奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗的制备及其对小鼠的保护效果

目的制备奇异变形杆菌-金黄葡萄球菌-铜绿假单胞菌(Proteus mirabilis-Staphylococcus aureus-Pseudomonas aeruginosa,PSP)吸附联合疫苗,并检测其对小鼠的保护效果。方法通过不同生产工艺制备奇异变形杆菌胞膜抗原(Proteus mirabilis membrane antigen,PMA)、金黄葡萄球菌胞质抗原(Staphylococcus aureus cytoplasmic antigen,SCA)金黄葡萄球菌类毒素抗原(Staphylococcus aureus toxoid antigen,SEA)及铜绿假单胞菌类毒素抗原(Pseudomonas aeruginosa toxoid antigen,PEA),按照一定配伍方式与Al(OH)_3佐剂形成PSP吸附联合疫苗,经腹腔注射小鼠,测定其保护效果。结果 6价PMA抗原对奇异变形杆菌6株疫苗株保护率为50%~100%;PSP吸附联合疫苗对奇异变形杆菌PM104的保护率为80%,对铜绿假单胞菌PA101的保护率为100%,对2株金黄葡萄球菌SA79和CMCC26002的保护率分别为90%和60%,对金黄葡萄球菌CMCC26002 α-毒素的保护率为70%。PSP吸附联合疫苗对同群异源菌株交叉保护率达70%以上的比例为:奇异变形杆菌占61.11%;金黄色葡萄球菌占50%;铜绿假单胞菌保护率占92.86%。结论 PSP吸附联合疫苗对疫苗株具有保护性,也对同群菌株具有保护性,为进一步临床研究提供了理论基础和技术支持。     

天然胶乳橡胶避孕套微生物限度方法学验证

按照中国药典有关微生物限度检查法,对进口天然胶乳橡胶避孕套进行微生物限度方法学验证,发现不同厂家的避孕套对细菌有不同的抑菌作用,供试品浓度采用1∶0,细菌菌落总数采用培养基稀释法检验(0.5mL/皿),真菌、大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌控制菌检查采用常规方法检验。     

m(C)/m(P)对污泥絮体中磷形态与分布及除磷能力的影响

采用连续流强化生物除磷系统(EBPR),研究进水m(C)/m(P)对聚磷菌(PAOs)的除磷能力和污泥絮体中磷的形态与分布的影响。结果表明,在进水m(C)/m(P)分别为100、65、45条件下,系统有稳定高效的除磷效果,磷的去除率维持在88%以上。将进水m(C)/m(P)由100降低至45,PAOs可以合成和消耗更多量的单位污泥胞内聚合物,污泥好氧消耗单位PHA的吸磷量由0.52 mg/(mg·L)提高至0.64 mg/(mg·L);低m(C)/m(P)的污泥表现出更高的TP和各形态磷含量,且在厌氧、好氧过程中,污泥中TP和无机磷有更大的增加量,对应着更显著的生物除磷过程,对应着低m(C)/m(P)的污泥絮体有更强的好氧吸磷能力。     

铜绿假单胞菌3型O-特异性多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫特性分析

目的研制铜绿假单胞菌3型O-特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)-破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)结合疫苗,并分析其免疫特性。方法采用热酚水法提取铜绿假单胞菌国际抗原分型系统(International Antigen Typing System,IATS)3型菌株的脂多糖(Lipopolysacchride,LPS),去除类脂A后纯化O-SP,用1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化O-SP,己二酸二肼(ADH)作为连接臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下,与TT结合制备O-SP-TT结合疫苗,检测其理化性质,并分析结合疫苗的免疫原性和免疫保护性。结果 O-SP收获量相当于水解LPS量的30%,其蛋白质和核酸含量均低于1.0%,O-SP衍化度为3.83%,O-SP与TT的结合率约为40%,多糖蛋白质比(w/w)为1∶2.18。O-SP-TT结合疫苗可刺激小鼠产生高效价的IgG抗体,与O-SP组相比,差异有统计学意义(P0.05);结合疫苗免疫小鼠能保护5 LD50和10 LD50活菌的攻击,小鼠免疫O-SP-TT后兔抗血清对3 LD50和5 LD50活菌攻击具有良好的保护作用。结论制备的铜绿假单胞菌3型O-SP-TT结合疫苗具有良好的免疫原性和免疫保护性,该疫苗有望成为防治IATS 3型铜绿假单胞菌感染的有效疫苗。     

2种形态铜绿假单胞菌在氯消毒过程中消毒副产物研究

为研究悬浮和附着生长下的铜绿假单胞菌经氯消毒后消毒副产物的生成情况,以无菌生理盐水模拟悬浮生长环境,选取镀锌材料建立附着生长模型,采用UFC法进行加氯试验,气相色谱分析。结果表明,2种形态下的铜绿假单胞菌均为消毒副产物前驱物质,主要副产物包括三卤甲烷(THMs)、三氯乙腈(TCAN)和水合三氯乙醛(CH),且THMs符合TOC含量、单位耗氯量大小关系,而TCAN和CH则相反,可能是由生物膜胞外聚合物中的某种蛋白质结构引起。Br-的存在对CHCl3和TCAN产生抑制作用,转而形成更多的CHBr3和二溴乙腈,当Br-的质量浓度为2 mg/L时,CHBr3和二溴乙腈含量达到最大值,且主要影响总THMs和卤乙腈的含量,溴氯甲烷和溴氯乙腈的含量均随Br-含量的增加而先升高后降低。     

再生水处理过程微生物种群分析

以某再生水厂处理水为研究对象,对夏季(7月)水样进行了微生物多样性的分子生物学研究,结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析了总进水、混凝沉淀出水、微滤出水、臭氧出水、反渗透出水和清水池出水中的微生物种群。应用PCR方法获得6个特异片段,并对其进行测序检索,分析了其可能代表的菌株,通过此方法获得了传统培养方法无法得到的菌株。研究发现,再生水处理过程中存在的菌种有鞘氨醇单胞菌、黄杆菌属和假单胞菌属,前两者可降解有机污染物,后者具有脱氮作用;同时上述细菌也具有一定的致病性和腐蚀性,若出厂水中含有上述细菌,则因其在再生水管网中的繁殖,有可能导致供水水质恶化,加速管网腐蚀。因此,水厂出水应加强消毒,控制微生物数量,保证再生水输配管网的供水安全。     

采油微生物YM4中试发酵培养基配方优化

对一株采油铜绿假单胞菌YM4发酵生产鼠李糖脂的培养基组成及培养条件进行了优化,优化后培养基组成为:糖蜜粉4%,玉米浆0.5%(V/V);最佳培养条件为:500 m L三角瓶装液量为100 m L,接种量10%,初始p H 7.2,35℃,180 r/min摇床培养24 h。在此条件下,发酵液的表面张力可达到28.08 m N/m,界面张力达到10-2 m N/m,比优化前节约原料成本74%。     

氮/磷缺乏对污泥沉降性能及丝状菌生长的影响

在4个序批式反应器中,分别考察了氮磷正常供给、磷缺乏、氮缺乏及氮磷同时缺乏对污泥沉降性能和丝状菌生长的影响。结果显示:磷缺乏会导致聚磷菌流失,限制菌胶团菌对碳源的贮存和利用,导致胞外聚合物中蛋白质的含量减少,SVI达到200～250 ml·g?1;氮缺乏对聚磷菌生长及菌胶团菌贮存利用碳源的影响较小,能刺激菌胶团菌大量分泌蛋白质,SVI低于100 ml·g?1;短期内氮磷同时缺乏会导致污泥沉降性能恶化,但经长期驯化后微生物种群结构会发生较大改变,丝状菌数量减少,且会滋生大量球状菌胶团菌,SVI在120 ml·g?1左右。进水磷缺乏的优势丝状菌为N.limicola II;进水氮缺乏的优势丝状菌为Type 0092;进水氮磷同时缺乏的优势丝状菌为N.limicola I。氮磷缺乏所滋生的丝状菌种类对污泥沉降性能均只能产生有限的影响。     

非特殊彩妆类化妆品的微生物检测方法的评价

对非特殊彩妆类化妆品的微生物检测方法进行评价。参考《中国药典》（2010年版）微生物限度的方法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌为试验菌株进行回收试验,同时增加阳性对照组考察控制菌的检验方法。除彩妆A的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌外,其他所有试验菌株的回收率均大于70%,而且当采用培养基稀释法（1∶100的供试液,1 mL）时,彩妆A的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念珠菌的回收率均大于70%;大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的阳性生长率为100%,金黄色葡萄球菌阳性生长率为86%。目前的检测方法基本适合非特殊彩妆类化妆品的微生物检测。     

好氧反硝化菌在含硫酸盐废水中的脱氮性能研究

考察了不同硫酸盐浓度对好氧反硝化菌铜绿假单胞菌CP1反硝化过程的影响。结果表明,随着硫酸盐浓度的增加,菌株CP1反硝化时间逐渐缩短,脱氮速率加快,硫酸盐为300 mg/L,菌株CP1获得最优的脱氮效果;当硫酸盐增加到750 mg/L时,反硝化时间大大延长,脱氮速率降低。在硫酸盐为450 mg/L时,菌株获得最大的脱氮速率,可达到48.83 mg/(L·h)。在0~1 200 mg/L硫酸盐质量浓度范围内,出水均无NO2--N累积。硫酸盐含量在整个反硝化过程中无明显变化。     

氮/磷缺乏对污泥沉降性能及丝状菌生长的影响

在4个序批式反应器中,分别考察了氮磷正常供给、磷缺乏、氮缺乏及氮磷同时缺乏对污泥沉降性能和丝状菌生长的影响。结果显示：磷缺乏会导致聚磷菌流失,限制菌胶团菌对碳源的贮存和利用,导致胞外聚合物中蛋白质的含量减少,SVI达到200～250 ml·g^-1;氮缺乏对聚磷菌生长及菌胶团菌贮存利用碳源的影响较小,能刺激菌胶团菌大量分泌蛋白质,SVI低于100 ml·g^-1;短期内氮磷同时缺乏会导致污泥沉降性能恶化,但经长期驯化后微生物种群结构会发生较大改变,丝状菌数量减少,且会滋生大量球状菌胶团菌,SVI在120 ml·g^-1左右。进水磷缺乏的优势丝状菌为N. limicola Ⅱ;进水氮缺乏的优势丝状菌为Type 0092;进水氮磷同时缺乏的优势丝状菌为N. limicola I。氮磷缺乏所滋生的丝状菌种类对污泥沉降性能均只能产生有限的影响。     

氮负荷波动对厌氧氨氧化/反硝化协同脱氮效能影响

在厌氧折流板反应器(ABR)中探究厌氧氨氧化菌和异养反硝化菌的分步培养，以及进水氮负荷波动对系统性能的影响。结果表明，维持C/N为0.65，逐步提升总氮负荷(NLR),50 d左右可实现厌氧氨氧化与反硝化协同脱氮，总氮去除率可达95.8%。NLR波动值低于1.04 kg/(m³·d)时，对工艺脱氮性能无显著影响。负荷变化幅度越大，厌氧氨氧化菌活性受抑制越显著，对反硝化菌基本无影响，负荷波动值达到2.10 kg/(m³·d)时厌氧氨氧化对氮的去除贡献(C_A)下降至54.8%，反硝化耦合厌氧氨氧化协同脱氮可有效提升系统的稳定性。胞外聚合物(EPS)对系统负荷波动有较好的响应规律，负荷波动越大，EPS提高越多，有利于提高系统性能的稳定性。     

厌氧氨氧化SBBR启动过程中菌群演替分析

采用序批式生物膜反应器(SBBR),以混合污泥作为接种污泥,研究了反应器启动过程中菌群演替规律。结果表明,通过逐步提高进水NH4+-N和NO2--N含量的方式将SBBR的N容积负荷由0.10 g/(L·d)提升至1.164 g/(L·d),经过144 d成功启动厌氧氨氧化SBBR,TN去除率达93.92%,厌氧氨氧化活性为5.86 mg/(g·h)。在反应器启动过程中,厌氧氨氧化菌的丰度不断升高,其它非功能菌的丰度逐渐降低。稳定运行期,浮霉菌门在活性污泥和生物膜上的丰度有显著的差异,前者为8.83%,后者为24.21%。3种检出的厌氧氨氧化菌属在活性污泥和生物膜上的差异也十分明显,Candidatus Jettenia、Candidatus Brocadia和Candidatus Kuenenia在活性污泥中的丰度分别为2.89%、2.29%和0.65%,而在生物膜的丰度分别为10.04%、5.93%、2.22%。     

进出口化妆品的卫生状况及微生物种群分析

对2009～2011年上海口岸进出境化妆品的卫生状况进行调查,研究化妆品中微生物的种群及其生化共性。采用《化妆品卫生规范》（2007版）及ISO 18415：2007（E）《化妆品-微生物学-指定菌和非指定菌检测》中规定的方法进行检测,结果发现,在31 460份样品中,菌落数含量≥10CFU/g（mL）的样品有68份,检出率为0.22%。其中超过限量标准范围的样品39批,不合格率为0.12%。进出口化妆品中的检出率最高的细菌为需氧芽孢杆菌,占42.4%,其次为假单胞菌属和葡萄球菌属细菌,未检出指定的致病微生物。生化聚类分析显示低营养要求和防腐剂耐受的细菌易在化妆品中定殖并影响产品质量。     

高负荷冲击下厌氧氨氧化反应器的快速启动策略

为实现高负荷冲击下厌氧氨氧化反应器的快速启动，通过调节进水负荷，设置出水回流，启动以海绵为载体的上流式厌氧污泥床反应器。实验前期进水氮负荷为4 kgN/(m³·d)，启动27 d后添加出水回流，氨氮去除率达80%，总氮去除率达51%。第37天时提高氮负荷至6 kgN/(m³·d),41 d系统达到稳定运行，总氮去除率可达74%。在高流速冲击下利用海绵作为填充物，水力冲击使微生物分泌大量胞外聚合物，并黏附在多孔的海绵体上，形成稳定的生物载体。高通量测序结果表明，Candidatus Kuenenia为主要的厌氧氨氧化菌，其丰度为8.1%。在高负荷冲击下通过海绵填充和设置出水回流可以快速启动厌氧氨氧化反应器，为高负荷下厌氧氨氧化反应器的启动提供了新思路。     

C/P对长泥龄MPR脱氮除磷及污泥特性的影响

针对长泥龄运行下(SRT=100 d)的微压内循环多生物相反应器(MPR),探究不同进水C/P(分别为110、53、39)对系统脱氮除磷以及污泥特性的影响。实验结果表明,当进水C/P分别为110、53、39时,TP去除效率分别为95.42%、81.43%、55.91%,除磷效率明显降低。TP出水质量浓度随C/P变化的拟合公式为y=23.66/(x-30),R²达到0.99。根据拟合结果计算出满足出水达标的最低C/P为77。拟通过投加碳源来解决高磷出水达标的问题,最小碳源投加量随C/P变化的拟合公式为y=11.60-204.46ln(x-25.63),R²达0.96。系统中MLSS、MLVSS、MLVSS/MLSS随C/P的降低而下降,SV、SVI上升,污泥中微生物数量减少,沉降性能下降,微型动物种类丰富度减少、活性污泥性状变差,到C/P=39末期PAOs淘洗出系统,丝状菌及其他异养菌开始增殖。由于长SRT运行与反应器结构的优势,进水C/P的变化对COD、NH₄⁺-N、TN去除效果影响较小,去除效率分...     

2007年我院呼吸道感染病原菌耐药性分析

目的了解我院2007年痰培养细菌的种类及耐药性。方法对我院2007年痰标本分离出的病原微生物的药敏试验结果进行回顾性统计分析。使用德灵诊断产品有限公司的Microscan微生物分析仪鉴定。结果从255份送检标本分离出细菌271株,其中革兰阳性菌占35.06%,革兰阴性菌占64.94%,分离率最高为肺炎克雷伯杆菌36株,占13.3%;其次金葡球菌27株,占10.0%;第三为铜绿假单孢菌26株,占9.6%。革兰阴性菌中敏感率最高的是亚胺培南(硫霉素),肺炎克雷伯菌的耐药率2.8%,大肠埃希氏菌耐药率5.3%,但铜绿假单胞菌和短黄杆菌耐药率相对较高分别是11.5%和为15.4%,然后是阿米卡星。革兰阳性菌金葡球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌中敏感率最高的是万古霉素100%,其次是利福平和四环素,耐药率最高的是青霉素和氨苄西林,以上3种细菌对它们的耐药率均是100%。结论革兰阴性菌分离率高于革兰阳性菌。革兰阴性菌耐药状况严重,敏感率最高的是亚胺培南(硫霉素)90.18%、然后依次是阿米卡星76.92%;金葡球菌、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌等革兰阳性菌存在严重耐药性,敏感率最高的是万古霉素。     

混合菌的构建及其对3,4-二氯苯胺的生物转化

从染料废水中分离出以3,4-二氯苯胺（3,4-DCA）为唯一碳源和能源生长的革兰氏阴性菌，筛选其中两株形态差异较大的菌株P11-1和L13构建混合菌群，用于3,4-DCA的转化实验以消减其毒性。通过优化两株菌配比构建混合菌群，3,4-DCA转化率达73.33%，明显高于单菌。经菌株形态观察和16S rDNA序列分析，确定两株菌均为铜绿假单胞菌。以单因素实验考察混合菌群在3 d内对100 mg/L 3,4-DCA的转化能力，并通过正交实验进一步优化转化条件，得出最佳条件组合为：接菌量3%（体积分数），温度30 ℃，pH=8.0，摇床转速190 r/min，在此条件下转化率达89.26%，其中pH对菌群转化能力影响最大。GC-MS分析菌群代谢产物主要为3,4-二氯乙酰苯胺，酶活分析发现了较高的N-乙酰基转移酶（NAT）活性，即菌群通过乙酰化对3,4-DCA进行解毒。     

厌氧-限氧SBR处理低C/N生活污水SNDPR启动及N2O释放

以厌氧-限氧方式运行序批式生物反应器（SBR）,采用逐步降低进水碳氮比（C/N）方式驯化聚磷菌（PAOs）和聚糖菌（GAOs）,启动了低C/N生活污水同步脱氮除磷过程（SNDPR）,并考察了SNDPR内PAOs、GAOs间竞争关系及系统脱氮除磷性能过程N₂O释放特性。结果表明,C/N=7.0,SBR限氧段脱氮和除磷效率分别为83.5%和90%以上,N₂O产量为0.54 mg/L;C/N=3.0~3.5,脱氮和除磷效率分别降至60.1%和80.5%,N₂O产量达1.09 mg/L。SBR内不同反应阶段内源物质变化均表现出PAOs-GAOs共存特性。高C/N有利于微生物合成聚-β-羟基烷酸酯（PHA）并促进N₂O还原。C/N降低,SBR内污泥内源物质转化倾向于富集GAOs的降解特性。氨氧化菌（AOB）好氧反硝化过程及GAOs以PHA作为电子供体的内源反硝化过程促进了N₂O的释放。随C/N降低,SBR内污泥平均胞外聚合物（EPS）由43.4 mg/g VSS增至50.5 mg/g VSS,污泥容积指数（SVI）由99 ml/g增至127 ml/g。疏松型EPS（LB-EPS）内,蛋白质（PN）与多糖（PS）之比（PN/PS）随C/N增加而降低,污泥亲水性增加,不利于污泥脱水。     

北京分离株Gassericin T基因的克隆、表达及活性检测

目的克隆格氏菌素T基因,在原核细胞中表达,并检测其抑菌活性。方法通过PCR技术,从3株L.gasseri北京分离株中特异性扩增格氏菌素T的成熟肽DNA编码片段(V11/gatA和V441/gatA),经TA克隆和序列测定后,进行同源比较分析。双酶切后的目的片段与表达载体pGEX6P1连接,得到高效融合表达质粒pGEXgatA/V11和pGEXgatA/V441,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS,IPTG诱导表达,并检测表达产物的抑菌活性。结果目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约29%。重组格氏菌素对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、痢疾志贺氏菌和伤寒沙门氏菌具有明显的抑制生长作用。结论所获得的重组格氏乳杆菌素具有明显的抑菌活性,有望成为新型抗菌素。