耐碱性芽孢杆菌碱性淀粉酶的研究

本文报道碱性α－淀粉酶１４Ｌ罐发酵工艺及其酶的性质。发酵过程中，当搅拌转速为４００ｒ／ｍｉｎ，通风比为１：１．２５Ｌ／（Ｌ．ｍｉｎ），发酵周期４４ｈ，酶活力可达７４０ｕ／ｍｌ。采用有机溶剂沉淀法提取酶，回收率可达９０％。Ｃａ＾２＋对酶活性无影响，ＥＤＴＡ对酶有激活作用。酶样保存半年，活力损失小于１５％。     

耐碱性芽孢杆菌碱性淀粉酶的研究──发酵试验与酶的性质

本文报道碱性α－淀粉酶１４Ｌ罐发酵工艺及其酶的性质。发酵过程中，当搅拌转速为４００ｒ／ｍｉｎ，通风比为１：１．２５Ｌ／（Ｌ·ｍｉｎ），发酵周期４４ｈ，酶活力可达７４０ｕ／ｍｌ。采用有机溶剂沉淀法提取酶，回收率可达９０％。Ｃａ￣（２＋）对酶活性无影响，ＥＤＴＡ对酶有激活作用。酶样保存半年，活力损失小于１５％。     

碱性蛋白酶产生菌嗜碱性芽孢杆菌的筛选

从土壤中筛选出的嗜碱性芽孢杆菌TGl,能在pH9～11条件下生长、产酶。酶促反应的最适pH为11,最适温度45℃。在pH12条件下的最适温度为30℃。在30℃,接种量4％,种龄10小时,初始pH11,培养时间60小时的条件下,酶活力可达2600单位/毫升。     

耐高温α—淀粉酶的研究概况

本文对地衣芽孢杆菌产生的耐高温α－淀粉酶的生产和特性作一阐述。该酶作用的最适ｐＨ５．５￣７．０，最适温度９２℃；酶合成是在对数生长期进行，工业化生产时酶活在稳定期达到最高，细胞生长与产酶量成反比；淀粉质原料具有诱导作用，可避免分解代谢阻遏；蛋白胨、玉米浆是较适宜的氮源；最佳产酶条件ｐＨ６￣９，温度３５℃；酶变性符合Ｎ←→Ｘ→Ｄ模型；非酶底物的糖类、多聚物、辛烷等都能增加酶的热稳定性。     

嗜碱性芽孢杆菌产高碱碱性蛋白酶发酵培养基及发酵条件的研究

对一株高产高碱碱性蛋白酶的嗜碱性芽孢杆菌的发酵培养基及发酵工艺进行了优化。确定了发酵培养基所采用的棉籽饼粉最适粒度为 80目 ,麦芽糊精的最佳DE值为 3 0 %。并确定了该菌株的最适发酵培养基配方为 ( g/1 0 0mL) :棉籽饼粉 3 ,酵母浸粉 1 75 ,麦芽糊精 1 0 ,柠檬酸钠 0 3 ,CaCl2 0 3。K2 HPO4 1 ;最适摇瓶发酵条件为 :种龄 1 2h ,接种量 2 %,装液量 5 0mL/2 5 0mL ,摇床转速 2 0 0r/min ,3 4℃ ,发酵 5 4h ,碱性蛋白酶的发酵单位可达 3 3 985u/mL ,比优化前提高了5 4 48%。此外 ,还进行了 5L罐放大实验 ,在 5L罐所确定的最适工艺条件下 ,发酵单位可达3 65 79u/mL。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性纤维素酶酶系的研究

本文研究了各种碳、氮源、ｐＨ、通风量等工艺条件对嗜碱性芽孢杆菌Ｖ－５产酶酶系的影响，通过酶在表面活性剂中的实验，分析不同表面活性剂对酶系中各组分的影响，初步研究酶系与去污力的关系，认为除以内切酶为主外，酶系中另二个组分，在去污效果中的辅助作用不容忽视。     

产碱性淀粉酶重组枯草芽孢杆菌的构建与发酵优化

碱性淀粉酶催化淀粉在碱性环境中高效降解,广泛应用于纺织退浆、洗涤、制药等领域。通过信号肽筛选,将来源于嗜碱单胞菌Alkalimonas amylolytica的碱性淀粉酶基因于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600实现分泌表达,并优化了重组菌产酶的发酵条件。在最佳信号肽ywb N介导下,重组B.subtilis发酵51 h,胞外Amy K酶活最高达146.86 U/m L,且能在发酵上清液中检测到与Amy K理论相对分子质量(60 k Da)一致的蛋白质条带。通过单因素实验优化了发酵培养基(糊精32 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母粉24 g/L,KH_2PO_42.32 g/L,K2HPO_4·3H_2O 16.43 g/L),并在发酵24 h后添加0.2 g/d L Na_2CO_3调节发酵液p H,发酵72 h胞外Amy K酶活达640.33 U/m L,较优化前提高了336%,是目前已报道重组B.subtilis产碱性淀粉酶的最高水平。研究结果为Amy K发酵生产的工业化提供了数据支撑。     

亟待开发的新型淀粉酶—耐碱性淀粉酶

耐碱性淀粉酶是诸多碱性酶中的一种，碱性酶是指其最适作用ＰＨ值在碱性范围内，并且在碱性环境中具有相当高的稳定性。利用嗜碱性微生物可生产多种酶类，耐碱性淀粉酶就是其中之一，本文简述了耐碱性淀粉酶的研究现状及应用前景。     

产淀粉酶枯草芽孢杆菌的16SrRNA测序鉴定

对分离得到的D53、D56菌株经PCR扩增后,测定其16S rRNA基因序列,与基因库中基因序列进行同源性比较可知,D53、D56菌株与枯草芽孢杆菌的相似性达99%。结合其形态观察及生理生化实验综合分析,得出2株菌为枯草芽孢杆菌,并在Genebank中申请登陆号分别为DQ923482和DQ923483。对产淀粉酶透明圈的测定结果表明,D53、D56的产酶能力达到6.5 U/mL和8.2U/mL。     

一株高产淀粉酶嗜盐海洋菌的筛选鉴定及其发酵条件研究

采用透明圈法从本实验室保存的40株海洋菌中,筛选得到15株具有淀粉酶活性的菌株,其中编号为399S3-11519的菌株具有较高的淀粉酶生产能力.通过16SrDNA分子鉴定,并结合菌落形态与KOH鉴定,确定其属于芽孢杆菌属.随后,对该菌株的发酵条件进行研究,确定其最佳碳源为淀粉,最佳氮源为大豆粉,最适温度37℃,最适pH值为7.0,最佳盐浓度5％,最佳底物浓度2％,最佳装液量50mL(250mL摇瓶),最佳接种量为3％;正交优化试验证明碳源和盐度对该菌产酶有较大影响,在最佳产酶条件下,酶活可达到293.8U/mL,比优化前提高了0.8倍.     

枯草芽孢杆菌淀粉酶高产菌株的复合诱变研究

该研究以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外和硫酸二乙酯（DES）复合诱变的方法,从大量突变菌株中获取可高效发酵生产淀粉酶的菌株。又通过连续传代实验,确定了该突变菌株突变性状能稳定遗传。结果表明,菌株D-2具有较高的的淀粉酶活力,其淀粉酶活力可达N6．599U／mL,较出发菌株提高到4倍。并在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性。该文探讨了一种高效的发酵生产淀粉酶菌株的选育方法,为下一步菌种生长条件优化打下了基础。     

淀粉酶高产菌株的筛选及其酶活的测定

为了筛选对于淀粉降解效果好的淀粉酶产生菌株,从浙江、山东等地富含淀粉的土壤样品中筛选出1株产淀粉酶活力较强的菌株BSJD10,结合茵落形态、生理生化指标和16SrDNA序列分析,对其种群形态和个体形态进行观察和鉴定,确定BSJDl0为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

提高C_(1213)菌碱性蛋白酶活力的研究

本文阐述了对地衣芽孢杆菌C_(1213)进行的诱变选育及发酵条件试验。获得的pH4～18变异株产碱性蛋白酶活力达21000单位/ml,放大试验在2.5m~3发酵罐中进行。冀的性质试验表明:最适pH11,最适温度60℃。     

碱性高温淀粉酶基因的克隆与表达及酶特性的初步研究

从土壤中筛选到一能分泌碱性高温淀粉酶的芽孢杆菌属菌株。用质粒pTB522作载体,该淀粉酶基因(amyA)被克隆并在枯草芽孢杆菌ANA-1中得到表达。又通过亚克隆,得到含酶基因的更小重组质粒pTBX32(14.6kb)。携带该重组质粒的枯草芽孢杆菌ANA-1分泌的淀粉酶的特性与供体菌的相同。该酶作用最佳pH为8.5、最适温度为75℃,但在65℃,pH8.5条件下处理1h,该酶活性不降低。通过硫铵沉淀、热处理、DEAE——纤维素色谱和亲和色谱等分离技术,从培养液中部分纯化了该酶,其分子量估计为56000。     

产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4 U/mL~10.4 U/mL之间。经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌。     

习酒酒曲中产淀粉酶细菌分离及性质研究

从习酒酒曲中分离筛选出16株产α-淀粉酶菌株,镜检及生理生化试验初步鉴定均为革兰氏阳性芽孢杆菌;菌株产酶最适宜温度在45-80℃之间,除一株高温型α-淀粉酶菌株外,其余均为中温型α-淀粉酶菌株;酶解产物纸层析分析,既有液化型α-淀粉酶,也有糖化型α-淀粉酶。