不同分子质量鲍鱼外套膜酶解物抗氧化活性研究

研究鲍鱼外套膜酶解物(AMH)及其不同分子质量组分的抗氧化活性。采用中性蛋白酶水解鲍鱼外套膜制得AMH,通过超滤得到分子质量分别为小于1kDa和1～3,3～5,5～10kDa的4种酶解物组分;考察AMH和不同分子质量组分的体外抗氧化活性。结果表明:AMH清除DPPH自由基、OH自由基和亚铁离子螯合能力的IC50值分别为11.76,12.07,4.04mg/mL;经过超滤分离后,其抗氧化活性明显增强,且1～3kDa分子质量范围组分的清除DPPH自由基和OH自由基能力最强,3～5kDa分子质量范围组分的亚铁离子螯合能力最强。     

亚麻籽粕制备小分子抗氧化活性肽

目的:以亚麻籽粕为原料,提取蛋白并制备抗氧化活性肽。方法:利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶酶解蛋白,并通过测定总抗氧化能力(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)、羟自由基清除能力和2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除能力表征酶解产物的活性。使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和凝胶色谱法分析蛋白和酶解产物的分子质量(mw)分布。利用高效液相色谱-串联质谱联用技术分析鉴定最具有抗氧化活性组分。结果表明,对于高分子质量(3～10 kDa)和低分子质量(3 kDa)的蛋白多肽,低分子质量多肽(碱性蛋白酶)的抗氧化活性优于其他。10 mg/mL低分子质量多肽(碱性蛋白酶)的FRAP相当于(1.77±0.03)mmol/L的FeSO_4,羟自由基清除率为(57.13±1.47)%,清除ABTS阳离子自由基的能力(以Trolox当量浓度计算)为(1.19±0.03)mmol/L。通过凝胶色谱分离的最具抗氧化活性组分F2的蛋白质量占整体组分的20%,0.1 mg/mL组分F2的FRAP相当于0.29 mmol/L的FeSO_4,占整体组分活性的45.3%。亚麻籽粕蛋白氨基酸组成齐全,含人体所需的8种必需氨基酸,是一种优质的植物蛋白;蛋白酶解的特异性和肽段分子质量共同影响亚麻籽蛋白多肽的抗氧化活性;亚麻籽粕可以制备高抗氧化活性多肽。     

元宝枫籽多肽的制备及其抗氧化性的研究

通过单因素试验对胰蛋白酶水解条件进行筛选,并采用正交试验优化酶解条件,得到最终酶解条件为:底物浓度2%、酶解时间5 h、加酶量12000 U/g、pH 7.5,此时DPPH清除率为46.2%。再将多肽溶液进行超滤分离,得到不同分子质量的水解产物,收集产物并进行冷冻干燥,测定不同分子量肽的抗氧化活性。分子量3 kDa的抗氧化活性最高,达到70.4%。对活性最高的组分(3 kDa)进行稳定性的研究,最终得到元宝枫籽抗氧化肽在20～60℃、pH为7、NaCl为0.2%或0.5%、葡萄糖为1%～2%的条件下抗氧化肽较为稳定,DPPH清除率基本不变。     

硒在富硒灵芝中的分布

为深化富硒灵芝的基础研究,指导富硒灵芝的生产与应用,以不同含硒量的富硒灵芝子实体为试样,系统地研究了硒在富硒灵芝中的分布,结果表明:富硒灵芝子实体中81.71%～87.92%的硒是以有机硒形式存在,并主要与子实体中的蛋白结合(蛋白硒占总硒的56.0%～61.2%);水溶性蛋白和碱溶性蛋白是灵芝结合硒的主要蛋白,总结合硒量占蛋白硒的75.2%～79.2%。按照结合硒量的多少,硒在蛋白中的分布依次为:水溶性蛋白>碱溶性蛋白>醇溶性蛋白>盐溶性蛋白。此外,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离富硒灵芝子实体中的含硒蛋白组分,并采用氢化物原子荧光法(HGAFS)对蛋白或多肽条带按分子质量段切割进行硒含量测定,结果表明:在分辨出的13条蛋白条带中,分子质量在8.709～142.53kDa的蛋白或多肽均结合了不同程度的硒,但硒主要分布在分子质量不超过16kDa的蛋白或多肽中。     

海参多肽的抗氧化性能研究

利用海参自身的蛋白酶使其机体自溶,研究酶解液中不同分子量的海参多肽的抗氧化活性.采用超滤膜将海参酶解液分级分离,得到SPH I (＞10 kDa)、SPH II (5～10 kDa)、SPH III (3～5 kDa)、SPH IV (＜3 kDa) 4个分子量范围的海参多肽.采用化学发光体系,通过测定不同分子量海参多肽清除·OH/O2-·/H2O2的IC50,比较不同分子量海参多肽的抗氧化性,以VC做阳性对照.结果表明,4种组分对3种活性氧(ROS)的清除能力均强于VC,4种组分对3种活性氧的清除顺序分别是SPH IV＞ SPH III ＞ SPH II ＞ SPH I.说明海参多肽对3种活性氧均有良好的清除效果,并呈现量效关系.     

海地瓜多肽分离及抗氧化活性研究

本文检测评价海地瓜体壁干粉及多肽氨基酸组成,通过超滤膜分级过滤技术及层析色谱分离技术分级分离海地瓜酶解多肽,采用生化水平及细胞水平抗氧化活性分析方法研究海地瓜多肽抗氧化活性特征。研究显示,海地瓜体壁干粉及酶解多肽氨基酸含量丰富,检测的19种氨基酸总量分别占样品干重的63.06%及82.90%;其中,必需氨基酸含量分别为10.87%及15.60%。海地瓜酶解多肽小分子肽(3 kDa)含量最高,达到43.9%;其次是分子量为3 k~10 kDa的多肽,含量为36.8%;而10 kDa的多肽含量最低,仅为19.3%。三种海地瓜多肽中,小分子多肽(3 kDa)抗氧化活性最高,ABTS法及FRAP法检测的TEAC值分别为0.61±0.03 mmol Trolox/g及0.32±0.02 mmol Trolox/g。海地瓜多肽明显增强HepG-2及HEK293细胞抗H2O2氧化损伤能力,且小分子多肽(3 kDa)活性高于其他组分;G-25层析分离海地瓜小分子多肽(3 kDa),形成6个主要吸收峰,对其样品抗氧化分析结果显示第5峰多肽样品抗氧化活性最高。     

响应面法优化猴头菇蛋白抗氧化肽工艺及抗运动疲劳活性研究

以猴头菇蛋白为原料，通过酶解猴头菇蛋白制备抗氧化肽，并研究其抗运动疲劳活性。结果表明：在碱性蛋白酶的作用下，猴头菇蛋白抗氧化多肽的最佳工艺条件为以猴头菇蛋白粉底物添加量7.23 g为基准，酶解温度49.50℃、酶解时间3.90 h、酶添加量8 062.61 U/g、pH 8.0,得到的抗氧化肽对DPPH·清除率为90.61%。体外抗氧化和小鼠力竭游泳试验结果表明，猴头菇蛋白抗氧化多肽具有一定的抗氧化和抗运动疲劳的作用，其中以分子质量3 kDa以下组分的抗氧化活性和抗运动疲劳活性最好。     

膜分离蚕豆蛋白酶解产物的理化性质及生物活性北大核心CSCD

以新鲜蚕豆为原料,采用碱溶酸沉法提取蚕豆蛋白,采用4种不同蛋白酶对蚕豆蛋白进行单酶或双酶酶解,通过比较蚕豆蛋白水解度和多肽得率筛选出最优的两种酶复合酶解蚕豆蛋白,将复合酶解液通过膜分离技术分离得到BBPHs-Ⅰ(<1 kDa)、BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa)、BBPHs-Ⅲ(3~5 kDa)、BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa)、BBPHs-Ⅴ(>10 kDa)5个不同分子质量的组分,对5个组分的氨基酸组成、紫外光谱、红外光谱进行分析,同时通过测定体外抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶抑制率表征其活性。结果表明:选用菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶对蚕豆蛋白进行复合酶解;与膜分离前比较,膜分离后10 kDa以下的蚕豆蛋白酶解产物总氨基酸含量增加,BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ的疏水氨基酸含量较高,此外BBPHs-Ⅲ的总氨基酸、必需氨基酸、疏水氨基酸、芳香氨基酸含量均为最高,分别为65.304%、19.222%、20.762%、8.769%。不同分子质量的蚕豆蛋白酶解产物表现出一定体外抗氧化能力,当质量浓度为10 mg/mL时,BBPHs-Ⅳ的ABTS自由基清除率可达(27.89±0.01)%,BBPHs-Ⅱ的DPPH自由基清除率可高达(57.70±0.00)%;当质量浓度在2~32 mg/mL范围内,不同分子质量蚕豆蛋白酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制活性呈剂量依赖关系,BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ表现出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,质量浓度为32 mg/mL时BBPHs-Ⅲ的α-葡萄糖苷酶活性抑制率最佳,达到(86.56±1.23)%。因此,通过膜分离技术得到的小分子质量的蚕豆蛋白酶解产物具有更好的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有良好的开发及应用前景。     

桃仁多肽的酶法制备及其抗氧化活性分析

以桃仁蛋白为原料,对响应面法优化多肽制备条件和酶解多肽各组分的抗氧化活性进行了研究。结果表明:以底物浓度3.5%、pH 10.4、加酶量4 200 U/g、酶解时间4.9 h条件下进行碱性蛋白酶酶解,可获得桃仁蛋白的最高水解度(61.12±0.7)%和多肽得率(67.91±0.5)%。桃仁蛋白及其酶解物的SDS-PAGE凝胶电泳图表明,酶解后的多肽分子质量大部分小于12 000 u。酶解液(PPH)及其超滤分离所得4组分分别采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、亚硝酸根离子清除能力和总抗氧化能力4个体外抗氧化活性测试,结果显示不同分子质量组分间的抗氧化活性存在显著性差异(P0.05),分子质量越小,其抗氧活性越强。RP-HPLC分析表明,抗氧化活性最强的P-IV组主要由9种具有一定疏水性的多肽组成。     

富硒大豆肽的制备及体内吸收性分析

为提高硒的体内吸收速率,本实验对富硒大豆蛋白和富硒大豆肽在大鼠低硒模型的体内吸收规律进行探究。采用碱溶-酸沉法从富硒大豆中提取富硒大豆蛋白,对其酶解、超滤,制备富硒大豆肽,对所提取富硒大豆蛋白及制备的富硒大豆肽的组成、硒的分布及结合形式进行探究,分别用富硒大豆蛋白、富硒大豆肽（以硒含量18 μg/kg mb,分子质量低于3 kDa）灌胃SD雄性大鼠,于灌胃0、5、10、20、30、40、60、80、90、120 min后尾部取血,同时测定血浆硒质量浓度与氨基酸浓度,分析血硒质量浓度与血浆氨基酸浓度随时间的变化规律。结果表明：富硒大豆蛋白的主要富硒亚基分子质量为26～35 kDa,11S富硒大豆蛋白硒含量显著高于7S富硒大豆蛋白（P＜0.05）;超滤纯化得到的3 kDa以下大豆肽组分的硒含量高达110.40 μg/g,显著高于10 kDa以上与3～10 kDa组分（P＜0.05）,3 kDa以下大豆肽组分蛋氨酸含量（189.32 μmol/g）与胱氨酸含量（47.09 μmol/g）也显著高于其他组分（P＜0.05）;灌胃富硒肽与蛋白后大鼠血浆硒质量浓度和总游离氨基酸浓度均出现两个峰值,经灌胃富硒大豆蛋白后,大鼠血硒质量浓度达峰时间分别为20 min和80 min,最高血硒质量浓度可达1.070 mg/L,血浆总游离氨基酸浓度达峰时间分别为10 min和80 min,最高值可达4.172 μmol/L;而灌胃富硒大豆肽后大鼠血硒质量浓度达峰时间分别为10 min和40 min,最高血硒质量浓度可达1.338 mg/L,总游离氨基酸浓度达峰时间分别为5 min和40 min,最高值可达5.053 μmol/L,达峰时间均早于富硒大豆蛋白。研究表明富硒大豆蛋白经酶解,超滤得到富硒大豆肽可显著提高硒的体内吸收速率,具有作为口服营养功能食品开发的潜力。     

红松仁多肽酶解制备工艺优化及降压降脂活性分析

为了对红松仁多肽的开发及应用提供参考，以红松仁粕为原料，采用酸浸提法提取红松仁蛋白，然后采用酶解法制备红松仁多肽。以水解度为评价指标，通过单因素实验和响应面实验对红松仁多肽酶解制备工艺条件进行了优化。同时，对最佳工艺条件下制备的多肽的分子质量分布和氨基酸组成进行分析，并测定了多肽的降压降脂活性。结果表明：红松仁多肽的最佳酶解制备工艺条件为采用分步酶解法，在酶解温度50℃、底物质量浓度6.0 g/100 mL、木瓜蛋白酶添加量10 500 U/g、酶解pH 6.0条件下酶解2.5 h,然后在碱性蛋白酶添加量10 970 U/g、酶解pH 9.0条件下酶解2.3 h,在此工艺条件下红松仁蛋白的水解度达25.94%;红松仁多肽的数均分子质量为2 272 Da,重均分子质量为4 080 Da;红松仁多肽中谷氨酸、精氨酸和天冬氨酸含量较高，必需氨基酸含量占氨基酸总量的30.23%;红松仁多肽中分子质量小于10 kDa的多肽占92%,分子质量0.5～1.0 kDa的多肽具有最高的ACE抑制活性，IC₅₀为66.05μg/mL;分子质量1.0～5.0 kDa的多肽具有最高的胰脂...     

菌酶联合制备猪血抗氧化低聚肽

以猪血为原料,依次采用枯草芽孢杆菌发酵和碱性蛋白酶水解制备猪血抗氧化低聚肽,通过响应面试验优化发酵工艺和酶解工艺,最佳发酵参数为:底物浓度59.0 g/L、发酵时间56.5 h、接种量3.22∶100(体积比),此时多肽含量为2.31 mg/mL,·OH清除率为78.94%;最佳酶解参数为:酶解时间3.0 h、pH 9.5、酶解温度60℃、酶底比390 U/g,此条件下制备得到酶解液的多肽含量5.48 mg/mL,多肽含量较单一发酵提高2.39倍,·OH清除率为93.62%。采用超滤分离法,获得分子量分别为0~1 kDa、1 k Da~5 kDa和0~5 kDa的猪血抗氧化低聚肽,采用7种体外抗氧化指标(·OH清除率、·O~(2-)清除率,抑制脂质过氧化能力、还原力、ABTS~+·清除率、DPPH·清除率、总抗氧化力)评价3种不同分子量段的猪血低聚肽的抗氧化活性,结果表明:3种不同分子量段抗氧化肽活性大小为0~1 kDa0~5 kDa1 kDa~5 kDa,提示高抗氧化活性的猪血低聚肽的分子量集中在1 kDa以下。     

华贵栉孔扇贝富硒蛋白粉的酶法制备工艺优化及其营养评价

通过酶解法利用华贵栉孔扇贝制备富硒蛋白粉,并对其进行营养评价。以水解度和硒溶出率为指标,筛选蛋白酶后,应用响应面优化得到最佳酶解工艺,制备富硒蛋白粉,从分子质量分布、肽质谱、氨基酸组成及矿物质组成对其进行营养评价。以中性蛋白酶进行工艺优化,最佳酶解工艺为：酶解温度53℃、料液比1∶3.8、加酶量4 885 U/g;肽质谱结果显示0～1 200 m/z的肽种类随酶解时间延长而显著增多,酶解6 h,水解度达46.95%,硒溶出率达97.02%,分子质量低于3 kDa组分占酶解产物的67%。所制备的富硒蛋白粉蛋白质含量达82.58%,必需氨基酸含量占总氨基酸量的37.57%,必需氨基酸指数为122.01%,第一限制氨基酸为缬氨酸,硒含量为1.80μg/g远高于食品富硒标准(0.15μg/g),必需微量元素Mn、Cu、Zn等含量较高。华贵栉孔扇贝富硒蛋白粉富含易于人体吸收的小分子肽,矿物质含量丰富,特别是硒含量高,可用于富硒食品或保健品的开发。     

小米多肽酶解工艺及其抗氧化和ACE抑制活性

以小米蛋白为原料，制备具有抗氧化活性和血管紧张素转移酶(ACE)抑制活性的食源性多肽。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶酶解小米蛋白，选取最优酶解工艺。选用碱性蛋白酶酶解4 h，得到的蛋白水解液分别通过3 ku和10 ku的超滤膜，得到分子质量＜3，3~10 ku和＞10 ku的3种组分，测定其抗氧化活性和ACE抑制活性。结果表明:采用碱性蛋白酶酶解4 h得到的蛋白水解液经超滤后得到分子质量＜3 ku的多肽具有最高的抗氧化活性和ACE抑制活性，其DPPH清除能力为38.44%，ABTS自由基清除能力为81.62%，羟基自由基清除能力为68.49%，ACE抑制活性为87.53%。此方法得到的多肽分子质量小，功能氨基酸含量较高，具有良好的抗氧化活性和ACE抑制活性。本研究结果为抗氧化肽和ACE抑制肽的开发提供试验依据，对未来工业化的发展提供理论参考。     

双阳梅花鹿鹿鲜胎多肽的制备及抗氧化活性研究

以双阳梅花鹿鹿鲜胎为原料,通过单因素实验和响应面法优化鹿鲜胎多肽酶解工艺;采用超滤法和凝胶过滤层析法对鹿鲜胎多肽进行分离纯化,同时对鹿鲜胎多肽抗氧化能力进行研究。结果表明:鹿鲜胎多肽最佳酶解工艺为:酶解时间5 h,酶解温度54.5 ℃,pH7.0,加酶量5100 U/g,水解度为34.97%;从鹿鲜胎多肽中分离纯化出3组分子量10 kDa以下的多肽组分:DFP1、DFP2、DFP3;抗氧化研究结果表明DFP1自由基清除能力最强,·OH自由基和O₂-自由基最高清除率分别为81.47%、79.43%。综上,通过响应面法优化的鹿鲜胎多肽酶解工艺方便可行,制备得到的多肽具有较强抗氧化活性,为双阳梅花鹿资源的充分开发利用提供理论基础。     

富硒糙米抗氧化肽酶法制备工艺优化

以富硒糙米蛋白为原料,优化富硒糙米蛋白抗氧化肽酶法制备工艺。以酶解产物抗氧化能力指数(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)和水解度为评价指标,考察酶种类、酶解时间、pH值、底物浓度、加酶量及酶解温度对酶解产物抗氧化活性的影响。在单因素试验基础上,采用三因素三水平响应面法确定富硒糙米抗氧化肽的制备工艺。结果表明:中性蛋白酶较适宜制备富硒糙米抗氧化肽,其最佳酶解工艺条件为:pH 8.0,底物浓度3%,酶解时间69 min,酶解温度55℃,加酶量12 000 U/g。在此条件下,富硒糙米蛋白酶解产物的抗氧化能力为(1 232.57±62.34)μmol TE/g,显著高于同等条件下非富硒糙米蛋白酶解物的抗氧化能力。     

酶法制备鲟鱼皮胶原蛋白多肽及其抗氧化活性研究

该研究以鲟鱼皮为原料利用碱性蛋白酶水解制备胶原蛋白肽,进行了鲟鱼皮基本成分分析,酶解条件优化和酶解产物抗氧化活性研究。结果表明,最佳酶解条件为pH 9,温度55℃,添加酶质量分数3%,酶解时间5 h时水解度为22. 0%。酶解液经超滤分离得到4种不同分子质量范围的胶原蛋白肽组分SSCP-I(分子质量>10 000 Da)、SSCP-II(分子质量=5 000～10 000 Da)、SSCP-Ⅲ(分子质量=1 000～5 000 Da)和SSCP-IV(分子质量<1 000 Da)。其中(分子质量=1 000～5 000 Da) SSCP-Ⅲ对超氧阴离子自由基的清除能力最高,其半抑制清除浓度IC50为5. 938 g/L。该研究为鲟鱼皮的综合加工和高值化利用提供了理论指导。     

紫花芸豆清蛋白水解物及其膜分离产物抗氧化活性研究

应用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解紫花芸豆清蛋白,并通过膜分离技术将水解物分离成4种不同分子质量大小的多肽组分(1 kDa、1～3 kDa、3～5 kDa和5 kDa);评价水解物和其膜分离组分的抗氧化活性(DPPH自由基清除率、还原力、羟自由基抑制率、亚铁离子螯合能力和ABTS自由基清除率)。结果表明,碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶均能显著提高紫花芸豆清蛋白的抗氧化活性。其中ABTS自由基清除率、羟自由基和亚铁离子螯合能力提高较大,但是碱性蛋白酶降低了芸豆清蛋白的还原力。经过超滤膜分离后,不同分子量大小的各组分均具有一定的抗氧化活性,但是各组分的抗氧化能力不同, 1 kDa以下组分具有更佳的抗氧化活性,可进一步分离并鉴定获得单一抗氧化肽段,从而用于功能食品和保健品的开发。     

核桃多肽结构表征及抗氧化活性

以核桃粕为原料,复合酶酶解制备核桃多肽,并通过超滤分离获得不同分子质量的核桃多肽,进行结构表征和实验分析,探究核桃多肽的抗氧化活性及其对氧化损伤HepG2细胞的保护作用。结果表明,分子质量<1 kDa核桃蛋白水解产物抗氧化活性最强,其羟自由基清除能力的半抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC₅₀)值为11.47 mg/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力的IC₅₀值为35.67μg/mL、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力的IC₅₀值为49.72μg/m L。同时,<1 kDa核桃多肽组分能够减少Hep G2细胞内活性氧含量,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。核桃多肽在225 nm波长处有最大吸收峰。核桃多肽形状不规则、表面光滑、结构致密,有大量粗糙纹路和孔隙。核桃多肽的二级结构中无规卷曲(36.5%)和β-折叠(36.6%)相对含量最高。综上,<1 kDa核桃多肽对...     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。