酶法制备东北林蛙皮胶原多肽及体外抗氧化活性

目的:研究东北林蛙皮胶原多肽的酶法制备工艺和其体外抗氧化活性。方法:首先对6种蛋白酶进行筛选,确定试验用蛋白酶,然后用正交试验的方法对最适蛋白酶的水解条件进行优化,最后用2种体系(超氧阴离子和DPPH法)评价最适工艺条件下提取的林蛙皮胶原多肽的抗氧化活性,并用凝胶层析法测定林蛙皮胶原多肽的相对分子质量分布。结果:以水解度为指标,确定碱性蛋白酶最为最适蛋白酶,其水解林蛙皮胶原蛋白的最佳工艺为水解时间5 h、底物浓度6%、酶与底物比(E/S)15%;林蛙皮胶原多肽对O_2~-和DPPH自由基都有很强的清除活性,IC_(50)分别为1.022 mg/mL和0.041 mg/mL;林蛙皮胶原多肽相对分子质量变异很大,大多集中在(1000~5000)u之间。结论:碱性蛋白酶水解林蛙皮胶原蛋白后得到的林蛙皮胶原多肽具有很强的抗氧化活性,值得深入研究和开发。     

正交试验优化胶原多肽螯合钙的制备工艺

以胶原多肽及氯化钙为原料制备胶原多肽螯合钙并确定其最佳制备工艺,结果表明：胶原多肽螯合钙最适的螯合条件为钙元素和胶原多肽的质量比为13:100、pH6.0、时间30min、温度30℃。在该最佳螯合条件下得到的胶原多肽螯合钙的螯合率达到77.7mg/g。傅里叶变换红外光谱分析结果表明胶原多肽螯合钙是一种新的物质,后期的动物实验也证明了胶原多肽螯合钙具有增加骨密度的功能。     

复合酶解带鱼蛋白制备亚铁螯合多肽的工艺优化

以带鱼下脚料蛋白为原料,以水解度及亚铁螯合率为考察指标,采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶进行单一酶解筛选试验,然后进行复合酶解试验.采用二次正交旋转组合设计,以水解度及亚铁螯合率为指标,研究酶制剂种类、加酶方式、复合酶比例、总加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备亚铁螯合多肽工艺的影响.综合考虑水解度和螯合率因素,最终确定复合酶解带鱼蛋白制备亚铁螯合多肽的最佳工艺条件为:总加酶量22 000 U/g,并以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活力配比4:6先后加入;酶解时间为碱性蛋白酶9h、木瓜蛋白酶8 h;pH值为碱性蛋白酶8.0、木瓜蛋白酶6.0;酶解温度为45℃.该条件下制备的带鱼蛋白亚铁螯合多肽产物水解度和螯合率分别为52.22％、82.31％.     

金枪鱼骨胶原多肽螯合钙的制备

以金枪鱼下脚料鱼骨为原料,对鱼骨进行酶解获得鱼骨胶原多肽,最终与氯化钙螯合制备螯合钙。以多肽浓度为指标探讨鱼骨粉酶解的酶解工艺,并以螯合率为指标探讨螯合工艺。最终确定的最佳酶解条件为:胰蛋白酶与风味蛋白酶2∶1复合、p H 7.0、60℃。此时酶解所得胶原多肽含量最高。最佳螯合条件为:pH 6.0、55℃、40min、质量比1∶1。此时螯合率最高。该条件下制备的金枪鱼骨胶原螯合肽呈均匀的颗粒状分布,粒径分布范围为0.5～0.7μm,赋予其良好的食品加工特性。     

响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌的制备工艺

以罗非鱼皮胶原多肽(TSP-I)为配位体,采用水合体系法与硫酸锌螯合,制备可用于补锌剂的多肽螯合锌产品。以响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌工艺。结果表明:最佳螯合工艺条件为:反应温度60℃、pH5.3、TSP-I与硫酸锌摩尔比2:1、TSP-I浓度3.4g/100ml水、反应时间40min。在此条件下螯合率理论值为92.57%,验证实际螯合率为92.17%。     

猪皮胶原多肽螯合钙的制备及其结构表征

以猪皮明胶复合酶解胶原多肽和葡萄糖酸钙为原料,多肽钙螯合率为指标,在一定条件下制备多肽螯合钙。通过Plackett-Buiman(PB)和中心组合设计(CCD),考察胶原多肽/水料液比、多肽/葡萄糖酸钙质量比、p H、反应温度、反应时间、搅拌时间、搅拌速度等因素对多肽螯合率的影响。结果表明:通过PB设计筛选出多肽/葡萄糖酸钙质量比、p H和反应时间为多肽钙螯合主要影响因素,经CCD优化确定最佳螯合工艺为多肽/葡萄碳酸钙质量比5.5∶1,p H6.0,反应时间130 min,胶原多肽/水料液比1.5∶100,反应温度60℃,搅拌速度30 r/min,搅拌时间20 min。在此条件下,多肽螯合率达78.3%。采用紫外光谱、红外光谱、扫描电镜、X衍射等手段,研究了猪皮胶原多肽螯合钙的结构,结果表明猪皮胶原多肽与钙形成了螯合物,且胶原多肽的氨基和羧基均与Ca2+发生了螯合反应。     

鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化

为减少水产品加工过程中副产物对环境的污染与资源的浪费、提高水产品的附加值,对鮟鱇鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行优化。以鮟鱇鱼骨为原料,在适宜条件下制备小分子胶原多肽,并与鱼骨钙提取液进行螯合,制成胶原多肽螯合钙,分别考察螯合温度、鱼骨胶原多肽与鱼骨浸提液的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因素三水平正交试验,得到鮟鱇鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为螯合温度30℃、时间50 min、鮟鱇鱼鱼骨胶原多肽与钙浸提液质量比2∶1、pH 6,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为98.00%和21.29%。对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其中,具备典型的胶原多肽氨基酸的含量占总氨基酸含量的17.37%。     

胶原多肽螯合钙螯合工艺研究

试验以螯合率为指标,研究肽钙添加比例、温度、p H和时间四因素对猪皮胶原多肽螯合钙螯合效果的影响。通过设计单因素和正交试验对螯合效果进行优化,得到优化的螯合工艺的主要参数:肽钙比例3︰1、p H 7、温度50℃、螯合时间30 min。并对所制备的胶原多肽螯合钙粉末进行傅立叶红外光谱和紫外吸收定性检测,发现均发生不同程度的峰移动,证明螯合前后胶原多肽-化学结构上发生了一定的变化,确定有新的螯合物生成。     

白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化

为减少淡水鱼加工过程中副产物对环境的污染和资源的浪费、提高淡水鱼的附加值,对白鲢鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行研究。以白鲢鱼骨和氯化钙为原料,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,考察温度、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因子二次正交旋转设计优化,得到鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为温度42 ℃、时间38 min、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比2.1∶1、pH 6.8,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为80.4%和12.1%。对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其总氨基酸含量为61.03%,且具备典型的胶原蛋白氨基酸组成特征。红外光谱扫描和电镜扫描观察表明：钙离子与胶原多肽发生了螯合反应,结合方式有离子结合、配位结合和吸附作用。     

牛骨蛋白分步酶解制取胶原多肽螯合钙的研究

以富含胶原蛋白和有机钙的新鲜牛骨为原料,在采用正交试验确定胃蛋白酶(pepsin)适宜水解条件的基础上,通过添加A1398中性蛋白酶(neutral protease)结合三因素二次旋转试验方法对水解牛骨蛋白制备胶原多肽钙的工艺进行优化。结果表明:先用胃蛋白酶在pH1.5,料液比1∶30,E/S5∶000U/g(蛋白质),温度37℃,酶解3h,再调节pH值至7.5,E/S3000U/g(蛋白质),温度50℃,酶解40min,螯合率最高可达98.36%。     

蚕蛹多肽螯合钙的制备工艺优化及结构表征

利用蚕蛹多肽为原料制备多肽螯合钙,以可溶性钙含量为主要指标,综合考察螯合率和得率,研究了螯合pH、温度、时间以及肽钙比等单因素的影响,并进一步通过响应面优化法对制备工艺进行优化,确定最优的反应条件为反应时间80min、反应温度73℃、pH 10、肽钙质量比3.41.0,该条件下蚕蛹多肽螯合钙的含钙量为14.51%。傅利叶红外光谱分析表明蚕蛹多肽主要通过羧基、胺基和磷酸基团与钙离子结合。     

木瓜蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的研究

以新鲜猪皮为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备胶原多肽,并对影响木瓜蛋白酶水解过程的各个因素进行研究.通过对猪皮水解度的测定,确定木瓜蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的最适pH为5,最适温度为60℃,最适酶量为0.9%,最适底物浓度为30%,水解时间3h.在此水解条件下,水解度达到14.91%.     

中性蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的研究

以新鲜猪皮为原料,利用中性蛋白酶水解法制备胶原多肽, 并对影响中性蛋白酶水解的各个因素进行研究.通过对猪皮水解度的测定,确定中性蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的最适pH为6.5,最适温度45℃,酶用量([EиS])0.5%,底物质量分数15%,水解时间4h,在此水解条件下,水解度达到12.94%.     

胶原多肽制备工艺优化的研究

采用不同测定方法确定明胶等电点为pH4.5～4.6.以明胶为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备胶原多肽并确定最佳工艺条件.结果表明:胶原多肽制备的最适条件为pH7.0.温度60C,明胶浓度6%,加酶量2000u/g,水解时间6h,此时多肽得率为85.38%,水解度为45.87%.傅里叶变换红外光谱分析表明,胶原多肽具有胶原和蛋白多肽的双重特征.     

利用废弃蛋白制备肽钙螯合肥的工艺研究

本文以废旧含铬革屑为原料,以氢氧化钠为水解试剂,制备多肽水解液,探究其在不同条件下的革屑水解率。再利用水解液与钙进行螯合实验,进行肽钙螯合物的制备,选取水解率最佳的水解液,分别以肽钙比、反应时间、反应温度为条件进行单因素试验,探索最佳螯合率。研究表明,NaOH用量为8%、水解温度为80℃、时间为5.5 h、固液比为1∶6时,含铬革屑的水解率最大。当反应时间为30 min,反应温度为60℃,肽钙比为4∶1时,螯合的比例能达到最高。     

牛骨多肽螯合物的制备及结构表征

为生产易被人体高效吸收利用的补钙剂以及提高牛骨的利用率,对实验室自制的牛骨多肽进行钙螯合处理,以螯合率、钙质量分数为考察指标,确定制备方法;采用紫外光谱法、荧光光谱法、红外光谱法、扫描电子显微镜、粒径及稳定性分析比较螯合前后的变化。结果表明:制备肽钙螯合物的最佳条件为肽钙质量比2∶1、温度60℃、时间40 min、pH 8.0。在此条件下,螯合率达到38.97%,钙质量分数为21.29%。对最佳条件下的多肽螯合物进行光谱结构分析,结果表明氨基与羧基参与螯合反应,且二者之间主要发生配位反应;扫描电子显微镜表明螯合后分子发生聚集,结构更加紧密。实验制备的肽钙螯合物,具有潜在保健价值。     

骨胶原蛋白的酶解工艺条件

采用胰蛋白酶酶解骨胶原蛋白制备胶原多肽,通过单因素和响应面试验,以水解度为指标,确定胰蛋白酶酶解胶原蛋白的最佳工艺条件。结果表明：最优工艺条件为pH6.91、反应温度60℃、酶添加量200mg/g 胶原蛋白、底物水平0.1/61.5(g/mL)、水解时间为4h;此条件下的胶原蛋白水解度达到29.36%。酶解后胶原蛋白的溶解性及乳化性均显著提高。     

利用扇贝壳制备胶原螯合钙的研究

为了有效利用废弃扇贝壳,提高贝类加工废弃物的附加值,采用双酶法水解猪皮制得胶原多肽,并利用灰化的扇贝壳制备胶原螯合钙。优化的胶原螯合钙制备条件是:pH8,胶原多肽与氯化钙的比为0.3g∶7mL,反应时间50min。经95%乙醇沉淀得到胶原螯合钙产品。用红外光谱法对胶原螯合钙进行表征,结果表明胶原多肽的氨基和羧基都参与了与Ca2+的配位,找到Ca-N伸缩振动峰,说明经酶水解得到的胶原多肽成功螯合了贝壳中的钙离子,使该产品既具有胶原多肽增加骨胶原韧性的作用又具有补钙的特性。     

酶解法制备鹿茸多肽的研究

研究酶解法制备鹿茸多肽的条件,采用双酶水解的方法制备鹿茸多肽。在相同的条件下,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解鹿茸蛋白。以水解度和多肽得率为指标,确定了胰蛋白酶和复合蛋白酶为最佳酶系组合。通过单因素实验和正交实验得出最佳的酶解工艺条件:温度48℃、pH7.2、底物浓度7.5%、酶与底物浓度比6000U/g,两种酶比例为1:1,水解时间4h。在此条件下用胰蛋白酶和复合蛋白酶对鹿茸蛋白水解,水解度为32.5%,多肽得率为72.8%。     

乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。