X射线全身照射对免疫器官内NF—κB的DNA结合活性的影响

采用凝胶电泳移动变化分析（ＥＭＳＡ）方法,观察了Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞及脾细胞内ＮＦ－κＢ ＤＮＡ结合活性的时程变化及其剂量效应关系。结果表明：胸腺细胞及脾细胞核蛋白提取物内存在两种与κＢ位点特异结合的ＮＦ－κＢ二聚体。照射后两者的变化时程及一效应关系显然不同。２Ｇｙ照射后胸腺细胞内ｐ５０／ｐ６５的ＤＮＡ结合活性在２４～４８ｈ稍有升高,而ｐ５０／ｐ５０的ＤＮＡ结合活性在照射后很快开始上升,于４ｈ达峰值,维持于高水平至１２ｈ后逐渐下降。照射后１２ｈ电离辐射诱导ｐ５０／ｐ６５复合物活性变化不明显,当剂量达１Ｇｙ以上时ｐ５０／ｐ５０的ＤＮＡ结合活性呈剂量依赖性升高。提示,中等以上剂量的电离辐射主要诱导具有转导抑制作用的复合物。对脾细胞核蛋白提取物剂量效应关系及２Ｇｙ照射后的时程研究表明,较低剂量辐射对ｐ５０／ｐ     

75 mGy X 射线全身照射激活小鼠免疫细胞转录因子 CREB、NF-kB 及 AP1

采用凝胶电泳迁移率变化分析和寡核苷酸竞争抑制方法检测小剂量Ｘ射线对小鼠免疫细胞基因转录水平调控的影响。７５ｍＧｙＸ射线全身照射小鼠后４ｈ，脾细胞核蛋白提取物的转录因子ＣＲＥＢ及ＮＦｋＢ与其基因启动部位增强子控制序列的结合活性，分别增强７倍及５倍。胸腺细胞核蛋白提取物ＣＲＥＢ、ＮＦｋＢ及ＡＰ１的结合活性分别增强６倍，４．３倍及２倍。而ＳＰ１、ＧＲＥ及ＯＣＴ１无明显变化。竞争抑制试验证实ＣＲＥＢ及ＮＦｋＢ与控制序列为特异性结合。提示小剂量Ｘ射线全身照射选择性地激活免疫细胞ＣＲＥＢ、ＮＦｋＢ及ＡＰ１，通过与增强子控制序列位点的结合，形成特异的诱导基因转录。     

75mGyX射线全身照射激活小鼠免疫细胞转录因子CREB,NF— …

采用凝胶电泳迁移率变化分析和寡核苷酸竞争抑制方法检测小剂量Ｘ射一对小鼠免疫细胞基因转录水平调控的影响。７５ｍＧｙＸ射线全身照射小鼠后４ｈ，脾细胞核蛋白提取物的转录因子ＣＲＥＢ及ＮＦ－ｋＢ与其基因启动部位增强子控制序列的结合活性，分别增强了７倍及５倍。胸腺细胞核蛋白提取物ＣＲＥＢ、ＮＦ－ＫＢ及ＡＰ１的结合活性分别增强６倍，４．３倍及２倍。而ＳＰ１、ＧＲＥ有ＯＣＴ１无明显变化。竞争抑制试验证实ＣＲＥＢ     

电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响

采用流式细胞术（ＦＣＭ）观察了Ｘ射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞周期进程的时程变化和剂量效应关系,为探讨电离辐射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响。结果显示,２ＧｙＸ射线全身照射后１２ｈ,骨髓细胞出现Ｇ１期细胞百分数升高（ｐ〈０．０５）,４ｈＳ期细胞百分数下降（ｐ〈０．０５）,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分数于后４ｈ和１２ｈ升高（ｐ〈０．０５）。量效研究显示,０．５～６Ｇｙ照射后１２ｈＧ１期细胞百分数高于对照组,其中     

低剂量辐射抑制辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的免疫学机制

为探讨低剂量辐射对高剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤抑制作用的免疫学机制,采用４次１．７５ＧｙＸ射线全身照射Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠诱发胸腺淋巴瘤模型,检测不同辐射剂量照后１个月小鼠脾脏ＮＫ细胞毒活性及其ＩＬ－２和γ－ＩＦＮ分泌活性,腹腔巨噬细胞吞噬功能及其ＴＮＦ－α分泌活性。结果显示每次１．７５Ｇｙ照射前１２ｈ接受７５ｍＧｙ照射小鼠,上述免疫功能均比单纯１．７５Ｇｙ照射组增强,且接近假照射组小鼠。提示低剂     

低剂量电离辐射对小鼠胸腺细胞Fos蛋白表达的影响

应用免疫组织化学、图像分析定量法及流式细胞术分别观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞Ｆｏｓ蛋白的变化。结果发现,照射后胸腺细胞Ｆｏｓ蛋白的表达明显增高,２４ｈ达峰值,以后逐渐恢复至假照水平。与以往的低剂量电离辐射全身照射后小鼠胸腺细胞ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ转录水平的变化在时程上一致。提示,低剂量电离辐射可使免疫细胞的活性增强。     

不同剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞周期进程的影响

采用流式细胞术研究了Ｘ射线全身照射后小鼠脾细胞周期的进程及其剂量效应关系。结果表明,７５ｍＧｙＸ射线全身照射后１２￣７２ｈ脾细胞周期各时相细胞数目发生明显变化,Ｇ０／Ｇ１期细胞数低于假照组,Ｓ组细胞数增多,说明其ＤＮＡ合成能力增强,至７ｄ时回复至假照组水平;２．０Ｇｙ全身照射后８ｈ时脾细胞出现明显的Ｇ２阻滞,１２ｈ时Ｇ２阻滞和ＤＮＡ合成抑制达最高点,７２ｈ其细胞周期进程则明显加快,至７ｄ时回复至假     

γ射线诱发细胞程序性死亡的时间及剂量效应研究

通过对辐射所致程序性细胞死亡（ＰＣＤ）的研究，揭示了射线诱发小鼠胸腺细胞ＰＣＤ生成的时间及剂量效应规律，采用不同的检测ＰＣＤ方法（ＤＮＡ片段分析法及流式细胞术），比较了不同组织的辐射敏感性差异，结果表明，照射后４～６ｈ诱发胸腺细胞ＰＣＤ生成最多。不同剂量照射，照后６ｈ取胸腺，发现２０Ｇｙ时胸腺细胞ＰＣＤ生成最多，脾，胸腺对辐射影响，小剂量（１Ｇｙ）即可检测ＰＣＤ形成；而心脏，大脑，肾对射线不敏感，     

小剂量辐射抑制肿瘤细胞播散的机理研究

观察了静脉注入肿瘤细胞前２４ｈ，７５ｍＧｙＸ射线全身照射对小鼠免疫功能的影响。结果表明照射组小鼠胸腺Ｓ期细胞百分数于照射后４ｄ，胸腺ＣＤ＾３＋细胞百分数于照射后２、８ｄ，脾细胞ＩＬ－２和γＩＦＮ分泌于照射后４ｄ，脾脏ＮＫ细胞活性于照射后２、４、６和８ｄ均较假照射组明显增高。     

小鼠受X射线全身照射后腹腔巨噬细胞IL-1 β蛋白表达的变化

采用胸腺细胞联合增殖反应法,观察了不同剂量Ｘ射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性的时程（７５ｍＧｙ和２．０Ｇｙ照射后６、１２、２４、４８、７２、１２０和１６８ｈ）变化和剂量效应关系（０．０７５、０．２、０．５、１．０、２．０４．０、６．０Ｇｙ照射后２４ｈ）。时程变化结果表明,７５ｍＧｙ照射后,小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性逐渐增高,照后６、１２、２４ｈ明显高于对照组,且以照     

X射线诱导CREB活化及其与cAMP通路的关系

检测X射线全身照射对小鼠胸腺细胞内CREB的DNA结合活性的影响和cAMP/cGMP比值的变化,并探讨照射后CREB的活化与cAMP通路的关系。采用电泳移动变化分析及竞争性蛋白结合分析法分别检测了胸腺细胞内CREB的DNA结合活性和cAMP,cGMP含量的变化。结果表明,大剂量照射（0．5－6．0Gy)诱导CREB的DNA结合活性明显升高,2Gy照射后最显著;cAMP/cGMP比值也表现为剂量依赖性的显著增加,0．075Gy照射后,CREB的DNA结合活性短暂下降后轻度增强,cAMP/cGMP比值下降,24h达最低值。说明低水平辐射诱导的CREB活性短暂下降后的轻度增强,可能不通过cAMP通路,较高剂量X射线诱导的CREB DNA结合活性的明显增强。则主要通过cAMP通路。     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达的变化。结果表明,与假照组相比,75mGy X射线全身照射后8h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始升高,12h达高峰,48h恢复至正常水平;而2Gy照射后4h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始降低,12h降至最低,24h有回升趋势,48h恢复至假照水平。p34^cdc2蛋白的表达,与假照组相比,75mGy照射后4～48h未见明显变化;而2Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后CyclinB1蛋白表达的变化基本一致。提示：低剂量X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达增强,从而促进细胞周期进程,但对p34^cdc2表达无影响;相反,较高剂量照射导致CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达均下降,最终发生G2阻滞。     

不同剂量 X射线全身照射对小鼠胸腺细胞周期进程的影响

本文采用细胞计量术研究了不同剂量Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞周期进程的变化。结果表明,７５ｍＧｙ Ｘ射线全身照射后２４～７２ｈ胸腺细胞周期各时相细胞数目发生明显变化,Ｇ０／Ｇ１期细胞数低于对照组,Ｓ期细胞数增多,说明其ＤＮＡ合成能力增强,至７ｄ时达到对照组水平;２．０Ｇｙ全身照射后４ｈ时胸腺细胞便开始出现明显的Ｇ２阻滞,１２ｈＧ２阻滞达最高点,７２ｈ其细胞周期进程明显加快,至７ｄ时达对照组水平。不     

整体照射后胸腺细胞和脾细胞p16基因转录和蛋白表达的变化

研究X射线全身照射对小鼠胸腺细胞和脾细胞p16基因转录及蛋白表达的影响。采用Northern blot检测p16基因转录水平的变化;采用流式细胞术检测蛋白表达的变化。时程结果表明,2.0Gy照射后4-24h,胸腺细胞p16mRNA水平明显增高,8-48h P16蛋白表达显著增高(p<0.05-p<0.01);照射后4-8h脾细胞p16mRNA水平明显增高,24h P16蛋白表达显著增高(p<0.05)。量效结果表明,0.5-6.0Gy照射后,胸腺细胞p16mRNA水平呈剂量依赖性增高,P16蛋白表达在1.0-4.0Gy组明显高于假照射组(p<0.05-p<0.01);脾细胞p16mRNA水平亦增高,但增幅远低于胸腺细胞,P16蛋白表达在1.0-4.0Gy组明显高于假照射组(p<0.05-p<0.01)。X射线全身照射可诱导胸腺细胞和脾细胞p16基因转录及蛋白表达增高。p16表达参与整体照射诱导细胞G1期阻滞的分子调控。     

电离辐射对小鼠胸腺细胞和脾细胞P53基因mRNA和蛋白表达的影响

采用流式细胞术和Northern blot法检测了不同剂量X射线全身照射后,小鼠胸腺细胞和脾细胞中p53基因mRNA和蛋白表达的变化。结果表明,2．0GyX射线全身照射后,小鼠胸腺细胞p53阳性细胞百分数与对照相比,在照后1h开始升高,8h达最高,以后逐渐下降。不同剂量X射线照射后,小鼠胸腺细胞和脾细胞中p53基因mRNA水平的观测结果表明,75mGy及2.0Gy全身照射后1-48h,小鼠胸腺细胞和脾细胞中p53mRNA水平均未见明显的变化;0.5-6.0GyX射线全身照射后4h,小鼠胸腺细胞和脾细胞中p53 mRNA水平亦未见明显的改变。结果提示,X射线全身照射可诱导小鼠淋巴细胞p53蛋白表达,其p53蛋白表达增加是通过转录后机制实现的。     

电离辐射对小鼠派伊氏板细菌凋亡的影响

采用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法研究不同剂理Ｘ射线全身照射后派伊氏板细胞凋亡的时间效应及剂量效应关系。结果表明：２Ｇｙ全身照射后派伊氏板ＴＵＮＥＬ阳性细胞数增加；０．０５Ｇｙ、０．０７５Ｇｙ全身照射后派伊氏板ＴＵＮＥＬ阳性细胞数减少。提示２Ｇｙ全身照射促进细胞凋亡，而低剂量电离辐射抑制细胞凋亡。     

p53及其下游基因在电离辐射诱导小鼠胸腺细胞G1期阻滞中的作用

采用流式细胞术和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测了Ｘ射线全身照射后的昆明系小白鼠胸腺细胞的细胞周期、ｐ５３及其下游基因表达的变化。结果表明：⑴２ＧｙＸ射线全身照射后４ｈ,小鼠胸腺细胞Ｇ１期细胞百分数明显高于假照射组,２４ｈ达峰值,持续至照射后４８ｈ;⑵２Ｇｙ照射后ｐ５３蛋白表达在照射后１～８ｈ明显增高,ｐ２１蛋白表达在照射后４～４８ｈ明显增高,而ＧＡＤＤ４５蛋白表达示未南明显变化;⑶２ＧｙＸ射线照射     

不同剂量X射线照射对小鼠巨噬细胞表达CD80和CD86的影响

采用免疫组织化学法观察了X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞及体外照射对培养的小鼠巨噬细胞株J774A．1细胞表达CD80和CD86的影响。结果表明;全身照射和体外照射时2GyX射线诱导CD80表达增高均较0．075Gy为早,而CD86对两种剂量的反应无明显区别,剂量效应关系的研究表明,CD80和CD86的表达无论全身照射或体外照射时均在0．075Gy 剂量点出现峰值,而在较大剂量照射时出现第二个峰值的剂量则全身照射高于体外照射。实验结果显示,B7分子的表达上调可能是参与低剂量电离辐射免疫增强效应的重要因素。     

X射线全身照射对小鼠脾细胞cyclin B1 和cdc2基因转录水平的影响

采用Northern blot杂交法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠脾细胞cyclin B1和cdc2基因转录水平的变化。结果表明,75mGy X射线全身照射后2h及12－24h小鼠脾细胞cyclin B1 mRNA表达量略有升高,分别为假照组的1.25、1.27和1.22倍,48h回降至假照水平;而2.0Gy照射后4h开始下降,12h降至最低,与假照组相比降低了39％,48h恢复至假照组水平。同时观察了cdc2 mRNA表达量的变化,结果表明,与假照组相比75mGy X射线全身照射后2－48h的各时间点小鼠脾细胞cdc2 mRNA表达量未见明显变化;而2．0Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后cyclin B1的变化基本一致。结果提示：低剂量辐射可诱导小鼠脾细胞cyclin B1转录水平增高,进而促进其细胞周期进程,但对cdc2转录水平无影响;相反,较高剂量辐射可诱导cyclin B1和cdc2转录水平均明显降低,最终发生G2期阻滞。