酶解琼胶制备活性寡糖的工艺条件研究

考察了温度、振荡转速、体系pH、NaCl 和底物浓度对酶解琼胶产生还原糖浓度的影响,以选 择最佳的酶解条件,提高制备寡糖的得率． 结果表明,来源于海洋细菌玫瑰杆菌( Roseobacter sp． ) HS519-211 菌株的琼胶酶,其水解琼胶制备寡糖的最佳条件是: 以pH 7． 0 的磷酸缓冲液为酶解反 应体系,3 g /L 的溶解态琼胶为底物,在45 ℃,200 r /min 振荡条件下酶解反应120 min,可产生还原 糖的质量浓度达476． 9 mg /L,较优化前的299． 2 mg /L 提高了59． 4%．     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacterium sp．OU01进行发酵,制得粗酶液（壳聚糖酶和伊肛氨基葡萄糖苷酶混合液）,采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳PH为5．6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0％,加酶量15mL（49．51U／mL）,固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L,CaCl。质量浓度15g／L,加酶量为1mL（50．35U／mL）／5mL质量浓度10g／L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

土壤中淀粉酶产生菌的筛选及产酶条件优化

为筛选淀粉酶的高产菌株,利用淀粉水解圈作为筛选模型,从淀粉厂附近土壤中筛选得到产淀粉酶能力较强的细菌B5.对其产酶条件进行优化,最终得到最佳碳源为质量分数为2.0%的淀粉,最佳氮源为质量分数为0.5%的酵母膏加质量分数为0.5%的蛋白胨,最适初始pH值为6.0,最适培养温度为37℃,最适溶氧量为50 mL摇瓶装15 mL培养基,最佳产酶时间为48 h,培养基中同时补充质量分数为0.05%的MgSO4、质量分数为0.05%的CaCl2和质量分数为0.005%的FeSO4时可大幅提高酶活力.菌株B5液体发酵产酶活力最高可达158.89 U/g,该淀粉酶最适反应温度为42℃,最适反应pH值为5.0.     

黄原胶液化酶的反应条件

XT11菌种经过发酵能够产生黄原胶液化酶,该酶能够分解黄原胶生成寡糖。实验结果说明,黄原胶液化酶的最适温度为40℃,以磷酸盐缓冲液为最佳缓冲液的酶反应的最适pH值为6.0;酶反应最适底物质量浓度为3 g/L,Km=1.68,Vmax=0.203 7 g.mL-1.min-1。Ca2+在浓度较低时对黄原胶液化酶有激活作用,而其他离子在10和30 mmol/L时对黄原胶液化酶有不同程度的抑制作用,并且Fe3+和Cr3+的抑制作用表现最为突出。     

黄原胶液化酶的反应条件

XT11菌种经过发酵能够产生黄原胶液化酶,该酶能够分解黄原胶生成寡糖。实验结果说明,黄原胶液化酶的最适温度为40℃,以磷酸盐缓冲液为最佳缓冲液的酶反应的最适pH值为6.0;酶反应最适底物质量浓度为3 g/L,Km=1.68,Vmax=0.203 7 g.mL-1·min^-1。Ca^2＋在浓度较低时对黄原胶液化酶有激活作用,而其他离子在10和30 mmol/L时对黄原胶液化酶有不同程度的抑制作用,并且Fe^3＋和Cr^3＋的抑制作用表现最为突出。     

白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶(PSGaseⅡ)进行分离纯化,得到电泳纯酶蛋白,对其酶学性质以及该酶对底物的催化反应过程进行了研究。结果表明,该酶蛋白的分子质量为56ku,最适反应pH为4.0,在pH 3.0~7.0酶活力稳定;最适反应温度为40℃,在20~40℃酶活力稳定;金属离子Na~+、K~+、Mg~(2+)对酶反应无显著影响,而Fe~(3+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对其有较强的抑制作用。酶反应动力学参数K_m为19.60mmol/L,v_(max)为21.60mmol/(L·h)。PSGaseⅡ对白头翁皂苷PSⅠ的催化反应过程结果表明反应是分步进行的,PSGaseⅡ以白头翁皂苷PSⅠ为底物,先催化降解为中间产物白头翁皂苷PSⅡ,继续催化反应,最终生成白头翁皂苷A。