鸡内金酶解物制备工艺优化及抗氧化活性研究

目的：研究鸡内金的最佳酶解工艺条件,并分析其酶解物的氨基酸组成、分子量分布及抗氧化活性。方法：以鸡内金多肽得率、酶解液水解度为指标,采用正交试验优化鸡内金的酶解工艺条件;采用氨基酸分析仪、高效凝胶渗透色谱法测定鸡内金酶解物的氨基酸组成和分子量分布;并考察鸡内金酶解物对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力。结果：鸡内金最佳酶解工艺条件为以中性蛋白酶和碱性蛋白酶共同酶解,酶解温度60 ℃,酶解时间9 h,酶解pH值11,蒸煮时间6 h。该条件下鸡内金多肽得率为75.68%,水解度为14.43%;鸡内金酶解物的必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为58.56%,具有较高的营养价值;鸡内金酶解物相对分子质量＜1 000 Da所占比例为90.2%,易于消化吸收;当鸡内金酶解物质量浓度为1.5 mg/mL时,其对ABTS+自由基的清除率达到94.19%。结论：最佳酶解工艺下,鸡内金多肽得率高达75.68%,具有较好的抗氧化活性。     

不同蛋白酶酶解对蚕豆蛋白生物活性的影响

以青海蚕豆为原料,通过干燥、粉碎、等电点沉淀、冻干等工艺提取蚕豆蛋白,选用酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶对其进行酶解,并以抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标,考察不同蛋白酶酶解对蚕豆蛋白生物活性的影响。结果表明:经蛋白酶酶解后,蚕豆蛋白多肽得率极显著升高;胃蛋白酶处理后的蚕豆蛋白多肽得率达39. 14%;经菠萝蛋白酶和酸性蛋白酶酶解后可以明显增加蚕豆蛋白中氨基酸的种类和含量。菠萝蛋白酶处理后的蚕豆蛋白酶解产物对ABTS自由基的清除率可达90. 53%(质量浓度96μg/mL),对α-葡萄糖苷酶的活性抑制率可达88. 10%(质量浓度48μg/mL);经酸性蛋白酶处理后的蚕豆蛋白酶解产物对DPPH自由基的清除率可达95. 71%(质量浓度96μg/mL)。经蛋白酶酶解后蚕豆蛋白的生物价值得以大幅度提升,具有很好的开发前景。     

牡蛎多肽的酶解工艺及抗氧化活性与相对分子质量分布研究

目的:以牡蛎干肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解法制备牡蛎多肽,研究牡蛎多肽酶解工艺、抗氧化活性和相对分子质量分布。方法:以多肽含量为指标,运用单因素及正交试验优化牡蛎最佳酶解工艺;以1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH·)和羟自由基(·OH)的清除能力为指标,通过与Vc的对照试验研究牡蛎多肽的抗氧化活性;采用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)研究牡蛎多肽的相对分子质量分布。结果:牡蛎的最佳酶解条件为,料水比为1:18、pH值为10.0、温度为55 ℃、加酶量为800 U/g、酶解时间为3 h。在最佳酶解工艺条件下制得的牡蛎多肽,其相对分子质量范围为484～19582 u,多肽得率为46.27%。抗氧化性研究中,Vc在浓度为0.4 mg/mL时,对羟自由基的清除率为88.16%,在其浓度为0.004 mg/mL时,对DPPH·的清除率为76.95%。牡蛎多肽浓度为3 mg/mL时,对羟自由基的清除率为73.89%,在其浓度为5 mg/mL,对DPPH·的清除率为97.81%。结论:所确立的碱性蛋白酶最佳酶解工艺能较好地酶解牡蛎中的蛋白质,使其转化为具有良好的抗氧化活性小分子多肽。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性研究

目的:研究木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物的抗氧化特性.方法:测定不同酶解时间下的酶解液的抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性.结果:在酶用量6 000 U/g 底物、底物质量分数3%、pH7.5、温度55℃的酶解条件下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,0H·清除率55.43%,O2-·清除率64.23%,DPPH·清除率79.32%,总抗氧化能力98.74%单位/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照,木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子质量主要集中在1321～607 Da,该分子质量片段活性多肽对0H·的清除率为42.26%,对02-·的清除率为57.33%,对DPPH·清除率为74.43%,总抗氧化能力88.43单位/mL.结论:木瓜蛋白酶酶解核桃粕蛋白210 min时酶解液的抗氧化活性较高,抗氧化活性多肽分子质量主要集中在1 321～607 Da之间.     

响应面试验优化酶法制备辣木籽多肽工艺及其抑菌活性分析

以辣木籽蛋白粉为原料,首先筛选蛋白水解效果较佳的蛋白酶,其次考察酶添加量(酶底质量百分比)、料液比、酶解温度及酶解时间对蛋白水解度和肽得率的影响,并结合响应面法优化辣木籽多肽制备工艺,最后研究该酶解产物的抑菌活性。实验结果表明,碱性蛋白酶具有较好的蛋白水解度,酶法制备辣木籽多肽的最佳工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.50%、pH9.0、料液比1:30(g/mL)、酶解温度62.50℃、酶解时间143 min,在此条件下肽得率实际值为(84.43±2.31)%、蛋白水解度为(20.69±0.46)%。该辣木籽蛋白酶解产物对单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌等4种致病菌株均有抑制作用,最小抑菌浓度依次为3.00 mg/mL、0.75 mg/mL、0.38 mg/mL、0.75 mg/mL,对培养至4.5 h后的金黄色葡萄球菌呈现较好抑制效果。     

羊骨多肽酶法制备工艺优化及抗氧化活性研究

以羊骨粉为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备具有抗氧化活性的酶解多肽液。以水解度为指标,优化了羊骨多肽酶法制备工艺条件,并对酶解液的抗氧化能力进行了测定。结果表明,碱性蛋白酶制备羊骨多肽的最佳制备工艺条件为酶解时间5 h,酶解温度45 ℃,加酶量8 200 U/g,酶解pH值10,该条件下羊骨粉的水解度为(28.36±0.02)%。羊骨粉酶解液与对照组(未被碱性蛋白酶酶解的羊骨粉溶液)的抗氧化能力均随着溶液浓度的增加而上升,当酶解液浓度达到2.5 mg/mL时对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率和还原力均达最大值,分别为(65.42±0.11)%,(82.30±0.27)%,(79.83±0.22)%,0.484±0.007,显著高于对照组(P＜0.05)。说明碱性蛋白酶水解羊骨粉得到的酶解多肽液具有体外抗氧化活性。     

低苦味花生多肽的制备

以花生分离蛋白为原料,研究复合酶协同酶解法制备低苦味花生多肽的最佳条件,并分析其体外抗氧化活性。根据单因素实验的结果,筛选出低苦味花生多肽的最佳水解条件,并通过测定清除DPPH、ABTS+自由基的能力来评价其抗氧化活性。结果表明,复合蛋白酶协同酶解花生分离蛋白的最佳反应条件为:使用碱性蛋白酶(pH8.5,温度55℃,时间4 h)、蛋白酶P(pH7.0,温度50℃,时间3 h)和风味酶(pH7.0,温度50℃,时间2 h)依次分步酶解花生分离蛋白,三种酶添加量分别为0.8%、0.4%和0.2%。此工艺下,酶解液苦味值为1.3,多肽得率为86.75%,相对分子质量低于1 kDa的多肽含量达85.93%。酶解液质量浓度为4 mg/mL时,对DPPH自由基和ABTS+自由基清除率分别为80.70%和87.92%,表明花生粗多肽抗氧化活性较好。     

南方刺参性腺多肽酶解工艺优化及抗氧化活性分析

研究南方养殖刺参性腺多肽的酶解提取条件,并分析南北刺参性腺多肽抗氧化活性。选用复合蛋白酶对刺参性腺进行水解,以酶解多肽得率为指标,选取酶解温度、底物浓度、pH、酶解时间、酶用量等为主要影响因素,在单因素实验基础上应用响应面分析法对以上5个因子进行优化,确定刺参性腺多肽酶解工艺。试验结果表明,刺参性腺多肽酶解最佳条件:温度为56 ℃,底物浓度11.5%,酶添加量0.5 mKat/g,pH7.1,酶解时间4.5 h,此时刺参性腺多肽得率可达到67.97%±0.96%,与预测值相差0.26%。抗氧化试验结果表明,刺参性腺多肽浓度在40 mg/mL时,羟自由基抑制率与超氧自由基抑制率均大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,60 mg/mL刺参性腺多肽的FRAP值大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,南、北方养殖刺参性腺酶解多肽的抗氧化能力无显著差异。     

皮蛋清抗氧化肽制备工艺优化及体外抗氧化性

以清料法腌制成熟的皮蛋清为原料,在单因素实验基础上,以物料比（皮蛋清与蒸馏水质量比）、酶解时间和酶添加量为考察因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,利用响应面试验优化设计得出皮蛋清抗氧化性多肽制备的最佳工艺参数:物料比1:10.4 g/mL、酶解时间4.1 h、酶添加量0.57%,该条件下的水解度为11.23%,DPPH自由基清除率为89.76%,最佳工艺下的酶解液具备一定的抗氧化性。当酶解液浓度为10.4 mg/mL时还原力、超氧阴离子自由基（O₂?·）清除率和羟基自由基（·OH）清除率分别为0.599、66.78%和79.63%。