若羌灰枣多糖的磷酸化修饰及其抗氧化活性研究

用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠对纯化后的若羌灰枣多糖(RQGJPs)进行磷酸化修饰，以磷酸化修饰多糖(M-RQGJPs)的取代度作为评价指标，优化磷酸化修饰的反应参数，并分析M-RQGJPs对DPPH·、·O^-₂、·OH的清除率。结果表明：RQGJPs磷酸化修饰的最佳反应参数为反应时间5 h、反应温度80℃、pH 9.5,在此条件下磷酸化取代度为0.092±0.004;在试验质量浓度范围内，M-RQGJPs对DPPH·、·O^-₂、·OH的清除率分别提高了45.2%、68.9%和72.0%,说明磷酸化修饰对RQGJPs的抗氧化活性有明显提升作用。     

酶底比对玉米蛋白水解物抗氧化活性的影响

为改善玉米蛋白的功能特性,开发其生理活性,采用复合蛋白酶(Protamex)和碱性蛋白酶(Alcalase)对高底物浓度1:10(m/v)玉米蛋白进行协同水解,研究酶底比对蛋白水解物的DPPH自由基清除率、·OH清除活性、Fe2+螯合能力、还原力、水解度(DH)和可溶性蛋白含量的影响。结果表明,在试验范围内,Protamex+Alcalase顺序协同水解玉米蛋白的最适酶底比为:2.0%+2.0%(w/w),此时玉米蛋白水解物的DPPH自由基清除率(82.01±0.62)%,·OH自由基的清除活性为(78.8±0.56)%,Fe2+螯合能力为(43.3±1.20)%,还原力为0.43±0.03,DH为(19.93±0.59)%,可溶性蛋白含量为(63.20±0.04)mg/m L;Alcalase+Protamex顺序协同水解玉米蛋白的最适酶底比为:0.5%+0.5%(w/w),此时玉米蛋白水解物的DPPH自由基清除率(84.99±0.20)%,·OH自由基的清除活性为(89.9±1.63)%,Fe2+螯合能力为(40.95±0.43)%,还原力为0.454±0.01,DH为(9.43±0.70)%,可溶性蛋白含量为(40.54±0.01)mg/m L。因此,酶底比显著影响了玉米蛋白水解物的抗氧化活性。     

甘谷二肽的抗氧化活性及氧化损伤的保护作用

以N-叔丁氧羰基-甘氨酸和N′-三苯甲基-L-谷氨酰胺为原料，以氯甲酸异丁酯为酸酐，采用混合酸酐法合成甘谷二肽，利用红外光谱进行表征，并探究甘谷二肽的还原能力、对DPPH·、·OH、·O^-₂的清除能力及对线粒体和蛋白质氧化损伤的保护作用。结果表明：合成产物在1 699.67 cm^-1处出现酰胺键C═O的伸缩振动，为甘谷二肽；甘谷二肽具有较强的·OH和·O^-₂清除能力，其·OH和·O^-₂的IC₅₀分别为0.625、5.108 mg/mL,但对DPPH·的清除能力及还原能力效果较差；甘谷二肽能够抑制线粒体氧化损伤和蛋白质氧化损伤。     

体外消化对玉米谷蛋白酶解物抗氧化活性的影响

以玉米蛋白粉为原料提取玉米谷蛋白,利用蛋白酶对其进行酶解,制备蛋白水解物,再用胃蛋白酶及胰蛋白酶对其进一步消化处理,以抗氧化活性为指标对消化过程中蛋白酶加量进行优化,制备富含谷氨酰胺的具有抗氧化功能的蛋白水解物。结果表明,玉米谷蛋白经复合蛋白酶水解后,蛋白收率(54.41±3.26)%,水解物的羟基自由基清除率、亚铁离子螯合能力及还原力分别达到(29.50±0.31)%、(73.33±0.62)%及0.50±0.01;二步消化后蛋白水解物羟基自由基清除率、亚铁离子螯合能力及还原力分别达到(55.88±0.94)%、(90.44±0.01)%及0.40±0.01。     

蓝圆鲹多肽亚铁螯合物制备及其抗氧化性

利用木瓜蛋白酶水解蓝圆鲹蛋白制得多肽,研究pH、温度和时间等因素对多肽与亚铁离子螯合反应的影响;以自由基清除率为指标,研究不同分子量多肽与亚铁离子螯合物的抗氧化作用。结果表明,最佳螯合条件为:pH6,温度25℃,时间10 min,螯合率达到95.6%;抗氧化试验表明,多肽分子量在1 570～4 100 Da和170～1 230 Da范围内,亚铁离子螯合物具有较强的抗氧化作用,对羟基自由基(·OH)、超氧自由基(O_2~-·)和1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)自由基最大清除率分别为50.41%, 40.35%和55.46%。     

驼血蛋白酶解制备抗氧化肽工艺参数

由于骆驼特殊的生存环境,使得驼血组成及含量不同于其他动物血液,其蛋白质含量尤其丰富,具有较高的生物活性。研究通过单因素、正交试验,以水解度为评价指标,研究了复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和胃蛋白酶对驼血酶解的影响,确定了4种蛋白酶水解驼血的最优条件。在单因素正交试验基础上,以DPPH·清除能力、亚铁离子螯合能力、总抗氧化能力(ABTS法)为评价指标,确定了胃蛋白酶是水解驼血制备抗氧化肽的最佳蛋白酶;并在此基础上对胃蛋白酶水解产物超滤组分进行抗氧化活性检测,确定了组分Pep-1(10 ku)抗氧化活性最强,其DPPH·清除率为72.6%,铁离子螯合能力94.9%,总抗氧化能力(ABTS法)为1.433 mmol/g。     

油茶籽粕多糖不同分子修饰产物的抗氧化活性

为比较不同修饰方法对油茶籽粕多糖抗氧化活性的影响,通过硫酸酯化、羧甲基化及乙酰化3种方法对纯化的油茶籽粕多糖(COP)进行分子修饰,以制备具有不同取代度的COP。采用体外实验法,以羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(·O^-₂)及DPPH自由基(DPPH·)清除率为指标,探究COP及其分子修饰产物的抗氧化活性。结果表明：较低取代度的硫酸酯化修饰能提高COP对·OH、·O^-₂以及DPPH·的清除能力;高取代度的羧甲基化修饰能提高COP对·OH的清除能力,低取代度的羧甲基化修饰则能提高COP对DPPH·的清除能力;高取代度的乙酰化修饰COP对·OH和DPPH·的清除效果更好;羧甲基化修饰和乙酰化修饰COP均会削弱其对·O^-₂的清除能力。总之,适度的分子修饰能提高COP的抗氧化活性。     

不同等级荞麦粉抗氧化性研究

以中国固阳荞麦和加拿大温莎荞麦籽粒为材料,采用石磨法磨制荞麦粉,以出粉率不同收集全粉(90%)、普粉(75%)、精粉(60%)和营养粉(40%)4个等级粉,采用甲醇提取荞麦粉抗氧化物质,分析其抗氧化活性。结果表明,荞麦营养粉的总酚、总黄酮含量最高,精粉最低。固阳荞麦营养粉的总酚和总黄酮含量分别为(3.80±0.05)和(5.49±0.20)mg/g,加拿大温莎荞麦营养粉的总酚和总黄酮含量分别为(4.10±0.09)、(5.45±0.05)mg/g。荞麦营养粉的总抗氧化能力显著高于全粉,全粉显著高于精粉。荞麦各等级粉对DPPH·、·OH及ABTS+·均具有一定的清除能力,清除作用大小为营养粉全粉普粉精粉。固阳荞麦营养粉具有更高的亚铁离子螯合能力,加拿大温莎营养粉和全粉的亚铁离子螯合能力显著高于普粉和精粉。荞麦粉总抗氧化能力、DPPH·清除率、·OH清除率、ABTS+·清除率、亚铁离子螯合能力与总酚、总黄酮含量呈高度正相关。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

5种杂豆体外抗氧化性研究

对5个不同属的红小豆、小扁豆、红芸豆、蚕豆、鹰嘴豆等杂豆品种的体外抗氧化活性进行研究。结果表明,不同属的杂豆品种间抗氧化能力差异显著(P0.05);杂豆中总酚、总黄酮、原花青素含量分别在1.24~15.07、0.68~17.55、1.08~11.61 mg/g之间,其中小扁豆属的品种总酚含量最高;杂豆对DPPH·和·OH均具有一定的清除作用,小扁豆的铁还原能力(FRAP)(1 033.38~1 475.07μmol/g)、DPPH·清除能力(93.62%~95.96%)和亚铁离子螯合能力(10.48 mg/g)相对较高;菜豆属的品种对·OH清除能力较强(88.55%~93.59%),豇豆属的杂豆品种对·OH清除率较弱(59.74%~66.33%);蚕豆的亚铁离子螯合能力较强(9.07~9.18 mg/g),深红芸豆的亚铁离子螯合能力最弱(1.89 mg/g)。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

响应面法优化金丝皇菊多酚提取工艺及其抗氧化活性评价

以金丝皇菊为试验对象,采用超声波辅助法提取多酚。在单因素试验的基础上,采用响应面法对金丝皇菊多酚的提取工艺进行优化。通过考察其对ABTS⁺·、·O^-₂、·OH和DPPH·的清除作用,评价多酚的体外抗氧化活性。结果表明：提取金丝皇菊多酚的最佳工艺为料液比1∶30(g/mL)、乙醇体积分数85%、超声温度54℃,在此条件下多酚得率为9.34 mg/g。自由基清除试验表明,金丝皇菊多酚的清除能力与其质量浓度呈正相关,对ABTS⁺·、·O^-₂、DPPH·、和·OH的IC₅₀分别为0.796、0.354、0.574、0.768 mg/mL。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。     

玉米蛋白水解条件对蛋白水解物体外解酒活性的影响

玉米蛋白粉是玉米湿法生产淀粉的副产物,含蛋白质质量分数62%~71%。玉米蛋白粉疏水性强的特点限制了其在食品行业的应用。但是,玉米蛋白具有特殊的氨基酸组成,且在其多肽链中存在促酒精代谢、抗氧化等功能区,这为其功能性的表现提供了良好的原料优势。利用碱性蛋白酶(Alcalase)和复合蛋白酶(Protamex)对高底物质量浓度(10 g/100 m L)玉米蛋白进行水解,研究水解条件对蛋白水解物的乙醇脱氢酶(ADH)激活率、·OH清除活性和蛋白回收率的影响。结果表明Alcalase水解玉米蛋白的适宜条件为酶解温度65℃,p H 8.0,加酶量2.5%,时间2h,该条件下蛋白水解物的ADH激活率为18.62%,·OH清除率为82.9%,蛋白回收率为25.08%;Protamex水解玉米蛋白的适宜条件为酶解温度55℃,p H 7.0,加酶量2.5%,时间2 h,该条件下玉米蛋白水解物的ADH激活率为9.67%,·OH清除率为82.0%,蛋白回收率为17.63%。Alcalase和Protamex顺序协同水解(酶底比为1.5%+1.5%)所得玉米蛋白水解物的ADH激活率达到19.71%,·OH的清除率达到76.7%,蛋白回收率为52.63%。优化条件下蛋白水解物多肽分子量主要分布在955.0~546.8 Da之间。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的工艺研究

试验研究了采用中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化性肽的最佳工艺。将螺旋藻破壁离心后,用中性蛋白酶水解,以·OH清除率、DPPH·清除率和总还原力为评价指标,在单因素试验基础上,进行了正交试验,确定了最佳酶解工艺条件。试验结果表明,中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:酶解温度为60℃、[E]/[S]为3%、p H为7.3,时间为4 h。此条件下螺旋藻中性蛋白酶的水解物的·OH的清除率是92.790%、DPPH·的清除率为18.941%,代表总还原力大小的吸光度为1.507。     

双酶法制备牡蛎抗氧化酶解液的工艺优化

以牡蛎肉为原料,用无花果蛋白酶和风味蛋白酶水解牡蛎肉制备抗氧化酶解液,以DPPH·清除率、氨基酸态氮含量和蛋白质回收率为指标进行单因素和正交试验,探究总酶量、pH、酶解时间和酶比对酶解效果的影响。得到双酶制备牡蛎抗氧化酶解液的最佳工艺条件为:总酶量12%,p H6.0,酶解时间3.0 h,无花果蛋白酶与风味蛋白酶的比例为5∶1(质量比);该酶解液具有较高抗氧化活性和蛋白质回收率,其氨基酸态氮含量为0.223 g/100 m L,DPPH·清除率可达89.42%、蛋白质回收率达到了79.81%。     

二步酶解法制备鱼鳞明胶抗氧化肽及其抗氧化活性研究

通过碱性蛋白酶进行第一步酶解,胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别进行第二步酶解制备鱼鳞明胶抗氧化肽。结果表明,二步酶解法能有效提高酶解物的水解度,降低水解物的分子量,碱性蛋白酶—胰蛋白酶水解物具有显著的自由基清除能力和Fe~(2+)螯合能力。通过响应面优化的胰蛋白酶最佳二步酶解工艺为:底物浓度100 mg/mL、pH 7.8、温度53℃、时间50min,该条件下制备的水解物的Fe~(2+)螯合率为65.72%,清除DPPH·、·OH和O_2~-·的IC_(50)值分别是7.39,0.68,1.84mg/mL。     

毛薯多糖超声提取工艺优化及抗氧化活性研究

以毛薯为原料，采用超声提取毛薯多糖。在单因素试验的基础上通过正交试验优化毛薯多糖超声提取工艺，并研究毛薯多糖的抗氧化活性。结果表明：最佳提取条件为液料比25∶1(mL/g)、提取温度72℃、超声功率300 W、超声时间32 min,在此条件下毛薯多糖得率平均为7.29%。在毛薯多糖质量浓度为2.5 mg/mL时，其对DPPH·、·OH、·O^-₂的清除率分别为75.4%、62.1%、53.5%,表明毛薯多糖具有较强的抗氧化活性。     

玉米蛋白水解物对Caco-2细胞的抗氧化作用研究

试验以挤压膨化蒸煮后的玉米蛋白粉为原料,经双酶(复合蛋白酶-碱性蛋白酶)顺次水解后,得到抗氧化活性良好的玉米蛋白水解物;模拟体外胃肠消化情况,分析其经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用后消化液的抗氧化活性变化。结果表明,经胃肠消化后,抗氧化活性明显增强,亚铁离子螯合能力提高81.52%,·DPPH自由基清除率提高12.63%;将玉米蛋白水解物直接作用Caco-2细胞,通过200μmol/L H_2O_2作用细胞4 h,研究作用后细胞内的ROS含量。试验结果表明, Caco-2细胞经玉米蛋白水解物作用150 min后,细胞内活性氧含量均降低,当玉米蛋白水解物蛋白浓度为5μg/mL时,细胞内ROS荧光值从32 235降低到11 168.5,明显清除了细胞内ROS含量。