辽宁省1～30岁健康人群水痘-带状疱疹病毒IgG抗体血清学分析

目的 对辽宁省1～30岁健康人群水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)IgG抗体水平进行血清学分析。方法 于2020年10月采用分层随机抽样方法抽取辽宁省沈阳市、阜新市及丹东市3个地区的6个县区作为监测点,采集617名1～30岁健康人群的静脉血3～5 mL,分离血清,ELISA法检测VZV IgG抗体水平,计算血清抗体阳性率和抗体几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC),并进行比较分析。结果 617份血清样本中共检出VZV IgG抗体阳性样本302份,阳性率为48.947%,GMC为112.772 mIU/mL。不同年龄组健康人群VZV IgG抗体阳性率为29.670%～75.789%,GMC为45.508～366.559 mIU/mL,抗体阳性率(χ²=67.104,P <0.001)和GMC(F=20.685,P <0.001)差异均有统计学意义。男性和女性的VZV IgG抗体阳性率分别为44.817%和53.633%,差异有统计学意义(χ²=4.77...     

水痘带状疱疹病毒IgG抗体检测试剂国家参考品的研制

目的制备水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)IgG抗体检测试剂的国家参考品。方法利用国内外5个厂家ELISA试剂和膜抗原免疫荧光抗体检测(fluorescent-antibody-to-membrane-antibody,FAMA)试验,对候选样本进行筛选,确定水痘检测试剂国家参考盘;利用VZV WHO免疫球蛋白标准品对检测限参考品进行标定,通过不同厂家的协作标定最终确定国家参考品的质量标准,并对其稳定性和均匀性进行考察。结果参考品由8支阴性参考品、10支阳性参考品、1份重复性参考品和6支检测限参考品组成。质量标准为:阴性参考品符合率至少为7/8;阳性参考品符合率至少为9/10;检测限的浓度不高于127 mIU/ml;重复检测重复性参考品10次,其A值的变异系数不高于15.0%。该参考盘存放于不同条件下,相对稳定且均一性较好。结论成功建立了1套用于评价VZV IgG抗体检测试剂盒国家参考品。     

水痘-带状疱疹病毒在Vero细胞中的传代培养及抗水痘血清的制备

目的在Vero细胞中传代培养水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpes zoster virus,VZV),并制备抗水痘血清。方法将VZV(北京株VZV84-2)在Vero细胞中传代培养,待细胞病变(CPE)稳定后制备抗原,分别免疫家兔(分为1组和2组)和豚鼠(仅1组),均免疫4次,每次间隔14 d,其中除家兔1组第3、4次免疫经耳静脉注射不含佐剂的免疫原外,其他均经背部皮下免疫含弗氏完全佐剂的免疫原。于末次免疫后2周经颈动脉采血,分离血清,进行无菌试验、中和抗体效价检测及特异性干扰试验。结果 VZV(北京株84-2)在Vero细胞中传至第5代时,CPE可达80%~90%,传至第10代时,CPE稳定。用含兔及豚鼠血清培养基制备的免疫原的蛋白含量分别为2.1和1.7 mg/ml。抗血清无菌检测合格;家兔1组、豚鼠组、家兔2组的血清中和抗体效价分别为1∶128、1∶256、1∶64;抗水痘血清对麻疹(沪191株)、腮腺炎(S79株)、风疹(BRDⅡ株)疫苗的滴定无干扰。结论成功将VZV在Vero细胞中进行传代培养,并制备了抗水痘血清,但效价较低,有待进一步提高。     

水痘—带状疱疹病毒IgG酶联检测试剂盒的研制和应用

目的 研制水痘IgG(VZV-IgG)酶联检测试剂盒。方法 将VZV接种二倍体细胞,收获病毒,经纯化后用作包被抗原;辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG制备酶联检测试剂盒并进行质量检定。结果 VZV-IgG酶联检测试剂盒敏感度与膜抗原荧光抗体法(FAMA)近似。结论 成功地制备了VZV-IgG酶联检测试剂盒。     

重组水痘-带状疱疹病毒疫苗的研究进展

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)疫苗的安全性、有效性及应用价值已得到广泛认可。由于该疫苗的不良反应小,副作用轻微,且病毒基因组庞大,可容纳较大外源基因,因此,VZV株可作为一种安全的重组疫苗载体。由于可在VZV株的复制非必需区中插入单个或多个不同的抗原基因构建重组疫苗,VZV疫苗作为重组载体时,不仅可预防水痘和带状疱疹的发生,还可防治多种儿童及中老年人传染性疾病。本文就重组水痘-带状疱疹病毒(recombination VZV,r VZV)疫苗的构建及其免疫效果的研究进展作一综述。     

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)血清抗体的效果。方法以FAMA法为"金标准",同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本(水痘疫苗免前92份、免后92份)的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度(GMT)为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率(灵敏度)为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高(z=-6.03,P0.001)。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义(P0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P0.05)。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8~1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。     

北京市朝阳区健康人群水痘-带状疱疹病毒抗体水平调查

目的调查北京市朝阳区健康人群血清中水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)抗体水平,为带状疱疹防控策略的制定提供流行病学数据。方法采用城乡分层随机抽样的方法,于2016年5月在北京市朝阳区6个社区31~70岁健康人群中抽取320人作为调查对象,采用ELISA法检测每名调查对象血清中VZV-Ig G抗体水平,利用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果 320份血清样本中,VZV-Ig G抗体阳性309人,阳性率为96.56%,抗体平均浓度为(1092.48±4.73)m IU/ml。除66~70岁年龄组健康人群的VZV-Ig G抗体阳性率明显低于其他各年龄组(P0.05)外,其他各年龄组健康人群VZV-Ig G抗体阳性率差异均无统计学意义(P0.05);各年龄组不同性别健康人群VZV-Ig G抗体阳性率差异也无统计学意义(均P0.05);61~65岁年龄组健康男性人群和51~55岁年龄组健康女性人群VZV-Ig G抗体平均浓度最高,分别为(2 405.56±3.75)和(1 683.77±3.46)m IU/ml;城区和乡区健康人群VZV-Ig G抗体阳性率和抗体平均浓度差异均无统计学意义(P0.05)。结论北京市朝阳区31~70岁健康人群血清中VZV-Ig G抗体阳性水平较高,提示北京市朝阳区健康人群带状疱疹防控形势严峻。     

北京市通州区健康儿童水痘-带状疱疹病毒抗体水平特征分析

目的 了解2剂次水痘减毒活疫苗(varicella vaccine,VarV)免疫策略实施5年后,北京市通州区15岁以下儿童水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)IgG抗体水平,为完善VarV免疫预防提供参考。方法 采用随机抽样的原则抽取通州区10个居委会,选择在当地连续居住6个月以上的15岁以下健康人群为调查对象,通过问卷调查、查阅预防接种证,并通过北京市免疫规划信息管理系统收集研究对象基本信息和疫苗免疫史,采用ELISA法检测VZV IgG抗体水平。结果 共调查儿童380人,总VZV-IgG抗体阳性率为38. 68%(147/380),GMC为77. 12 mIU/mL;1剂次、2剂次VarV调查接种率分别为为41. 05%和20. 00%。12月龄婴儿,月龄与抗体水平呈负相关,相关系数为-0. 130(P 0. 05);≥12月龄儿童,VZV-IgG抗体阳性率和GMC随年龄及免疫次数增加均呈升高趋势。2剂次免疫史儿童VZV-IgG抗体阳性率和GMC最高;156例有1剂次VarV免疫史儿童中,随接种时间增加,VZV-IgG抗体阳性率呈下降趋势;74例有2剂次VarV免疫史儿童中,末次接种后VZV-IgG抗体阳性率和GMC不同接种年限间差异无统计学意义(P 0. 05),2剂次VarV免疫间隔时间差异也无统计学意义(P 0. 05)。结论 实施2剂次VarV免疫策略5年后,北京市通州区15岁以下儿童VarV接种率、VZV-IgG抗体阳性率偏低,建议加大VarV的接种推广力度。     

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的 建立水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E(gE)的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法 以VZV全病毒抗原为免疫原,通过小鼠杂交瘤融合技术筛选可稳定分泌抗VZV-g E抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价,经Hi Trap^TMMabselect^TMSu Re和Hi Trap^TMDesalting纯化后,12%SDS-PAGE分析单克隆抗体纯度,Western blot法检测特异性,小鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定亚型。经表位叠加试验筛选捕获抗体及酶标抗体,棋盘滴定法确定捕获抗体(0.25、0.5、1、2、5和10μg/m L)和酶标抗体(1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000和1∶10 000稀释)工作浓度后,建立VZV-g E含量的双抗体夹心ELISA检测方法。验证方法的线性范围、准确性、精密性和特异性。采用建立的方法检测3批7 L生物反应器培养1～14 d的CHO-VZV-g E细胞培养上清中g E含量。结果共获得4株稳...     

北京株水痘活疫苗的研制

选择处于对数生长期的人胎肺二倍体细胞（2BS），接种北京-7株水痘-带状疱疹病毒．待受染病毒的细胞出现CPE时，将维持液换为不含牛血清的MEM。接种后的2M细胞，培育36～38小时即可收获较高满度的病毒。采用pH7．2～7．4含25％山梨醇作保护剂、以6000r／min离心30分钟除去病毒液中的细胞碎片，制成减毒活疫苗。     

三种常用交叉配血方法检出IgG型抗体能力的比较

目的比较微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法检出IgG型抗体的能力。方法选用IgG抗-D血清致敏O型RhD阳性红细胞悬液,以未致敏的O型RhD阳性红细胞悬液倍比稀释,用微柱凝胶法、抗人球蛋白法和凝聚胺法分别进行检测;用生理盐水分别将IgG抗-D血清和IgG抗-AB血清倍比稀释后分别加入O型RhD阳性红细胞和AB型红细胞,用上述3种方法分别进行检测。结果3种方法对致敏红细胞的最低检出效价为微柱凝胶法1∶8,抗人球蛋白法1∶32,凝聚胺法1∶32;对IgG抗-AB血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶16,凝聚胺法1∶32,抗人球蛋白法1∶64;对IgG抗-D血清的最低检出效价为微柱凝胶法1∶128,凝聚胺法1∶64,抗人球蛋白法1∶16。结论微柱凝胶法对致敏红细胞和IgG抗-AB血清的检出能力均低于抗人球蛋白法和凝聚胺法,对IgG抗-D血清的检出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法。3种方法用于交叉配血均存在阳性漏检现象,选择合适的检测方法是保证输血安全的基础。     

人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定

目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。     

大鼠血清中抗轮状病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证

目的建立大鼠血清中抗轮状病毒(rotavirus,RV)IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证。方法以兔抗RV多抗血清作为包被抗体,RV作为检测抗原,建立抗RV IgG抗体间接ELISA检测方法。棋盘滴定法优化包被抗体浓度(1∶1 000～1∶1 024 000)和血清浓度(1∶20～1∶2 560),直接ELISA法优化生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度(1∶1 000～1∶128 000稀释)。采用优化的间接ELISA法检测39份RV抗体阴性大鼠血清样品,样品A₄₅₀均值加上3倍标准差作为该检测条件的阴阳性判定界值。同时对该方法的专属性、检测限、耐用性进行验证。分别采用建立的方法及荧光灶形成单位(fluorescent focus-forming unit,FFU)方法检测96份临床前安全性评价试验样品,评价二者的符合率。结果建立的间接ELISA法的最适反应条件为:包被抗体稀释倍数为1∶8 000,血清稀释倍数为1∶80,生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度为1∶4 000,阴阳性判定界值为0. 105。方法检测限为0. 031,且具有良好的专属性及耐用...     

高密度介质固相抗人球蛋白法检测孕妇ABO血型系统IgG抗体效价

目的探讨利用高密度介质固相抗人球蛋白法检测孕妇ABO血型系统IgG抗体效价的可行性。方法应用不完全抗体检测试剂盒(高密度介质固相抗人球蛋白法)检测40例O型血孕妇ABO血型系统IgG抗体效价,并与传统抗人球蛋白试管法进行对比。结果以IgG抗A(B)效价≥1:64定为阳性,两种方法的阳性检出率一致,均为50%(20/40);两种方法检测的抗体效价的几何均数差异无统计学意义(P>0.05);两种方法高度相关,r=0.9079(tr=13.36,P<0.001)。结论高密度介质固相抗人球蛋白法与传统抗人球蛋白试管法比较,操作简单,耗时短,结果准确,可应用于ABO血型系统IgG抗体效价的检测。     

水痘-带状疱疹病毒疫苗株在Vero细胞中的传代适应

目的探索水痘-带状疱疹病毒(VZV)疫苗株在Vero细胞中的传代适应及大量制备抗原的可行性。方法以VZV疫苗株在Vero细胞中传代适应,并检测适应株的生物学性状,采用15L旋转培养瓶培养,大量制备VZV ELISA抗原,并检测抗原的特异性。结果VZV疫苗株在Vero细胞中传代至第9代时,CPE明显增多,病毒滴度从2～3logPFU/ml提高到不低于4·2logPFU/ml。所制备毒种的适宜MOI为0·01,在72h左右收获的病毒滴度较高。毒种在-70℃保存1年后,病毒滴度未显著降低。抗VZV阳性血清检测证实制备的抗原具有较好特异性,抗原最适稀释浓度为1:4000。结论VZV疫苗株在Vero细胞中能传代适应,并可用15L瓶旋转培养大量制备VZV抗原。     

抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用

目的制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法。方法采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFB1-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定。结果筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1∶12800～1∶25600,纯化腹水效价为1∶105～1∶106。传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的最低检出限为0.001ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005～5ng/ml,IC50为0.01ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%。结论所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法。     

Definition of IgG Subclass-Specific Glycopatterns in Idiopathic Membranous Nephropathy: Aberrant IgG Glycoforms in Blood

The podocyte injury, and consequent proteinuria, that characterize the pathology of idiopathic membranous nephropathy (IMN) is mediated by an autoimmune reaction against podocyte antigens. In particular, the activation of pathways leading to abundant renal deposits of complement is likely to involve the binding of mannose-binding lectin (MBL) to aberrant glycans on immunoglobulins. To obtain a landscape of circulatory IgG Fc glycosylation characterizing this disease, we conducted a systematic N-glycan profiling study of IgG1, 2, and 4 by mass spectrometry. The cohort included 57 IMN patients, a pathological control group with nephrotic syndrome (PN) (n = 20), and 88 healthy control subjects. The effect of sex and age was assessed in all groups and controlled by rigorous matching. Several IgG Fc glycan traits were found to be associated with IMN. Interestingly, among them, only IgG4-related results were specific for IMN and not for PN. Hypo-galactosylation of IgG4, already shown for IMN, was observed to occur in the absence of core fucose, in line with a probable increase of pro-inflammatory IgG. In addition, elevated levels of fucosylated IgG4, along with low levels of hybrid-type glycans, were detected. Some of these IgG4 alterations are likely to be more pronounced in high PLA2R (phospholipase A2 receptor) patients. IgG Fc glycosylation patterns associated with IMN warrant further studies of their role in disease mechanisms and may eventually enrich the diagnostic spectrum regarding patient stratification.     

抗狂犬病病毒抗体的制备及酶联免疫法的建立

目的制备具有中和活性的抗狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)抗体,并建立检测RV抗原的ELISA法。方法以RV全病毒免疫2只新西兰家兔,制备抗RV多克隆抗体。以RV全病毒免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立稳定分泌抗RV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以小鼠中和试验(MNT)检测抗体的中和活性。以ELISA双抗体夹心法和ELISA竞争法检测RV抗原。结果2只家兔的多克隆抗体ELISA效价分别为1∶6.0×103和1∶1.2×104,纯化的兔抗RVIgG中和活性分别为46.3和29.2IU/ml。获得了9株稳定分泌抗RV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,属于IgG1或IgG2b亚型,腹水的抗体ELISA效价为1∶1.0×105~1∶1.0×107。单克隆抗体3E5、4C2和4F8具有中和活性,Westernblot分析提示,单克隆抗体4C2是针对RV糖蛋白线性表位的抗体。以单克隆抗体4C2作为捕捉抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,建立了ELISA双抗体夹心法,检测RV抗原。同时建立了另一种ELISA竞争法,加入固定工作浓度的单克隆抗体4C2,与RV病毒液孵育,以ELISA间接法检测RV病毒抗原。结论所获得的狂犬病毒多克隆和单克隆抗体具有中和活性,可在ELISA中用于检测RV抗原。