培养基质对蛹虫草中虫草酸及核苷类物质的影响

采用燕麦、小米、大麦、大米4种培养基质固体培养获得蛹虫草子座,比较子座中虫草酸、虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷及胸苷含量的差异。采用比色法测定虫草酸含量,采用高效液相法测定核苷类物质含量。结果表明:培养基质对蛹虫草代谢产物合成的影响各有不同,小米培养的子座虫草酸(9 000μg/g)及虫草素(9 531.0μg/g)含量最高,大米培养的子座腺苷(818.9μg/g)和尿苷(2 028.4μg/g)含量最高,大麦培养的子座鸟苷(1 105.3μg/g)含量最高。     

蛹虫草液态发酵过程中有效成分的动态积累变化

通过对蛹虫草4号菌株进行摇瓶液态发酵培养,考察了蛹虫草发酵过程中发酵液及菌丝体生物量、虫草多糖、虫草酸及虫草素含量的动态积累变化情况。结果表明:70%以上的虫草多糖、虫草酸、虫草素分布在发酵液中。蛹虫草菌在第10天生物转化量达到最大值20.44 mg/mL,虫草酸、虫草多糖、虫草素含量分别在第11、13、14天达到最大值,综合考虑3种产物的最佳发酵周期,将蛹虫草发酵时间定为12 d。10 L发酵罐深层培养试验的结果表明,生物量达24.5 mg/mL,比摇瓶培养提高19.86%,而虫草酸、虫草多糖、虫草素含量分别为7.43、2.82、90.73μg/mL,比摇瓶培养分别提高8.3%、13.7%和15.6%。     

蛹虫草子实体保健酒的研制

采用冷浸提法制蛹虫草酒,研究了浸提工艺对功效成分的影响,并探讨了后期的澄清工艺.实验表明,蛹虫草酒浸提工艺是完整子实体在40%VoL基酒中浸提1个月,经过添加明胶、活性炭为澄清剂,微孔滤膜抽滤的澄清步骤后,保健酒于室温下静置两个月,未见浑浊再现.以人工培养的蛹虫草子实体为主要原料研制的新型保健酒具有独特的香气和营养滋补保健作用.     

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成的影响

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成有很大影响.为了探讨类胡萝卜素与蛹虫草子实体形成的关系,选取三种典型菌落形态的蛹虫草菌株,研究其在光照黑暗交替条件下不同菌落形态和类胡萝卜紊含量对子实体形成的影响.采用酸热法和吸收光谱法提取测定类胡萝卜素含量.结果表明三类蛹虫草在沙氏平板上均有可形成子实体的菌株,说明形态与子实体形成无直接关系.类胡萝卜素含量在3000μg/g以下的菌株在沙氏培养基上无子实体形成,3000～3500μg/g有子实体形成平均为2个/cm2,3500～6500μg/g菌株子实体形成能力较强平均为7个/cm2,含量在6500μg/g以上菌株形成子实体平均在5个/cm2,全黑暗培养菌株未检测到类胡萝卜素,也无子实体形成.     

蛹虫草固态发酵产虫草素的优化

为提高虫草素的产量,本实验对蛹虫草固态发酵产虫草素进行优化。通过一系列单因素实验,确定大米为发酵基质,葡萄糖和黄豆粉分别为最适碳源和氮源,得到最佳培养基组成和最佳培养条件:大米30 g(粒径0.90～1.25 mm),料液比(m/v)1∶1.5,葡萄糖3%(按基质算,下同),黄豆粉2%,麦麸1%,接种量30%,种龄2 d,发酵时间12 d。优化后虫草素产量达到4.69%,约为优化之初(0.74%)6.34倍。     

长白山虫草属蛹虫草多糖的抗氧化活性及其对果蝇寿命的影响

以长白山虫草属蛹虫草的胞内与胞外多糖为研究对象,分别检测其体外抗氧化能力。以果蝇种群的半数死亡时间、平均寿命、平均最高寿命及寿命延长率为指标,评价胞内、外多糖对果蝇寿命的影响。试验结果表明:胞内、外多糖具有良好的体外抗氧化能力,且基本随浓度的提高而增强;胞内多糖的高剂量组能显著提高雌性果蝇寿命,延寿率可达11.63%;中、高剂量组均能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率分别达13.20%、16.46%,且对雄性果蝇的延寿作用强于雌性。胞外多糖方面仅中剂量组能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率为9.20%,延寿作用不明显,显著低于胞内多糖。本文通过探究蛹虫草胞内和胞外多糖的抗氧化及延缓衰老的作用,为进一步研发蛹虫草功能性食品提供理论依据。     

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成的影响

类胡萝卜素对蛹虫草子实体形成有很大影响。为了探讨类胡萝卜素与蛹虫草子实体形成的关系,选取三种典型菌落形态的蛹虫草菌株,研究其在光照黑暗交替条件下不同菌落形态和类胡萝卜素含量对子实体形成的影响。采用酸热法和吸收光谱法提取测定类胡萝卜素含量。结果表明三类蛹虫草在沙氏平板上均有可形成子实体的菌株,说明形态与子实体形成无直接关系。类胡萝卜素含量在3000μg/g以下的菌株在沙氏培养基上无子实体形成,3000~3500μg/g有子实体形成平均为2个/cm2,3500~6500μg/g菌株子实体形成能力较强平均为7个/cm2,含量在6500μg/g以上菌株形成子实体平均在5个/cm2,全黑暗培养菌株未检测到类胡萝卜素,也无子实体形成。      

不同提取方法对蛹虫草基质多糖的特性研究

以废弃的蛹虫草培养基基质为原料,利用水提法、酶解法、超声波法、超声波-酶法、微波法和微波-酶法来提取蛹虫草基质多糖,研究不同提取方法下蛹虫草基质多糖得率、多糖黏度及多糖抗氧化活性的区别来比较六种提取工艺的优缺点。结果表明:超声波-酶法所得蛹虫草基质多糖的得率最高,达30.27%,水提法最差,为10.69%。不同提取方法所得的多糖溶液黏度均随多糖溶液浓度的增大而增大,在相同浓度下多糖溶液的表观黏度大小依次为水提法>微波法>酶法>微波-酶法>超声波法>超声波-酶法。超声波-酶法提取的蛹虫草基质多糖体外抗氧化活性最好,而水提法的多糖抗氧化活性最差。     

虫草枸杞复合发酵工艺研究

在蛹虫草液体培养过程中加入枸杞汁,进行虫草枸杞复合发酵,对发酵过程中虫草菌生长曲线及发酵产物有效成分含量进行了测定。确定了虫草枸杞复合发酵最佳工艺条件为:蛹虫草发酵72 h时向培养基中添加5 g/L的枸杞匀浆液,发酵周期144 h。在此工艺条件下,复合发酵产物产量较虫草菌丝体升高了112.12%,达11.73 g/L。其中虫草素含量11.23 mg/g,虫草酸含量178.21 mg/g,多糖含量30.73 mg/g,较虫草菌丝体分别提高了29.98%,64.46%和97.20%。复合发酵产物抗氧化能力较虫草菌丝体升高了44.62%。     

不同复合碳源对蛹虫草生长的影响

蛹虫草子实体可药食两用,具有广阔的研究前景.该文主要研究了不同复合碳源对蛹虫草子实体培养过程的影响.研究发现,蛹虫草在以小麦为复合碳源的培养基中长势最好,所得子实体中虫草多糖的含量也最高.     

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49×10^4,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。     

冬虫夏草与蛹虫草融合株的原生质体诱变育种

以冬虫夏草与蛹虫草融合株为研究材料,对其原生质体进行紫外诱变,筛选优质高产的新型菌株。得到了高产菌株Y-90,虫草酸产量是出发菌株的1.80 倍,高产菌株YP-42,虫草素产量是出发菌株的1.33 倍。采用随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA,RAPD）分子标记技术和核糖体rDNA内部转录间隔区（internaltranscribed spacer,ITS）序列分析技术对突变株的遗传变异情况进行分析。结果表明突变株的ITS序列并没有发生变化。RAPD结果显示突变株的扩增片段与亲本菌株不同,说明发生了基因突变,其高产性状是可遗传的性状,可以将其用于进一步的育种研究。     

蛹虫草液态深层发酵的研究

采用二次饱和D 最优试验设计方法 ,在 3 0L生物反应器中进行了蛹虫草液态深层发酵。当初始温度为 2 2℃ ,pH 6 3～ 6 5 ,搅拌速度 1 80r/min ,通风量 1 2 1m3/h ,发酵 72h和 96h ,蛹虫草菌丝体 (干 )产率分别为 3 8 6g/L和 42 3g/L。用HPLC法检测腺苷和蛹虫草菌素的含量 ,72h时分别为湿菌丝体中 0 3 5 2 μg/g和 0 1 3 4μg/g ,发酵液中 0 1 79μg/mL和 0 1 0 2 μg/mL ;用比色法在41 2nm处检测虫草酸的含量 ,湿菌丝体中为 2 3 40 6mg/g,发酵液中为 6 61mg/mL。     

蚕虫草与有关虫草活性成分检测比较

通过测定蚕虫草、蚕蛹草和冬虫夏草的腺苷、虫草素、虫草多糖和虫草酸,发现以家蚕为寄主的蚕虫草,虫草素的含量高达12.59mg/g,是同一菌种蚕蛹草的4.45倍,同时虫草多糖是蚕蛹草的2.68倍;与冬虫夏草相比,除虫草素是其数百倍外,腺苷也高达4倍之多,是一种很有开发前景的虫草新资源。     

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

北虫草发酵过程中营养成分及代谢物变化研究

研究了北虫草摇瓶发酵过程中培养基营养成分及其代谢物质变化情况,测定了培养基的pH、总糖、还原糖和可溶性蛋白及游离氨基酸等成分含量,探明了北虫草菌体生长、多糖及虫草素生成规律。结果显示:随发酵时间的延长,发酵液的pH、可溶性固形物、总糖和还原糖含量均总体呈下降趋势;游离氨基酸含量呈先变化迟缓而后上升趋势;北虫草菌丝体及虫草素产量随时间延长先增加后下降;粗多糖含量总体略呈下降趋势。      

蛹虫草菌丝体发酵培养过程中氨基酸添加技术研究

组氨酸、精氨酸、赖氨酸是对蛹虫草生长影响较大的3 种碱性氨基酸,本实验研究在蛹虫草液体发酵过程中添加上述氨基酸的不同条件对蛹虫草菌丝体生物量和其中主要抗癌功能成分虫草素的影响。首先进行添加氨基酸种类、氨基酸的添加量、初始pH 值、培养温度对蛹虫草菌丝体生物量和虫草素含量的单因素试验,在此基础上进行四因素三水平的正交试验。结果表明：对蛹虫草菌丝体生物量影响从大到小的顺序依次是：氨基酸种类＞培养温度＞初始pH 值＞氨基酸添加量。增加蛹虫草菌丝体生物量的最佳培养条件为：添加氨基酸种类为精氨酸,培养温度为26℃,培养初始pH 值为6,100mL PDA 发酵培养液添加精氨酸0.3g。对蛹虫草菌丝体中虫草素含量影响从大到小的顺序依次是：氨基酸种类＞初始pH 值＞培养温度＞氨基酸添加量。增加菌丝体中虫草素含量的最佳培养条件是添加氨基酸种类为精氨酸,培养温度为24℃,100mL PDA 发酵培养液添加0.3g,培养的初始pH 值为6 。     

虫草花多糖提取工艺优化及其抗氧化特性

采用超声辅助法提取虫草花多糖,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验优化了虫草花多糖提取工艺;并就虫草花多糖对羟基自由基（·OH）、1,1-苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基的清除作用和还原能力进行研究。结果表明：虫草花多糖最佳提取工艺条件为超声功率300 W,液料比30∶1（mL∶g）,超声时间30 min,超声温度45 ℃。在此优化条件下,多糖的平均提取率为3.88%。抗氧化活性试验结果表明,虫草花多糖质量浓度在2.9～14.7 mg/L范围内,随着虫草花多糖质量浓度的增加,其OH、DPPH自由基清除能力及还原能力均逐渐增强,虫草花多糖质量浓度为14.7 mg/L时,对·OH和DPPH·清除率分别达到44.39%和56.34%,说明虫草花多糖具有较强的抗氧化活性。