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乳酪蛋白源ACE抑制肽的分离纯化 总被引:8,自引:0,他引:8
本研究以酪蛋白为原料,采用微生物蛋白酶A水解,其酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的活性有较强的抑制作用(水解度17.4%)。采用DA201-C型大孔树脂脱盐,样品脱盐率达到85%以上,ACE抑制率提高一倍,并用SephadexG-15(层析柱规格1.6cm×85cmI.D.)对脱盐后产物分离纯化,洗脱液为0.02moL/L醋酸缓冲液;反相高效液相色谱(色谱柱μBondapakC183.9mm×300mmI.D.和μBondapakC1819mm×300mmI.D.)在以流动相A梯度洗脱的条件下对产物进一步分离纯化,经纯度分析最终得到单一纯品,其体外ACE抑制率达到84.4%和79.6%。 相似文献
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小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离纯化研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨和研究小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离提纯方法、技术参数及分离效果,首先采用超滤、纳滤膜技术将谷朊蛋白水解液按照相对分子质量的不同进行分离纯化,采用高效液相色谱法和SHR大鼠实验检ACE抑制抑制效果,并对高抑制活性的组分采用凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)进一步分离纯化。结果显示膜过滤和凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)能够有效分离和纯化谷朊蛋白抑制肽,IC50由0.125mg/mL降低到0.106mg/mL。一次性灌胃SHR大鼠一星期后动脉血压降低(8.86±2.23)mmHg,证明谷朊蛋白抑制肽经过分离纯化后具有良好的降血压效果。 相似文献
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将波纹巴菲蛤酶解液经过凝胶层析柱(Sephadex G-15)分离收集到4个活性成分,活性最强的ACE抑制率达84.18%(0.5 mg/mL)。将组分4经过离子交换层析柱(SP Sephadex C-25)分离,并收集的高活性成分在可溶性蛋白为0.132 mg/mL ACE抑制率达到46.03%。最后将先后经过凝胶层析柱和离子交换层析柱收集到的ACE抑制率较高的组分通过反向高效液相色谱分析,出现2个洗脱峰,表明分离纯化效果良好。 相似文献
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目的:开发大鳞副泥鳅的ACE抑制肽。方法:采用超滤、葡聚糖凝胶(Sephadex G-15)和半制备型高效液相色谱等多种技术,从大鳞副泥鳅蛋白酶解产物中分离纯化制备了高活性的ACE抑制肽,并利用高效液相色谱质谱—串联质谱对其结构进行解析;利用抑制动力学分析纯化后ACE抑制肽的抑制模式。结果:高活性ACE抑制肽的氨基酸序列为Glu-Gly-His,相对分子质量345.2 Da, IC50值为(17.89±3.28)μg/mL,纯化倍数为27.47。结论:大鳞副泥鳅抑制肽是一种竞争性的ACE抑制肽。 相似文献
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为研究酶解红松仁清蛋白中具有血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性短肽的组分及其序列,采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15及反相高效液相色谱对松仁清蛋白酶解液进行分离纯化,对纯化后样品(组分D2)进行质谱结构鉴定。质谱结果进行从头测序,筛选得到ACE抑制肽Tyr-Leu-Leu-Lys(YLLK),分子质量为535.34 D。该肽经固相合成纯度为99.80%,其半数抑制浓度测定值为0.282 5 μmol/L。 相似文献
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采用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对酪蛋白进行双酶水解,制备ACE抑制肽。水解物经截留分子质量6ku的超滤膜初步分离,再通过Sephadex G-15进一步纯化,体外测定各分离产物ACE活性的半数抑制质量浓度(IC50值)。纯化得到的各组分经毛细管电泳分析肽谱、Q-TOF LC/MS检测分子质量范围。结果显示:双酶水解产物IC50值为560μg/mL,超滤流出物IC50值为250μg/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分Ⅰ的IC50值为123.41μg/mL,含有19个肽段;组分Ⅱ的IC50值为66.67μg/mL,含有14个肽段;组分Ⅲ的IC50值为64.29μg/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得纯化组分的分子质量范围为400~800u。 相似文献
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《食品与发酵工业》2017,(6):163-168
利用碱溶酸沉法从魔芋飞粉中提取魔芋蛋白,以魔芋蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备魔芋ACE抑制肽粗品;其粗品通过超滤法除去大分子杂质,再经过Sephadex G-15柱层析分离,最后经过RP-HPLC纯化后得到纯度较高的魔芋ACE抑制肽,并且对超滤膜进行选择、Sephadex G-15柱层析分离进行条件优化;以马尿酸含量为指标,紫外分光光度法测其活性。实验结果表明:选择规格为1 kDa超滤膜;Sephadex G-15最佳分离条件为浓度为120 mg/mL、流速为0.8 mL/min、上样量为1.0 mL;经过RP-HPLC纯化后得到魔芋ACE抑制肽抑制率可达到92.85%。空白液中Hip含量为22.50 mg,反应液中Hip含量为9.22 mg,说明魔芋ACE抑制肽抑制活性较好。 相似文献
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《中国食品学报》2017,(9)
模拟移动床(Simulated Moving Bed,SMB)色谱多被用于二元糖混合物、二甲苯异构体等化学成分的大批量分离。本文采用SMB技术产业化分离具有较高血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的绿豆肽。以ACE抑制活性和收率为指标,分析SMB系统中不同操作参数对产业化分离绿豆肽效率的影响,并采用二维纳升液质谱联用技术(2D-nano LC-MS/MS)分析高活性绿豆ACE抑制肽的氨基酸序列。结果表明:采用SMB技术可实现高活性绿豆ACE抑制肽的产业化分离。通过调整各区流速提高产品的活性和收率。在进样流速9 m L/min,水洗脱1流速19 m L/min,醇洗脱流速11 m L/min,水洗脱2流速19 m L/min条件下,分离得到的绿豆肽ACE抑制率为95.32%,其收率86%。将分离的高活性绿豆ACE抑制肽进行质谱分析,得出其氨基酸序列分别为Phe-LeuVal-Asn-Arg-Ile(885.1 u)、Phe-Leu-Val-Asn-Pro-Asp-Asp(961.06 u)、Lys-Asp-Asn-Val-Ile-Ser-GluLeu(1 043.13 u)。 相似文献
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比较6种大孔树脂对苋籽ACE抑制肽的吸附-解吸效果,从中筛选出合适该活性肽分离纯化的树脂,并对其吸附-解吸工艺进行优化。结果表明,DA201-C树脂最适合苋籽ACE抑制肽的纯化,在样品质量浓度10mg/mL,pH为5,上样量1BV,流速6mL/min时,树脂的吸附效果最佳,吸附率达83.69%,再用5BV体积分数75%乙醇,以5mL/min的流速进行洗脱,此时几乎把吸附的多肽全部洗脱下来,解吸率为98.69%。经树脂纯化,样品的蛋白纯度为89.47%,脱盐率为88.86%,短肽含量提高了20.96%,ACE抑制活性提高了27.91%。 相似文献
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为了考察玉米低聚肽中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的活性和结构,以玉米黄粉为原料,采用两步酶解法制备出玉米低聚肽,在对其基础理化成分进行分析的基础上,测定其总抗氧化活性。结果表明,玉米低聚肽中总蛋白质含量为92.15%±5.26%,酸溶蛋白质含量为87.57%±5.98%,脂肪含量为0.06%±0.01%,灰分含量为3.12%±0.38%,水分含量为3.54%±0.29%。玉米低聚肽的ACI抑制活性为0.55±0.03 mg/mL。利用反相高效液相色谱对玉米低聚肽进行分离纯化,选择ACE抑制活性最高的组分峰,利用质谱仪测定肽段序列,鉴定出4个ACE抑制肽段:AY、SAP、NAP、VNAP, IC50值分别为0.036±0.005, 0.039±0.004, 0.112±0.010和0.205±0.018 mg/mL,大约是玉米低聚肽的15.3, 14.1, 4.9和2.7倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。 相似文献