛋白肽段外,大部分被鉴定到的肽段来源于蛋清中低丰度蛋白。其中926条肽段来源于与鸡胚先天免疫有关的9种蛋白质,如防御素、白细胞介素6等;256条肽段来源于与鸡胚呼吸系统发育相关的3种蛋白质,cx9C基序蛋白、sprouty蛋白和碳酸酐酶。结果表明由蛋清蛋白质内源性酶降解形成的小分子多肽可能对鸡胚发育时形成的呼吸和免疫系统等发挥重要作用。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)的纯化及氨基酸序列分析

本论文研究了超滤法和RP-HPLC对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)的纯化,利用MALDI SYNAPT Q-TOF MS和MS/MS对其氨基酸序列进行分析及推测。纯化去除了Lecitase Ultra中的山梨醇和山梨醇盐,纯度97.7%,酶蛋白和亚基的分子量为30838.0和16536.0。通过MALDI SYNAPT Q-TOF MS和MS/MS对酶蛋白进行分析,确定了Lecitase Ultra的氨基酸序列组成;进行数据库(http: //www.matrixscience.com)比对,发现其氨基酸序列信息与棉状嗜热丝孢菌(T. lanuginosus)脂肪酶和尖孢镰刀菌(F. oxysporum)脂肪酶高度吻合,序列中1-284是T. lanuginosus脂肪酶的氨基酸序列,序列中285-339是脂肪酶F. oxysporum脂肪酶的氨基酸序列,其中113、118和121可能是被基因突变成113 G-A、118 D-W和121 E-K。研究结果为进一步探讨Lecitase Ultra的三维空间结构及其活性中心催化机理提供了数据支撑。     

柠檬酸杆菌属基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱库的扩展及效果评价

目的 扩展基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)中柠檬酸杆菌属数据库.方法 采用PCR方法扩增并测序管家基因leuS进行系统发育分析鉴定菌种;采...     

MALDI-TOF MS技术在粮油与食品微生物快速鉴定领域的应用展望

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization time of fight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术,已在化工、医药、食品等领域得到广泛应用.其作为一种快速鉴定微生物的重要工具,高效、准确且结果可重复,且...     

副溶血弧菌检测方法研究进展

副溶血弧菌是海产品中常见致病菌,可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻等疾病。由于我国是海产品消费大国,所以必须建立快速、准确、灵敏的方法监测海产品中的副溶血弧菌。目前主要应用分子生物学方法和分析化学方法,从细胞水平和分子水平来检测副溶血弧菌,主要包括实时荧光定量PCR和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS),这两种方法可以对副溶血弧菌进行准确定性和定量,是检测食品中副溶血弧菌的快速、特异、灵敏的方法,可用来评估和监管海产品污染副溶血弧菌的风险,保证人们的饮食安全。      

包装饮用水中铜绿假单胞菌定性检测方法构建

该研究构建包装饮用水中铜绿假单胞菌定性检测方法并开展应用效果评价。通过低菌浓度接种,选取合适培养条件及增菌基础肉汤,通过单因素试验优化增菌液配方,通过多重比较优化选择分离培养基配方。以GB 8538-2022方法为对照,选取市售包装饮用水加入不同类别、菌量标准菌后,使用臭氧发生器分别通气0、30、60、90 min后,再进行膜过滤富集增菌-选择划线分离-MALDI-TOF MS仪鉴定的定性测试,比较两者的灵敏度、选择性、特异性,并选取不同类别样品进行应用效果测试。该研究构建的定性检测方法第一步增菌选取TSB添加甘露醇4 g/L配方,42 ℃培养6~8 h;第二步选择分离选取CN添加丙酮酸钠0.20 g/L配方,42 ℃培养24~48 h,利用MALDI-TOF MS仪对可疑菌可实现准确、快速、高通量鉴定。该法对铜绿假单胞菌的最低识别限为3 CFU/250 mL,可识别1 000~10 000 CFU/250 mL干扰菌,对不同样品的检测识别效果较现行国标差异显著（x2=25.45,P<0.05）,相对现有方法,具有灵敏度高、特异性强、简便安全、高效等技术优势。     

Hempseed protein derived antioxidative peptides: Purification,identification and protection from hydrogen peroxide-induced apoptosis in PC12 cells

Hempseeds have not been utilised to any significant extent by the industrial food markets. A novel antioxidant peptide derived from hempseed by-product was investigated. Hempseed protein isolate was prepared by alkaline extraction and subsequent isoelectric precipitation. Its enzymatic hydrolysate, obtained by Alcalase® treatment, was subjected to DA201-C macroporous absorption resin, with simultaneous desalting and concentrating of hydrophobic fragments with improved free radical-scavenging activities. The active fraction was further separated by gel filtration and reversed-phase high performance liquid chromatography to obtain two purified peptides; the peptides were characterised as NHAV and HVRETALV, by MALDI-TOF/TOF MS/MS. The protective effects of the purified peptides on hydrogen peroxide-induced cell apoptosis were investigated in rat pheochromocytoma line PC12 cells. The peptides, at a concentration of 10 μg/ml, possessed protective effects (P < 0.05) against cell death and oxidative apoptosis. The findings are significant for the discovery and development of natural antioxidants from hempseed by-products.     

Identification of glutaminyl sites on β-lactoglobulin for threadfin bream liver and microbial transglutaminase activity by MALDI-TOF mass spectrometry

The cross-linking of β-lactoglobulin (BLG) was efficiently catalysed by microbial transglutaminase (MTG) but not by fish (threadfin bream) liver transglutaminase (FTG). BLG cross-linking was inhibited by 2 mM 5-(biotinamido) pentylamine (BPNH₂) and MTG incorporated BPNH₂ into BLG ∼5 times more than was FTG. The glutaminyl sites for the incorporation of BPNH₂ into BLG by FTG and MTG were identified using matrix-assisted laser desorption/ionisation-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). MALDI-TOF MS analyses showed that MTG and FTG incorporated 4 and 1 residues of BPNH₂ per molecule of BLG, respectively. The BPNH₂-tagged BLG was digested by trypsin and BPNH₂-tagged peptides were selectively purified by avidin-affinity chromatography. Amino acid sequences of BPNH₂-tagged peptides were identified by comparing their MALDI-TOF mass spectra with the theoretical mass profiles from the MASCOT database. The BPNH₂-modification sites catalysed by MTG were glutamine (Q)13, Q68, Q15 or Q20, Q155 or Q159, whilst FTG only incorporated BPNH₂ into BLG at Q68. The different reactivities between FTG and MTG might be due to the different accessibilities of these TGases to the Q residues as well as to differences in substrate specificities.     

免疫富集联合MALDI-TOF MS检测奶粉中阪崎克罗诺杆菌的方法建立

目的:制备高效且特异性好的阪崎克罗诺杆菌抗体及其免疫磁珠,建立免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)检测奶粉中的阪崎克罗诺杆菌的方法。方法:制备阪崎克罗诺杆菌混菌抗体及其免疫磁珠,对免疫磁珠分别在纯培养及奶粉基质中的捕获率进行研究,利用MALDI-TOF MS对不同奶粉基质中不同杂菌污染条件下的检测样本进行鉴定并验证免疫磁珠的特异性。结果:阪崎克罗诺杆菌免疫磁珠在纯培养条件及奶粉基质中对4株阪崎克罗诺杆菌及其混菌的捕获率均>80%,联合MALDI-TOF MS鉴定结果显示在奶粉基质中不同杂菌污染条件下具有较好的鉴定结果,即使在高比例（1:100）杂菌污染条件下,仍能准确鉴定奶粉中阪崎克罗诺杆菌,此时检测样品中阪崎克罗诺杆菌浓度仅为20 CFU/mL。结论:本研究建立了一种操作简便、鉴定结果准确的免疫富集联合MALDI-TOF MS检测奶粉中阪崎克罗诺杆菌的方法,为奶粉中阪崎克罗诺杆菌的快速准确鉴定提供了新的方法参考。     

不同处理方法对芽苗菜表面微生物的控制和消除

为了深入研究即食蔬菜在不同处理下微生物的消长变化及种群结构变化规律,本实验从芽苗菜入手,采用水洗,辐照、冷热激,含氯消毒剂、有标识杀菌成分的清洗剂等5种方法对芽苗菜进行处理,建立微生物总数动态生长模型,利用微生物宏基因组学的方法调查处理前后的微生物种群丰度变化,选择性培养后采用基质解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)对优势种群进行鉴定。实验结果表明即食芽苗菜微生物总数稳定在一个数量级(5~6 lg CFU/g),处理会将微生物种群结构平衡打破,但经过一段时间微生物总量会恢复之前稳定水平。其中辐照方法影响最为明显;水活性方法(水洗,冷热激,有标识杀菌成分的清洗剂清洗)影响相对较小且恢复较快,但内含不同成分,微生物控制效果稍有差异。实验结论为处理原理的差异是影响微生物种群结构的主要原因。此外辐照方法会将芽苗菜优势种群假单胞菌属和乳酸菌属改变为芽孢菌属,并在其中检出蜡样芽孢杆菌,增加了食用安全风险,就是说即食蔬菜微生物的控制最有效的方法并不一定是最安全的方法。在即食果蔬微生物控制中不仅要考虑微生物总量的降低也需要综合微生物微观生态学的其他因素。     

利用基体辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析水温对奶粉蛋白质的影响

利用基体辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析不同水温冲调下奶粉中部分蛋白质相对含量的变化,从而获得其蛋白质成分的变化规律。实验选取11个目标离子峰,对样品进行15次平行测定,每个目标离子峰每次测得的m/z值相差均不超过3,相对误差不超过0.19%,相对标准偏差不超过0.19%。最终数据为15个平行实验结果的切尾平均值。结果表明,随着水温的升高,奶粉中蛋白质逐渐发生热变性;当水温高于70℃时,奶粉蛋白变性程度开始显著增加。推荐以40℃左右水冲调奶粉为宜。     

不同品种茶叶单宁的含量与结构测定

测定了本山、黄旦和铁观音三个品种茶树成熟叶片的总酚及可溶缩合单宁含量,并通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)研究了茶叶缩合单宁的基本结构。结果显示,三种茶叶均具有较高的总酚含量,大约为200mg/g;三种茶叶的缩合单宁是以(表)儿茶素(EC/C)和(表)棓儿茶素(EGC/GC)为基本结构单元的均聚物和杂聚物,且大部分聚合物的结构单元之间存在A 型和B 型两种连接方式,其中本山和黄旦缩合单宁的最高聚合度要大于铁观音。