嗜酸乳杆菌胞壁肽聚糖对小鼠肠黏膜的免疫调控

通过建立以致病性大肠杆菌感染小鼠为模型,研究氧化修饰前后嗜酸乳杆菌肽聚糖（peptidoglycan,PG）对小鼠肠道上皮细胞病理形态影响,及对感染大肠杆菌肠黏膜分泌sIgA、血清干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的影响,发现灌胃PG后能够促进小肠黏膜分泌sIgA,降低IFN-γ及TNF-α的表达,且选择性氧化修饰PG比未修饰PG具有优势。可见,嗜酸乳杆菌在肠道免疫方面,可以通过其功能性PG提高对小肠黏膜的免疫调控作用。     

Detection and localization of a peptidoglycan hydrolase in Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus

Peptidoglycan hydrolase activities in Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus were detected by analysis of bacterial extracts on denaturing polyacrylamide gel electrophoresis containing lyophilized Micrococcus lysodeikticus cells as substrate. A hydrolase with an estimated molecular mass of 80 kDa was found to cross-react on Western blot with monoclonal antibodies raised against muramidase-2 of Enterococcus hirae. These antibodies were also used to demonstrate that the method of cell sample preparation affected protein detection. Slot and Western blots indicate that the peptidoglycan hydrolase from L. bulgaricus is bound to the cell wall. Immuno-labeling followed by optical and electron microscopic observations suggest that this hydrolase is intracellular and restricted mainly to the space between the membrane and the cell wall.     

玉米醇溶蛋白的磷酸化修饰及结构研究

玉米醇溶蛋白广泛应用于食品、医药、生物材料、纺织工业等领域,但蛋白不溶于水的性质限制了其应用范围。为改善其性质,本文用磷酸化修饰玉米醇溶蛋白,测定磷酸化修饰前后玉米醇溶蛋白的黏度、等电点、酸、碱稳定性等物理性质;用圆二色谱研究磷酸化修饰前后蛋白的二级结构和三级结构变化,用示差扫描量热法(DSC)测定蛋白的热稳定性。结果表明:Zein蛋白在80%乙醇溶液中的等电点(Pd I)为p H 5.97,粒径为1436 nm。经磷酸化修饰后,蛋白与磷酸盐以O-磷酸键和N-磷酸键结合,酸性条件(p H 5.0)主要以O-磷酸键结合为主,中性及碱性(p H 7.0和9.0)条件下主要以N-磷酸键结合。同时,蛋白的黏度增加,等电点酸性漂移,α-螺旋结构含量降低,玻璃态转化温度升高。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化及酶学性质研究

研究采用DEAE-Sepharose F.F离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析对嗜酸乳杆菌发酵液中的亚油酸异构酶进行了分离纯化,酶回收率为6.39,纯化倍数为37.9倍。经研究确定酶最适pH为6.0,最适反应温度为30℃。在pH 6~8之间,亚油酸异构酶可保持较高活力,超出此范围,酶活力明显下降;该酶对高温敏感,50℃保温2 h,酶活力即变得很低;亚油酸异构酶受底物LA的抑制,酶反应最适LA浓度为1.5×10-5g/mL,过高LA则对酶产生抑制作用。     

氮离子注入选育高自溶干酪乳杆菌及其肽聚糖水解酶的RT-qPCR分析

通过采用低能N⁺注入对干酪乳杆菌116-a进行诱变,以筛选得到高自溶的干酪乳酸菌突变体,并采用实时荧光定量PCR检测N-乙酰胞壁质酶和N-乙酰氨基葡糖胺糖苷酶在野生菌体和突变体中的表达差异。结果显示:经过离子能量30 keV N⁺注入诱变,在注入剂量0.5×10¹⁵ ions/cm²时,筛选得到遗传稳定性良好的最大正突变菌株,其自溶度为56.3%,最大正突变菌株自溶度比野生型菌株的自溶度提高了25.7%。实时荧光定量PCR检测发现,N-乙酰氨基葡糖苷酶和N-乙酰胞壁质酶在突变体中的表达量比野生菌体中的表达量均有所上调,其中N-乙酰氨基葡糖苷酶表达量上调了约55倍,而N-乙酰胞壁质酶的表达量仅上调2.8倍。因此,N-乙酰氨基葡糖苷酶在干酪乳杆菌116-a自溶中起着重要作用,该酶表达量的上调可以有效提高菌体的自溶。     

一株嗜酸乳杆菌突变株亚油酸异构酶的纯化及性质

亚油酸异构酶可以把亚油酸转化为共轭亚油酸。用硫酸铵沉淀、透析、凝胶过滤等步骤 ,从 1株嗜酸乳杆菌突变株中分离纯化了该酶。纯化倍数为 5 2 .0倍、比活力达 5 1 3 .0U/mg、活力回收 7.0 %。用SDS PAGE测得该酶亚基的分子量为 40 .7ku ;该酶的最适反应pH值为 4.0左右 ,最适反应温度为 3 0～ 40℃ ,在 pH 2 .0～ 7.0和 60℃以下较稳定。Fe2 + 、Mg2 + 、Zn2 + 、Na+ 能提高酶活性 ,Hg2 + 、Cu2 + 、Mn2 + 、Fe3+ 能抑制酶活性。以亚油酸为底物时该酶的动力学常数为 2 1 .6mmol/L。     

人源性嗜酸乳杆菌的分离及分子鉴定

从健康婴儿的新鲜粪便中分离纯化的10株乳杆菌,用嗜酸乳杆菌l6S rDNA的特异性引物和建立的PCR方法对乳杆菌分离株进行分子水平上的鉴定。结果表明,有3株菌和嗜酸乳杆菌参考菌株扩增出大小一致的目的片段,证明此3株菌为嗜酸乳杆菌。测序结果显示,3株分离菌株与标准菌株的同源性达到95%以上,进一步说明了3株菌为嗜酸乳杆菌。     

植物乳杆菌细胞壁肽聚糖的微胶囊化

以壳聚糖(CS)为壁材,采用乳化交联法制备载植物乳杆菌细胞壁肽聚糖(PG)的CS微球,并通过动物实验研究口服PG微球的缓释效果。通过低、中、高3种剂量裸PG和PG微球对小鼠进行灌胃1周处理,每隔3d断尾取血,连续进行15d,ELISA法检测小鼠血清中溶菌酶含量。结果表明:微球的载药量和包封率依壁、芯材比而变化,其中,PG和CS质量比为1:1的复合微球平均载药量为(37.00±3.24)g/100g,包封率为(92.00±2.38)%。在免疫后第9天各微球组小鼠血清中溶菌酶含量均达到最高值,明显高于对照组,免疫后第15天各微球组血清中溶菌酶含量仍保持较高水平。载PG的CS微球具有显著的缓释效果,能够显著延长PG作用时间。     

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取优化

为了获得较高酶活力的嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶(CEP),对嗜酸乳杆菌CEP的提取方法进行优化。经过比较超声波破碎法、Ca2+-free法、溶菌酶裂解3种方法,确认溶菌酶裂解法结合使用非离子清洁剂破壁是提取嗜酸乳杆菌CEP的最佳方法。在单因素试验的基础上,采用正交试验对嗜酸乳杆菌CEP的提取工艺进行优化,得出嗜酸乳杆菌CEP的最佳提取方法：用裂解液(50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCl、TritonX-100添加量1%、1.5mg/mL溶菌酶,pH 7.8)悬浮菌体(20mL/g),37℃保温3h,4℃、4500r/min离心20min,取上清液。溶菌酶裂解法提取CEP过程中各因素对CEP提取效果的影响依次为：溶菌酶质量浓度＞裂解pH值＞TirtonX-100添加量＞保温时间。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化研究

本实验对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化进行了研究。嗜酸乳杆菌的粗酶液经40%～80%饱和度的硫酸铵盐析、透析、SephadexG-100凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后,酶的纯化倍数达到3.10,比活力为475.75U/(mg蛋白质);纯化后的亚油酸异构酶在SDS-PAGE电泳中只呈现一条带,并测得分子量约为46.6kDa。     

嗜酸乳杆菌生物学特性及其发酵乳的研究

研究了嗜酸乳杆菌的生物学特性,并确定其发酵乳的合适的加工工艺。结果表明,在质量分数为11％脱脂乳培养基中加入质量分数为7％的啤酒能显著提高嗜酸乳杆菌的产酸速率及活菌总数。该菌株耐盐和耐胆酸盐能力分别达到6 0％和1.5％,同化胆固醇达80％,证明是一株性能优良的益生菌株。在此基础上确定嗜酸乳杆菌发酵乳的加工工艺:①采用乳糖部分水解的牛乳（水解率40％）为原料,接种质量分数为3％的嗜酸乳杆菌;②采用混合菌种（嗜酸乳杆菌+唾液链球菌嗜热亚种+德氏乳杆菌保加利亚亚种=3％+0.5％+0.5％）为发酵剂,按常规酸乳工艺生产。产品中嗜酸乳杆菌的活菌数达到109mL-1以上,5d后其活菌数仍有6×108mL-1,且产品口风味良好。     

猪血红蛋白的提取及磷酸化的研究

研究猪血红蛋白的提取方法,并对提取的血红蛋白进行磷酸化试验,讨论pH值、蛋白质添加量、时间、STP添加量对磷酸化程度的影响.最佳磷酸化条件为:pH值9.0,蛋白质添加量为8%,时间1 h,STP添加量为10%.STP添加量与蛋白质添加量的影响显著(p＜0.05);pH值、时间的影响不显著(p＞0.05);四种因素的影响次序为STP添加量＞蛋白质添加量＞pH值＞时间.     

浒苔多糖的磷酸化修饰工艺

利用离子交换层析和凝胶层析对浒苔多糖进行分离纯化,并探讨其磷酸化修饰的最佳工艺条件。通过单因素试验确定反应温度、反应时间、反应pH值、磷酸化试剂质量浓度的取值范围,再用响应面设计法确定磷酸化修饰的最佳条件。结果表明:反应时间、磷酸化试剂质量浓度显著影响浒苔多糖磷酸化程度,当反应温度80℃、反应时间5h、反应pH9.0、磷酸化试剂质量浓度0.10g/mL时,磷酸化修饰的浒苔多糖磷酸根含量(以P计)达到14.40%。     

Functional properties of Lactobacillus acidophilus metabolites

BACKGROUND: This study addressed the characteristics of metabolites synthesized by Lactobacillus acidophilus 5e2, with particular attention paid to exopolysaccharides, biosurfactants, proline peptidases and antibacterial compounds. RESULTS: The strain Lb. acidophilus 5e2 synthesizes low‐molecular‐mass polysaccharides (340 kDa) constituted by glucose, galactose and glucosamine at a ratio of 3.3:2.8:1.0, as well as biosurfactants with a molecular mass of 32 kDa built from a protein fraction, a polysaccharide fraction and phosphate groups. It additionally synthesizes extra‐ and intracellular proline peptidases, including prolyl endopeptidase and thermostable low‐molecular‐mass (<3.5 kDa) compounds with antimicrobiological activity against Escherichia coli strains. CONCLUSION: The strain Lb. acidophilus 5e2 may be applied to the production of functional food. Copyright © 2009 Society of Chemical Industry     

乳酸杆菌肽聚糖的分离鉴定及其免疫活性

研究了乳酸杆菌细胞壁肽聚糖的分离、鉴定及其对肽聚糖生物活性的影响.实验获得了SDS处理粗细胞壁的适宜条件为SDS质量浓度8g/dL,处理时间为沸水浴10min.SDS结合胰蛋白酶和TCA处理,可有效去除乳酸杆菌中的非共价结合蛋白质及共价结合蛋白质.经化学分析鉴定,所提取的乳酸杆菌成分为肽聚糖,肽聚糖中丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和赖氨酸浓度分别为1.181,0.943,0.770和0.456mmol/g,是肽聚糖中的组分氨基酸.SDS结合TCA处理,方能较有效地去除DNA.TCA处理是去除细胞壁磷壁酸、脂磷壁酸的有效方法.此外,小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验、C3b受体实验以及血清溶菌酶活力实验证实,所分离纯化肽聚糖的免疫学活性未受影响.     

瑞士乳杆菌和嗜酸乳杆菌的益生免疫特性的研究

以瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1、KLDS AD2为研究对象,详细研究了它们对体外模拟人工胃肠道的耐受性,并评估了三株乳杆菌对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,初步探讨了三株乳杆菌的免疫活性。结果表明,三株乳杆菌对人工胃液、人工肠液、胆汁盐环境具有很好的耐受性,瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1较强于嗜酸乳杆菌KLDS AD2。乳杆菌对脾淋巴细胞增殖活性的作用表现出明显的量效关系,活菌数为107CFU/mL时,对脾淋巴细胞活性影响大小为KLDS AD1>KLDS 1.8701>KLDS AD2;KLDS 1.8701对脾淋巴细胞的增殖具有很好的促进作用,只有当KLDS AD1的活菌数达到107CFU/mL时才具有促进作用,而KLDS AD2没有促进作用。      

双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的研制

目的制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊,以期提高口服时的存活率和常温下的保存期。方法根据微胶囊在人工胃液中的耐酸性和在人工肠液中的崩解性,确定空气悬浮法制备微胶囊的最佳工艺条件。扫描电镜观察微胶囊形态与大小。根据恒温37℃、相对湿度60%~65%条件下贮存3个月后菌体存活率,考察其贮存稳定性。结果制备的微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。微胶囊包囊产率56.49%,包囊效率87.45%。微胶囊表面覆盖着一层光滑平整的囊膜,粒径大小基本在400~500μm。加保护剂的微胶囊菌体存活率高于10%,且远远高于冻干菌粉和无保护剂微胶囊组。结论确定了空气悬浮法制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的最佳工艺条件,微胶囊化有利于提高活菌的稳定性。     

双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的研制

目的 制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊,以期提高口服时的存活率和常温下的保存期.方法 根据微胶囊在人工胃液中的耐酸性和在人工肠液中的崩解性,确定空气悬浮法制备微胶囊的最佳工艺条件.扫描电镜观察微胶囊形态与大小.根据恒温37℃、相对湿度60%～65%条件下贮存3个月后菌体存活率,考察其贮存稳定性.结果 制备的微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性.微胶囊包囊产率56.49%,包囊效率87.45%.微胶囊表面覆盖着一层光滑平整的囊膜,粒径大小基本在400～500μm.加保护剂的微胶囊菌体存活率高于10%,且远远高于冻干菌粉和无保护剂微胶囊组.结论 确定了空气悬浮法制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的最佳工艺条件,微胶囊化有利于提高活菌的稳定性.     

Isolation and characterization of acid- and bile-tolerant isolates from strains of Lactobacillus acidophilus

Lactic acid bacteria have been reported to be useful as a health adjunct and are commonly added to food as the delivery mechanism. The literature contains many conflicting observations for their proposed benefits, and the mechanism of action is undefined. One source of variation is the large number of strains used without proper controls supplemented. Additionally, many of the organisms are not characterized for their acid shock response or the acid-tolerance response, which are known to vary among bacterial species. Our objective was to isolate acid-resistant and bile-resistant variants of Lactobacillus acidophilus and to determine the phenotypic changes. The acid- and bile-tolerant isolates were obtained using natural selection techniques after sequential exposure to hydrochloric acid (pH 3.5 to 7.0) and mixed bile salts. The acid- and bile-tolerant isolates retained their ability to grow at pH 3.5 with 0.3% bile after the selective pressure was removed and reapplied. Isolates varied from their parents for stability in freezing, lactose utilization, protease activity, aminopeptidase activity, plasmid profile, and cell-wall fatty acid profile. These data suggest that the isolated acid- and bile-tolerant isolates possess growth advantages over that of the parents under stress conditions and may be considered as candidates for probiotic strains after further characterization with animal models.     

酶法与非酶法磷酸化改性食品蛋白质的研究进展

磷酸化是一种重要的蛋白质修饰改性手段,可以有效改善食物蛋白质的功能性质,如乳化性、溶解性、凝胶性、热稳定性等。蛋白质磷酸化改性方法主要可分为酶法与非酶法两种,其中酶法磷酸化常使用蛋白激酶作为磷酸基团的供体,对蛋白质进行修饰。主要的蛋白激酶包括环磷酸腺苷依赖蛋白激酶(CAMPdPK)和酪蛋白激酶Ⅱ(CK-Ⅱ)。非酶法磷酸化常见的改性试剂主要包括三氯氧磷、焦磷酸钠、三聚磷酸钠和葡萄糖-6-磷酸等。本文对近年来蛋白质磷酸化的有关报道进行了总结归纳,并通过介绍磷酸化蛋白的磷酸键性质、磷酸化肽段及位点的鉴定,阐述了不同磷酸化试剂的反应机制及其对蛋白质构效关系的影响,为通过定向的磷酸化修饰而改善蛋白质特定的功能性质提供了理论依据与参考。