多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157

以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。     

大肠杆菌志贺毒素基因进化分析

对现有的NCBIGenBank数据库大肠杆菌志贺毒素基因序列分子进化开展研究。采用邻位相连法构建进化树,并结合大肠杆菌菌株采集年代、采集地点、宿主类型等流行病学信息,分析大肠杆菌致病菌的流行规律,为预防、控制和检测大肠杆菌致病菌提供理论支持。     

出血性大肠杆菌O157:H7破碎方法的比较

为更有效和便捷的提取出血性大肠杆菌O157:H7的非洲绿猴肾细胞(vero)毒素,比较了超声破碎法,多粘菌素法和反复冻溶法破碎细菌对毒素释放的效果,结果表明,超声破碎法破碎完全,毒素释放最多,多粘菌素法快速方便,也可使毒素大量释放,冻溶法破碎不完全,释放毒素最少。     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

食品中大肠杆菌O157:H7的选择性培养与检测方法研究

为检测食品中的大肠杆菌O157:H7,初步研究了此菌在选择性培养基SMAC、CR-SMAC上的菌落形态,并结合大肠杆菌O157:H7的生理生化特性以及血清学凝集实验对其做了进一步检测,建立了对大肠杆菌O157:H7的选择性培养检测方法.用此法对模拟牛奶样品进行检测,判断检出限为4 cfu/mL.     

乳品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立

建立同时快速检测乳品中检出率较高的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属(原阪崎肠杆菌)4种食源性致病菌的四重PCR方法。采用针对沙门氏菌omp C基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、克罗诺杆菌属gyr B基因特异性引物,建立并优化多重PCR体系,检测特异性和灵敏度,并用建立的体系检测实际样品。该体系具有特异性,对混合模板中沙门氏菌模板的灵敏度达10-6 ng/μL,单核细胞增生李斯特菌、克罗诺杆菌属的灵敏度达10-3 ng/μL,金黄色葡萄球菌的灵敏度达10-2 ng/μL。可有效检出经过增菌后初始菌浓度为1 CFU/m L的4种菌。本多重PCR方法能够特异、高效、准确地检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属4种食源性致病菌。     

快速实时荧光定量PCR检测猪繁殖与呼吸综合症病毒方法的建立

为建立一种快速准确检测猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)的基于TaqMan实时荧光定量PCR方法,根据猪繁殖与呼吸综合症病毒的ORF7保守序列分别设计引物和TaqMan探针,在常规PCR的基础上,设计并优化基于TaqMan探针的荧光定量PCR检测PRRSV的方法。结果表明本研究建立的基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR体系相关系数大于99%,扩增效率为97%,具有良好的线性关系。利用建立的方法检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒(JEV),结果均为阴性,说明此方法具有较好的特异性。灵敏度试验表明该方法检测极限为5copies/μL;应用建立的方法对58份血清样本和60份组织样本进行检测,共检测出14份阳性血清和10份阳性组织。这些结果表明本研究建立的基于TaqMan探针的PRRSV实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、灵敏度、重复性,可为临床检测PRRSV提供更高效的技术平台。     

基于自组装及纳米磁球放大的大肠杆菌 O157:H7的压电免疫检测

应用压电免疫传感器快速检测了大肠杆菌O157:H7(E. coli O157:H7).将巯基乙酸(MACA)自组装在AT切向的压电金电极上,以N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为反应介质,形成酰氨键固定大肠杆菌抗体.并通过α-甲基丙烯酸(MAA)把抗体修饰在纳米磁球上,采用夹心法将抗原夹在两个抗体间,压电石英晶体交流阻抗(PQCI)和循环伏安法对修饰过程进行了表征,抗原浓度与形成夹心复合物前后的PQCI振动频移相关.其免疫传感器能在3h内检测2×103～8×108 CFU/mL范围内的目标细菌,106CFU/mL情况下重复性实验的RSD在7%以下.     

条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR检测方法的构建

以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线显示单特异峰,Tm分别为88.5和85℃。两基因标准曲线的斜率分别为-3.307和-3.308,扩增效率都约为100.6%,Ct值在13～32范围内有良好的线性关系。构建的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,准确可靠、重复性好,检测周期短,为进一步研究HSP90基因在胁迫下的表达差异奠定了基础。     

嗜水气单胞菌RPA-LFS快速检测方法的建立

根据嗜水气单胞菌的气溶素(aerolysin,aerA)基因设计了特异性引物和探针,基于重组酶聚合酶扩增结合侧向流试纸条(RPA-LFS),建立了嗜水气单胞菌的快速检测方法.结果显示:建立的嗜水气单胞菌RPA-LFS检测方法在37℃孵育20 min即可完成;与其他水产养殖与食品安全致病菌无交叉反应;检测限为单次反应10 CFU.结果表明,建立的RPA-LFS检测嗜水气单胞菌的方法具有快速、特异、灵敏等优点,不依赖精密仪器,适用于实验资源有限的嗜水气单胞菌现场检测.     

宽带E/O及O/E模块

本文叙述了宽带 E/O 及 O/E 模块的研制,使用1.3μm 长波长激光器管芯与驱动电路集成在一起的方法组成 E/O,频带宽度为1.5 GHz,最大出光功率为-7dBm.使用 PIN 管芯与砷化镓 FET 管芯混合集成在一块硅晶片上组成 O/E,频带宽度为1.45 GHz,增益为20 dB.     

邻硝基氯苯相转移O-甲基化反应动力学研究

以邻硝基氯苯在相转移催化剂作用下Ｏ－甲基化反应为例，在一定条件下探讨了相转移催化机理及动力学方程     

CN-Fe-H_2O系与S-Fe-H_2O系电位-pH平衡图

较详尽地介绍了CN-Fe-H_2O与S-Fe-H_2O两个三组元电位-pH平衡图的制作方法,并讨论了这些平衡图所提供的热力学信息。可供用以解决相应体系中的实际问题。     

三元稀土固体超强酸催化剂S_2O_8~(2-)/Nd_2O_3-ZrO_2-Al_2O_3的制备与表征

通过正交试验优化了三元稀土固体超强酸催化剂S2O2-8/Nd2O3-ZrO2-Al2O3的制备条件,最优条件为:陈化温度为-15℃,浸渍液浓度为1.5mol/L,焙烧温度为500℃.经过红外光谱法、X射线衍射法、透射电镜法对制备的催化剂进行了表征,结果表明:SO2-4与催化剂表面形成的是桥式双配位,而且拥有高催化性能;催化剂表面还呈现晶态结构,确定为表面催化;该催化剂其平均粒径小于17nm,处于纳米尺度.     

浅析控制砖混结构开裂的问题

目前砖混结构开裂最多的位置是首层窗台部位． 按照锅底形沉降的规律,指出不宜在设计中将外墙下基础的地基承载能力设计值取得相对保守,与此相反,应该相对紧扣其地基承载能力来设计, 另外再采取措施来控制窗台下墙壁体裂缝的出现,这样才是合理的设计． 同时还对目前勘察资料的要求提出了自己的看法     

O,O\|二乙基硫代磷酰氯高温合成工艺

研究了一种合成高质量O,O\|二乙基硫代磷酰氯的新方法.该方法以五硫化二磷为起始原料,经过酯化、氯化和水解制成O,O\|二乙基硫代磷酰氯.研究结果表明:反应总收率905%,含量992%,该工艺为对环境友好的绿色化学工艺.     

Mb-Collagen 薄膜电极对 O2,H2O2 的电化学催化

用循环伏安法研究了肌红蛋白 (Mb) 在胶原蛋白(Collagen) 薄膜电极的电化学行为. 研究表明, 胶原蛋白具有一定的生物适应性, 提供了适合于肌红蛋白与石墨电极之间进行直接电子转移的微环境. Mb-Collagen 薄膜的循环伏安峰出现在 -0.35 V (vs. SCE) 左右, 为 Mb Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ) 电对的特征峰. H2O2,O2 是许多氧化酶催化反应的产物, 具有一定的生物意义. Mb-Collagen 薄膜可用于对 H2O2 和 O2 的电化学催化还原, 使它们的还原过电位显著降低, 显示了该体系在构筑新型的基于蛋白质直接电化学的生物传感器方面具有潜在的应用价值.     

P2O5-B2O3-R2O-MO-Al2O3系统玻璃物化性质的研究

以Yb^3 -Er^3 共掺的P2O5-B2O3-R2O-MO-Al2O3(R=Li，Na，K；M=Zn，Ca，Sr，Ba)系统玻璃为研究对象，分别分析了改变B2O3，的含量，以及加入不同种类的碱金属和碱土金属氧化物对玻璃的物理化学性质的影响。研究结果表明，当B2O3的含量增加，玻璃的Tg，Tf上升，热膨胀系数下降；随着修饰体阳离子半径减小，玻璃的溶解速率下降，化学稳定性变好。     

Morphological evolution of Nb2O5 in a solvothermal reaction: From Nb2O5 grains to Nb2O5 nanorods and hexagonal Nb2O5 nanoplatelets

Novel Nb₂O₅ nanorods and polygonal Nb₂O₅ platelets were generated by a simple solvothermal technique. The geometry evolution of the resultant Nb₂O₅ from amorphous nanoparticles to crystallized particles, from polygonal platelets to well-elongated nanorods was been studied in detail. The processing parameters, including the reaction temperature, reaction time, concentration of the precursors, and pH value of the solution, which affect the shape and size of the nanorods, were investigated. The Nb₂O₅ nanorods with different aspect ratios were examined by XRD, SEM and TEM. The experimental results show that Nb₂O₅ nanorod is the orthorhombic structure and well-crystallized. The growth of the nanorods follows their [001] direction. The successful generation of high quality Nb₂O₅ nanorods is not only important for transition metal oxide research, but also potentially important for further formation of new Nb-based 1-D nanostructures, such as NbS₂ and NbN. Funded by the International Cooperation Project of Hubei Province (2006 CA014)