蜂毒溶血肽(Melittin) cDNA的克隆及序列分析

为了克隆得到正确序列的蜂毒溶血肽cDNA，对蜂毒中的蜂毒溶血肽进行了研究。实验从蜜蜂毒腺中提取总RNA，通过RT－PCR方法扩增到了蜂毒溶血肽的cDNA，扩增产物克隆到pT7Blu-T载体，转化大肠杆菌JM109，DNA序列分析结果表明克隆得到的蜂毒溶血肽cDNA脱氧核糖核苷酸序列正确。     

嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因的克隆与序列分析

将GenBank中已报道的罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶基因对已公布的嗜酸乳杆菌NCFM基因组全序列做tblast,找到一个同源编码框.参照此编码框的核苷酸序列及pQE30质粒图谱特性设计上、下游引物,利用PCR法扩增嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因,并克隆到pQE30质粒载体上进行测序.分析测序结果表明,扩增得到的目的DNA全长1 776 bp,G C含量为37.5%,共编码591个氨基酸,理论相对分子质量67.5kDa.用Signal P3.0对其N端前70个氨基酸序列进行分析,结果表明,第20~40位氨基酸有较强的疏水性.不过,N端前70个氨基酸的C值、S值和Y值并不高,最有可能的酶切位点位于第45位与第46位氨基酸之间,但预测其被切割的可能性概率低于1%.可以推断,在嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶的N端氨基酸序列中不存在信号肽序列.     

康宁木霉cbh2基因cDNA的克隆及序列分析

采用植物叶总RNA提取试剂盒提取康宁木霉总RNA,利用依据木霉cbh2基因序列设计合成的一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增得到了康宁木霉cbh2基因cDNA,并成功转入大肠杆菌.序列测定结果表明该基因序列与已公布的木霉cbh2基因的同源性最高可达91.93%.     

家蚕znfhit基因的克隆表达及序列分析

在对家蚕蛹 cDNA文库的测序中发现了znfhit(zinc finger HIT)的 EST序列(GenBank登录号 DY230769).经过比对发现znfhit全长为1019bp,由297bp的 5'端非编码区序列(5'UTR)、462bp的开放读码框(ORF)和260bp的3'端非编码区序列(3'UTR)组成.将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,此基因由3个外显子和2个内含子组成.ZNFHIT蛋白的疏水性最大值为1.533,最小值为-3.267,且不含跨膜区域.用PCR方法扩增获得znfhit基因,将其克隆至质粒pET-28a上,构建重组质粒pET-znfhit,并在大肠杆菌中大量表达,经镍离子亲和层析纯化得到重组蛋白,质谱鉴定其分子量为21.11KD,为后续研究其功能提供了条件.     

石柱参人参皂苷合成酶基因SS的克隆与序列分析

以石柱参近缘种野生山参的人参皂苷合成酶基因SS为模板,利用NCBI中的primer-BLAST设计特异性引物,应用PCR技术从石柱参叶片基因组DNA克隆了SS基因。序列分析显示,克隆的基因片段为1 285 bp,能够编码25个氨基酸以上的ORF (Open Reading Frame)有10个,其中最长能够编码295个氨基酸。NCBI序列对比显示,该基因与人参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为97. 05%,与西洋参的人参皂苷合成酶基因SS的同源性为96. 63%。这些数据表明,从石柱参克隆的基因为其人参皂苷合成酶基因SS。     

脑膜炎奈瑟氏菌NspA基因的克隆及序列分析

为了获得脑膜炎奈瑟氏菌(Nesseria meningitidis,Nm)表面蛋白A(NspA)基因,从脑膜炎患者的血液中分离出脑膜炎奈瑟氏菌并对其进行鉴定.然后根据NspA基因的核苷酸序列,设计合成一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)技术体外扩增得到NspA基因.进行克隆、测序及序列分析.结果显示,其核苷酸序列同源性与Genbank报道的标准菌株相比同源性为100%.克隆获得的基因保持了脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NspA基因的完整性,保留了其抗原性,为以后进一步开发脑膜炎基因工程疫苗奠定了实验基础.     

盐生卤虫BADH基因的克隆及序列分析

实验以盐生动物卤虫（Artemia）为材料,采用酚-氯仿法提取总DNA,以已报道的BADH基因的保守序列设计引物,通过PCR技术,从卤虫的基因组DNA中分离得到了1个BADH基因片段,经测序,得到一段868 bp的核苷酸序列,输入Gen-Bank进行BLAST同源性比较,发现所得片段与植物中的籽粒苋的BADH4基因中的一段序列有96%的同源性,此项研究为更深入地研究抗盐动物的BADH基因奠定了良好的基础.     

新城疫病毒融合蛋白的克隆和序列分析

根据NDV-La Sota-F(新城疫病毒La Sota株融合蛋白基因)亚家族氨基酸序列相似性,设计一对NDV=F特异引物,通过RT-PCR方法扩增得到全长1758bp的融合蛋白序列.利用生物信息学软件对此序列进行了开放阅读框分析、同源性分析、氨基酸组成分析、二级、三级结构预测.结果表明,该克隆片段为NDV融合蛋白.     

Klebsiella pneumoniae甘油脱水酶α亚基基因的克隆与序列分析

甘油脱水酶是1，3-丙二醇发酵过程中的重要限速酶，具有很好的工业应用前景．其中α亚基为甘油脱水酶的主要组成部分，该基因的正确克隆与分析对甘油脱水酶的正确表达起重要作用．作者采用PCR技术，从肺炎克雷伯氏杆菌A．S．1．1736基因组中扩增得到了编码甘油脱水酶α亚基的gldA基因，并将其克隆至pMD18-T载体中．经核苷酸序列分析证实，gldA基因开放阅读框架由1668bp组成．经GenBank检索对照分析，gld基因序列与国外文献报道的同源性达99．34％，表明所克隆的gldA基因即为克雷伯氏甘油脱水酶α亚基基因．     

一种新型琼胶酶AgaB的基因克隆及生物信息学分析

利用从青岛近海发现的一株高产琼胶酶的假别单胞菌CY24(Pseudoaltero-monassp.CY24)建立基因组DNA文库后,用水解圈的方法从中筛选到一个具有琼胶酶活性的阳性克隆pBA1。pBA1的序列分析结果表明,插入DNA片段的长度为6.7 kb,含有4个推测读码框架,并利用亚克隆法确定了琼胶酶的编码基因agaB。agaB基因的开放阅读框架为1 437 bp,编码478个氨基酸,理论分子量为50.9 kDa,在N末端有一个包含38个氨基酸的信号肽。推测的成熟蛋白质的分子量和等电点分别为47.2 kDa和4.83。AgaB的氨基酸序列与已知蛋白质包括所有的糖苷水解酶序列完全没有相似性;HCA的蛋白质二级结构分析结果表明,AgaB不同于其他已知琼胶酶。因此,推测AgaB为一新型的琼胶酶,代表一个新的糖苷水解酶家族。     

河北紫花苜蓿挥发油成分的GC-MS分析

采用水蒸气蒸馏法提取河北产9月份收割的紫花苜蓿干燥全草中的挥发油成分,并通过气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）对其进行分析。利用GC-MS分离出152种成分,并鉴定了其中43种化合物,占挥发性物质的73.3%（质量分数,下同）,其中最多的是酸类化合物,占40.17%。该紫花苜蓿挥发油主要成分是十六烷酸（32.1%）、六氢金合欢基丙酮（8.83%）、植物醇（4.51%）,还有5,6,7,7-α-四氢-4,4,7-α-三甲基-2-（4 H）苯基呋喃（3.21%）、邻苯二甲酸二异丁基酯（2.94%）。通过与其他产地、不同收割期、不同处理方式的苜蓿挥发油成分进行比较,发现产地、收割期、处理方式不同的紫花苜蓿中挥发油成分差别显著,为进一步研究和利用苜蓿资源等提供借鉴作用。     

两种鱼类Hoxa-11基因片段克隆及5''端序列分析

为了分析脊椎动物从鳍到肢转变过程中基因的系统进化，采用PCR法克隆了斑马鱼和矛尾鱼的Hoxa-11基因片段，测序并进行序列分析。结果显示同源异型盒所在的外显子Ⅱ区和剪接位点是高度保守的，外显子I区又可分为四个亚区；中度保守区、可变区和两个高度保守区。从鱼到四足动物，Hoxa-11基因的主要变化是可变区的长度梯增且出现富含丙氨酸的区域。此外，在内含子中也发现了两个高度保守的DNA序列，其长度分别为35bp和16bp。     

假单胞菌ZL13邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的克隆表达

寻找新型高效石油降解菌,并研究其相关基因一直是石油降解领域的热点.本文以细菌Pseudomonas sp.ZL13的降解性质粒pZL-1的DNA为模板,通过PCR扩增的方法进行基因克隆,得到邻苯二酚2,3-双加氧酶基因.序列分析结果表明,该基因大小为924bp,编码307个氨基酸;序列同源性比较结果显示,该基因与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的基因序列的相似性较高,处于同一分支.将目的基因连接到pGEX-4T-2表达载体上,在E.coli BL21中成功表达,转化子具有原油降解能力.     

云南宾川脐橙蔗糖转运基因的克隆和表达分析

蔗糖不仅是植物光合作用的主要产物,也是植物体内运输的主要物质和许多果实中糖积累的主要形式,对果实品质的形成有重要影响.在蔗糖合成的路径中,蔗糖合成酶(Sucrose Synthase)和蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate Synthase)是蔗糖代谢的关键酶.在前人报道苹果蔗糖转运基因的基础上,对云南宾川脐橙蔗糖转运基因进行克隆和表达分析,并对其相关的生理生化指标(蔗糖等糖含量、蔗糖合成代谢相关酶活性等)进行测定.研究结果显示,在宾川脐橙果实接近成熟时蔗糖转运基因的表达量最高,成熟脐橙中果肉的蔗糖含量比果皮中高,而成熟脐橙果肉和果皮中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶的活性差异不显著.     

牛蒡子化学成分研究

研究牛蒡子的化学成分。利用各种色谱技术进行分离、纯化,通过波谱解析结合理化性质鉴定化合物的结构。从牛蒡子中分离得到六种化合物,根据理化性质和光谱数据分别鉴定为牛蒡子苷元、邻苯二甲酸二异丁酯、9,12,15-十八碳三烯酸、二十六烷酸、亚油酸乙酯、十八烷酸甘油酯。