灵芝菌在茶培养基中驯化的实验研究

研究了灵芝菌经过低档绿茶萘汁、茶粉多次驯化后，平板培养时菌丝增殖速率和摇瓶发酵时菌体生物量与胞外粗多糖（EPS）的变化情况。实验结果表明，驯化种在茶汁平板和普通平板上，菌丝平均增殖速率分别提高了30．7％、8．0％；驯化种在茶培养基中发酵时，最大菌体生物量和胞外粗多糖产量分别提高了119．87％、69．39％。显然，驯化种发生了部分遗传特性良性改变。     

富锗茶灵芝培养及其有效成分分析

以废弃茶枝茶叶等栽培灵芝,研究茶栽灵芝的富锗特性,并测定其多糖、三萜和黄酮含量。结果显示灵芝对锗的富集与培养基中无机锗浓度显正相关,高浓度锗会抑制灵芝生长,最适培养基Ge O2浓度在100 mg/Kg~200 mg/Kg;富锗茶灵芝的多糖和黄酮含量分别为5.56%和5.01%,明显高于椴木灵芝和普通袋栽灵芝。     

灵芝菌在绿茶发酵中的应用

对灵芝菌在绿茶培养基与无茶培养基中摇瓶发酵时菌体生长和胞外多糖合成进行了对比研究,实验结果表明,灵芝菌生物量降低了17.08%,胞外粗多糖产量增加了42.5%。同时对灵芝菌在改善低档绿茶品质中的应用也进行了探索,低档绿茶经过灵芝菌摇瓶发酵后,茶汤主要呈味成分含量发生变化,茶多酚降解了64.8%,游离氨基酸总量增加了9.7%,酚氨比降低了67.8%,水溶性灵芝胞外多糖增加,茶汤品质得到很大改善。     

不同碳源对阿魏菇菌丝生长量及多糖产量的影响

阿魏菇是一种极具发展前景的食药两用大型真菌,实验用液体摇床培养法与平板培养法培养阿魏菇,对其在不同碳源培养基中的胞外多糖产量及菌丝生长情况进行了研究。结果表明,蔗糖为阿魏菇生长利用的最佳碳源,液体培养基中菌球长势好,胞外多糖产量高,平板培养菌丝生长速度快。葡萄糖作碳源培养前期胞外多糖量增加快,但胞外多糖产量和菌丝量不如蔗糖作碳源时高。以麦芽糖作碳源液体培养菌球生长不完整。阿魏菇对乳糖利用情况最差,胞外多糖产量及菌丝量均为最低。     

以稻杆粉为基质获得灵芝高附加值产品的工艺优化

采用单因素试验研究了添加稻秆粉对灵芝生长、纤维素酶活性、多糖合成的影响,并用旋转中心组合设计对稻秆粉和葡萄糖的浓度进行了优化,同时比较了两种培养基中灵芝产品的比生成速率。结果表明:稻秆粉可以作为灵芝生长、纤维素酶和多糖合成的培养基质,添加量为2%～8.0%;经过响应面法分析后葡萄糖、稻秆粉最佳浓度分别为3.26%、5.771%。此条件下灵芝的最大生长量为(13.12±1)g/L,胞内多糖产量为(329±10)mg/g,胞外多糖产量为(383±9)mg/L,纤维素酶活性为(14.4±0.8)U/mL,分别比优化前提高16.1%、(22.3±0.1)%、(35.3±0.5)%、(38.9±2)%。同时灵芝的比生长速率0.031 h-1,胞外和胞内多糖的比生成速率分别为0.011 h-1、8.2×10-4 h-1,分别比豆饼粉培养基中的低44.6%、42.1%、18%,而纤维素酶的比生成速率(0.062 h-1)比豆饼粉培养基中(0.043 h-1)的提高44.1%。尽管灵芝比生长速率及多糖比生成速率比豆饼粉的低,但从经济成本来看和资源利用来看,用稻秆粉为灵芝液体发酵基质生产多糖等高附加值产品是可行的。     

灵芝液体发酵产胞内多糖的培养基优化

以菌丝生物量及菌丝胞内多糖为指标,用液体发酵方法培养灵芝菌丝并获得菌丝胞内多糖,通过单因素及正交试验,研究了碳源、氮源、微量元素对灵芝菌丝生长及多糖产量的影响。结果表明:灵芝液体发酵生产菌丝多糖最适合培养基组合为:麦芽糖2.0%、酵母提取粉2.0%、ZnSO40.015%、VB10.10%、KH2PO40.2%、MgSO40.05%、pH 6.0,菌丝多糖产量高达6.64%。     

不同金属离子对灵芝多糖液态发酵的影响

研究不同金属离子对灵芝多糖含量的影响,发现K+、Mg2+和Fe2+可以促进灵芝多糖液态发酵,其中含Fe2+发酵培养基所产生物量和多糖最多,分别为7.299 g/L和0.720 g/L。在种子液培养基基础上加入0.2%Fe2+更有利于灵芝多糖产量的提高;在整个发酵罐扩大培养过程中,胞外粗多糖含量均是先上升后下降,在1 d～3 d时,胞外粗多糖含量呈轻微上升趋势,变化幅度较小。4 d～6 d时,胞外粗多糖含量有明显的上升趋势,而pH变化幅度较小,利于灵芝菌体产生多糖。在6 d时达到最大值。在同等条件下进行的发酵罐扩大培养摇比摇瓶发酵培养所得含量略高。说明发酵罐培养比摇瓶培养更利于生产灵芝多糖。     

前体对桑黄菌丝生长和多糖合成的影响

考察不同类型前体对桑黄菌丝生长和胞外多糖合成的影响,在全合成培养基中添加乳糖前体有利于桑黄菌丝的生长和胞外多糖的合成。采用正交试验优化获得乳糖补加条件：发酵初始补加30g/L 乳糖,3L 发酵罐发酵168h 验证实验获得的桑黄菌丝量最高可达13.18g/L,胞外多糖产量最高可达1.21g/L,比对照组提高了25%。而植物油类前体筛选发现菜籽油能明显促进桑黄菌丝的生长,7L 发酵罐中发酵144h 桑黄菌丝量最高可达23.77g/L,比对照组提高了207.1%,但抑制胞外多糖的合成。     

α-PGM过表达对灵芝多糖发酵的影响

为了探究灵芝多糖合成途径中磷酸葡萄糖变位酶(α-PGM)的过表达对灵芝多糖发酵产生的影响,利用农杆菌介导法将同源性基因pgm转化灵芝原生质体,筛选灵芝转化子,测定灵芝胞外多糖产量及胞内多糖含量,并研究多糖合成过程中相关酶基因转录水平的相对表达量和酶的活性。结果发现在PGM过表达的重组型灵芝菌株中胞内多糖含量和胞外多糖量最高分别为21.02 mg/100 mg菌体和0.71 g/L,分别比野生型菌株高9.1%和39.2%;灵芝多糖生物合成途径中pgm、pgi基因转录水平表达量较野生型灵芝菌株处于上调状态,且多糖合成代谢中相关酶活性有显著提高。     

液体发酵条件对灵芝菌体形态及胞外多糖活性的影响

作者主要研究灵芝在液体发酵过程中,发酵时间、初始p H值、培养温度等发酵条件对灵芝菌体形态、胞外多糖产量及多糖抗肿瘤活性的影响,其目的在于通过调控发酵条件获得高活性、高产量的灵芝多糖。依据灵芝菌球直径的大小,所有菌球被分为小型、中型和大型菌球,结果表明,发酵过程中菌体形态以中型菌球为主,在中小型菌球比例较高时有利于胞外多糖的合成,并且小型菌球比例大于大型菌球时,发酵液中多糖含量较高;在比较不同发酵条件下获得的胞外多糖对肿瘤细胞抑制作用时发现,p H 4.0和30℃条件下获得的多糖对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6和人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有更高的抑制作用。     

薏苡仁油和薏苡仁酯促进灵芝深层发酵的研究

为探讨薏苡仁成分对灵芝深层发酵的影响,在灵芝深层发酵培养基中分别添加适量的薏苡仁油和薏苡仁酯,研究它们对菌体生长及活性成分生物合成的促进作用。结果表明：在培养基中添加2%薏苡仁油,菌体生物量、灵芝胞外多糖、胞内多糖、灵芝酸最高分别可达对照的3.58、2.44、2.24、4.04倍;添加0.5%的薏苡仁酯,菌体生物量和胞内多糖分别可达对照的1.17倍和1.6倍;添加0.05%的薏苡仁酯,胞外多糖可达对照的2.4倍;添加0.2%的薏苡仁酯,灵芝酸可达对照的16.42倍。薏苡仁油和薏苡仁酯能够促进灵芝菌体生长、灵芝多糖及灵芝酸的生产。     

灵芝菌丝液体深层发酵培养基的研究

利用液体深层发酵方法进行灵芝菌丝发酵最佳培养基的确定。通过单因素实验研究了可溶性淀粉、葡萄糖、蛋白胨、麸皮、MgSO4·7H2O、KH2PO4对液体深层发酵灵芝菌丝生长的影响,并通过单因素试验和正交试验确定了灵芝液体深层发酵的最适培养基配比为可溶性淀粉1%,葡萄糖2.5%,蛋白胨0.1%,麸皮0.5%,MgSO4·7H2O0.015%,KH2PO40.1%。发酵6d干菌体得率为19.91g/L。     

复方鹿角灵芝茶的制备及其免疫调节功能研究

为了探讨鹿角灵芝、富硒茶和紫苏提取物制成复方粉剂的免疫调节作用,分别提取其有效成分,采用单因素和正交试验优化复方鹿角灵芝茶颗粒的制备工艺;选用正常BALB/c小鼠为研究对象,测定复方鹿角灵芝茶对小鼠细胞、体液免疫调节功能以及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明:复方鹿角灵芝茶颗粒最佳配方为主药为鹿角灵芝粗多糖0.38 g,富硒粗茶多酚1.24 g和紫苏粗多酚33 mg,主药:甘露醇为1:3,乙醇浓度为85%,聚维酮K30含量为4%。复方颗粒的大小均匀,色泽一致,符合2015版《中华人民共和国药典》的各项指标;复方鹿角灵芝茶能够提高小鼠细胞因子IL-10、IL-2和IFN-γ的分泌量及体液免疫功能,增强巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力,为复方鹿角灵芝茶的制备及工业化生产提供理论依据。     

昆嵛山野生灵芝发酵条件的研究

灵芝自古是我国的著名药用真菌,其含有多种生理调节因子。本研究通过单因素和正交试验,优化液体深层培养的营养搭配与环境条件,研究其对昆嵛山灵芝菌丝体生物量的综合影响。结果表明,适宜的培养基配方为:可溶性淀粉5.00%、牛肉膏2.00%、KH2PO40.10%、MgSO40.01%;适宜的环境条件为:初始pH5.5,发酵周期6d,搅拌转速150r/min,装液量30%。     

以米糠、麸皮为基质的灵芝液态发酵动力学模型研究

以米糠、麸皮作为发酵基质研究灵芝Ganoderma lucidum JSU LIUYU18液态发酵过程中菌体生物量变化,为其工业化生产提供理论指导。利用均匀试验设计和SPSS回归分析构建菌丝干重关于培养基成分米糠、麸皮、磷酸二氢钾、七水硫酸镁及发酵时间的经验动力学模型,并以此模型推导得到以Logistic方程为原型的菌体生长理论动力学模型,比较灵芝Ganoderma lucidum JSU LIUYU18液态发酵菌体生长经验和理论动力学模型与实测值的差异。结果表明,两模型与实测值组间无显著差异(Fcrit,P>0.05),即两模型均能较好地反映灵芝Ganoderma lucidum JSU LIUYU18在米糠、麸皮液态培养基中的菌体生长状况。     

灵芝茶的研制及其保健功能的研究

以灵芝、茶、枸杞为主要原料研制了一种适合中老年人群的保健饮品。在正交试验的基础上,以多糖含量和感官评价为考察指标确定了灵芝茶的最佳配方为:灵芝30.8%、枸杞23.1%、绿茶46.1%,最佳生产工艺条件为:温度90℃,提取4h。研究了灵芝茶在体外清除羟基自由基和超氧自由基的能力,结果表明灵芝茶具有较好的清除自由基的活性。     

灵芝多糖液体发酵条件的优化和pH控制策略的研究

以韩国灵芝为发酵菌种,以灵芝多糖、菌丝干重为指标,研究了非营养因子对灵芝发酵的影响。通过单因素实验确立了摇瓶培养灵芝的最佳pH为6.0、装液量100mL/250mL、接种量10%和培养时间5d。在10L发酵罐中,恒定pH为4.19比恒定pH为5.0和分段控制pH为5.0和4.19灵芝多糖产量更高,达1.64g/L,菌丝干重为7.13g/L。     

灵芝在牛蒡固体培养基中发酵工艺优化及菌丝多糖的体外抗氧化活性

为提升牛蒡废弃物的利用价值,以低品质牛蒡作为营养基质,精选优良灵芝菌种作为发酵菌株,研究牛蒡固体发酵灵芝产多糖工艺及其体外抗氧化活性。采用单因素试验和响应面优化法确定了装瓶量、粉碎程度、液固比等工艺条件;利用水提醇沉法提取牛蒡固体发酵灵芝菌丝中多糖,并用苯酚-硫酸法测定其总多糖含量;多糖经脱蛋白、透析和脱色后,经红外光谱分析多糖特征,高效液相色谱测定其单糖组成;体外实验检测多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力。结果表明：最佳发酵条件为液固比0.4 mL/g 、装瓶量0.2 g/mL、粉碎程度过6 目筛,在此条件下实际获得的多糖含量为24.85 mg/g;红外光谱分析表明所获得的菌丝多糖具有糖类物质的特征吸收峰;高效液相色谱检测其单糖组成为甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖等,其中甘露糖含量最高,是葡萄糖的7.6 倍;抗氧化性检测表明随着牛蒡固体发酵灵芝菌丝多糖质量浓度的增加,其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基清除能力逐渐增强,且清除率均大于70%,说明多糖具有较好的体外抗氧化活性。