大菱鲆鱼肉透明质酸酶的酶学特性研究

以大菱鲆鱼肉为原料,经pH4.7的乙酸-乙酸钠缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、透析后获得鱼肉透明质酸粗酶液,并对其酶学性质进行研究。结果表明:鱼肉透明质酸粗酶的最适pH为4.0,最适反应温度为25℃,在(—3~30)℃具有较高的稳定性,浓度为0.15 mol/L的NaCl可使鱼肉透明质酸酶保持较高活性。金属离子Ca(~(2+))、Mg~(2+)、Zn~(2+)对鱼肉透明质酸酶活性具有促进作用,Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe3+对鱼肉透明质酸酶活性具有抑制作用,抑制剂EDTA、L-半胱氨酸和抗坏血酸在一定浓度范围内可较好地抑制鱼肉透明质酸酶活性。双倒数法绘制米氏动力学曲线确定米氏常数Km为0.132 mg/mL,鱼肉透明质酸酶对不同底物的水解能力依次为HA硫酸软骨素A硫酸软骨素C肝素钠。在4℃条件下贮藏32 d,鱼肉透明质酸酶活性损失率为56.48%。     

大菱鲆鱼皮抗氧化胶原肽的制备及特性分析

以大菱鲆(Scophthalmus maximus)鱼皮为原料制备抗氧化胶原肽。进行了鱼皮酶解的单因素实验、酶解条件的响应面优化、G-15葡聚糖凝胶层析分离及体外抗氧化活性检测。结果表明：大菱鲆鱼皮酶解的最适用酶为中性蛋白酶,最佳工艺条件为：酶解温度52 ℃,酶解时间为338 min,加酶量为1142 U/g,反应体系pH值为6.7。按照此最佳条件制备得到鱼皮酶解液羟自由基清除率为34.44%,与理论值接近。大菱鲆鱼皮胶原肽经过层析分离,得到了3种不同分子质量的多肽组分TSP1、TSP2、TSP3,其中TSP3体外抗氧化活性最好,具有更强的羟自由基清除能力、亚铁离子螯合能力、DPPH自由基清除能力以及还原力。本研究为大菱鲆及其它鱼类多肽的开发研究以及鱼类副产物高值化利用提供了技术参考。     

大蒜植株中蒜氨酸酶的提取及酶学特性研究

本文以大蒜植株中蒜氨酸酶为对象,研究其提取条件及酶学特性。以酶活性为指标,考察了大蒜植株中蒜氨酸酶的提取条件,并通过Km值的测定、热稳定性和pH稳定性等实验研究了蒜氨酸酶的酶学特性。结果表明,提取条件为料液比1:3(g/mL),打浆,离心,提取三次,收集滤液;蒜氨酸酶最大反应速度Vmax=1.05μmol/min,米氏常数Km=2.38 mmol/L。蒜氨酸酶在30℃、pH为6.88条件下比较稳定。     

金鲳鱼鱼皮酶溶性胶原蛋白的提取工艺优化及基本特性

为提高金鲳鱼加工副产物——鱼皮的利用率,本研究在前期单因素实验的基础上,以加酶量、液料比和提取时间三个单因素建立模型,采用响应面法Box-Behnken设计实验,优化了胃蛋白酶法提取金鲳鱼鱼皮酶溶性胶原蛋白（PSC）的提取工艺,并与酸溶性胶原蛋白（ASC）进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、傅里叶变换红外光谱和差示扫描量热仪等基本理化特性的对比研究。结果表明,金鲳鱼鱼皮胶原蛋白的最佳提取工艺为:加酶量1.5%、液料比23∶1 m L/g、酶解时间27.5 h。此条件下通过实验验证得出,金鲳鱼鱼皮胶原蛋白实际提取率为64.68%,与响应面模型理论预测值65.17%基本一致;此外,本实验提取的PSC有较高热变性温度（30.44℃）,与金鲳鱼皮ASC有相似的电泳性质和红外峰型,初步鉴定为I型胶原蛋白。该实验为金鲳鱼鱼皮酶溶性胶原的提取提供了理论参考。      

马面鱼皮胶原蛋白的提取及其特性研究

目的:从马面鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白,并对其理化性质进行研究,为马面鱼皮的开发利用提供一定理论依据。方法:通过氨基酸分析、UV、FTIR及SDS-PAGE凝胶电泳初步探讨了酸溶性胶原蛋白的结构特征;同时对酸溶性胶原蛋白的等电点、热变性温度、热收缩温度及溶解性进行了研究。结果:氨基酸分析发现,马面鱼皮酸溶性胶原蛋白中甘氨酸含量为24.12%,羟脯氨酸含量为9.31%;每1 000个总氨基酸残基中,甘氨酸为349个,羟脯氨酸70个,未检测到色氨酸、半胱氨酸。UV光谱显示酸溶性胶原蛋白在210 nm波长处有最大吸收。FTIR光谱表明酸溶性胶原蛋白有特殊的三螺旋结构。SDS-PAGE显示酸溶性胶原蛋白有2条α链,1条β链和1条γ链;酸溶性胶原蛋白的等电点为5.70,热变性温度和热收缩温度分别为34.99℃和84.59℃。溶解性结果表明酸溶性胶原蛋白易溶于0.5 mol/L乙酸溶液,Na Cl含量1%~3%时溶解性稳定,之后随Na Cl含量增加,溶解性迅速下降。结论:马面鱼皮酸溶性胶原蛋白具有典型的Ⅰ型胶原蛋白特征,热稳定性较好,不同介质和盐含量对酸溶性胶原蛋白溶解度有很大影响。     

猴头菌糠木聚糖酶提取工艺及酶学特性初步研究

利用水浸提法提取猴头菌糠木聚糖酶,选取提取时间、液料比和温度做单因素试验,然后通过正交试验优化猴头菌糠木聚糖酶的提取工艺,并对结果进行了统计分析。结果表明,提取时间、液料比和温度对木聚糖酶提取均有极显著影响,最佳提取条件为温度25℃、时间2.5h、液料比50∶1。猴头菌糠木聚糖酶活力最适pH值为4.8,最适温度为60℃。     

金帅苹果多酚氧化酶提取及部分酶学特性研究

实验确定了从金帅苹果中提取多酚氧化酶(PPO)的最佳条件,研究了该酶的某些特性。确定pH7.4磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(含2%的PVPP和0.25%TritonX100)、料液比1.6mL/g为最优提取参数。金帅苹果PPO酶促反应产物在412nm下有最大吸收峰;以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数为Km=2.6667×10-2mol/L,PPO动力学方程为:V=3333.33犤S犦0.027 犤S犦;该PPO的最适pH为5.0,在pH5.0～6.8范围内有较高的稳定性;最适温度为40℃。     

金帅苹果多酚氧化酶提取及部分酶学特性研究

实验确定了从金帅苹果中提取多酚氧化酶（PPO）的最佳条件,研究了该酶的某些特性。确定pH7.4磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（含2%的PVPP和0.25%TritonX100）、料液比1.6mL/g为最优提取参数。金帅苹果PPO酶促反应产物在412nm下有最大吸收峰;以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数为Km=2.6667×10-2mol/L,PPO动力学方程为:V=3333.33犤S犦0.027+犤S犦;该PPO的最适pH为5.0,在pH5.0～6.8范围内有较高的稳定性;最适温度为40℃。      

鲢鱼鱼皮中酶溶性胶原蛋白提取工艺的研究

以鲢鱼鱼皮为原料,在低于其变性温度下分别对鱼皮中杂蛋白和脂肪的脱除工艺进行了研究,并对鲢鱼鱼皮中酶溶性胶原蛋白的提取工艺参数进行了分析,测定了其热变性温度。结果表明,鲢鱼鱼皮原料中杂蛋白脱除的最佳工艺参数为以0.6 mol·L~(-1)的Na_2CO_3溶液为杂蛋白脱除试剂,在25℃下处理2次,每次6 h;鱼皮原料中脂肪脱除的最佳工艺参数为:采用无水乙醚作为脱脂试剂,在料液比1︰80(g/m L)下处理16 h;鲢鱼鱼皮中酶溶性胶原蛋白提取的最佳工艺条件为胃蛋白酶用量4 000 U·g~(-1),料液比1︰50(g/m L),浸提时间6 h;此胶原蛋白的热变性起始温度为31.80℃,峰值温度为34.54℃。     

海参肠组织蛋白酶D的提取及酶学特性研究

本研究以海参肠为原料,采用p H3.0 50 mmol/L甘氨酸-盐酸缓冲体系,按1∶6（w/v）的料液比,在4℃浸提1 h,获得海参肠组织蛋白酶D的粗酶液。以酸变性牛血红蛋白为底物,进行酶活测定,并研究了该酶的酶学性质。结果表明,海参肠组织蛋白酶D粗酶的最适p H为3.0,在p H3.0⁷.0之间稳定性较好;最适反应温度为50℃,在4⁴0℃具有较高稳定性。5 mmol/L的金属离子Mg²⁺、Ca²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺和K⁺对该酶有激活作用,而Fe³⁺和Fe²⁺则对其有抑制作用。天冬氨酸蛋白酶抑制剂Pepstatin A对该酶活性有较强的抑制作用。上述结果说明,在本研究条件下提取获得的海参肠组织蛋白酶D粗酶是一种酸性蛋白酶,其组成以天冬氨酸蛋白酶为主。      

鱼皮胶原蛋白中透明质酸酶抑制肽的制备工艺优化

目的：高效提取胶原蛋白中的透明质酸酶抑制肽。方法：以剑鱼（Xiphias gladius）鱼皮为原料,使用胃蛋白酶提取酶溶性胶原蛋白并使用盐析法进行纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定胶原蛋白种类;通过单因素和响应面法优化透明质酸酶抑制肽的提取工艺。结果：使用胃蛋白酶提取的胶原蛋白为I型胶原,透明质酸酶抑制性胶原蛋白肽的优化提取条件为复合酶比（m_{胶原蛋白酶}∶m_蛋白酶）8∶2,酶解温度32 ℃,酶解时间6 h,加酶量6%。在此条件下胶原蛋白肽的透明质酸酶抑制率为42.35%,响应面模型拟合性好,透明质酸酶抑制率的预测值与实际值无显著差异（P>0.05）。结论：该工艺可应用于对剑鱼鱼皮中具有透明质酸酶抑制性的胶原蛋白肽的提取。     

蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究

分别采用胰蛋白酶和胃蛋白酶降解蛋壳膜,从中提取透明质酸。通过正交实验考察酶解温度、pH、酶用量、料液比和酶解时间对透明质酸提取量的影响,确定采用胰蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为50℃,时间为7h,料液比为1∶40,酶用量为8000U/g,pH为8.5,提取率为13.294mg/g;采用胃蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为37℃,时间为5h,料液比为1∶40,酶用量为11000U/g,pH为3.0,提取率为24.494mg/g。结果表明,胃蛋白酶提取透明质酸的效果好于胰蛋白酶,且壳膜中含有重要数量的透明质酸。通过红外光谱分析和测定葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖的含量,对提取的透明质酸进行分析鉴定。      

蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究

分别采用胰蛋白酶和胃蛋白酶降解蛋壳膜,从中提取透明质酸.通过正交实验考察酶解温度、pH、酶用量、料液比和酶解时间对透明质酸提取量的影响,确定采用胰蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为50℃,时间为7h,料液比为1:40.酶用量为8000U/g,pH为8.5,提取率为13.294mg/g;采用胃蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为37℃,时间为5h,料液比为1:40,酶用量为11000U/g,pH为3.0,提取率为24.494mg/g.结果表明,胃蛋白酶提取透明质酸的效果好于胰蛋白酶,且壳膜中含有重要数量的透明质酸.通过红外光谱分析和测定葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖的含量,对提取的透明质酸进行分析鉴定.     

米曲霉M3中性蛋白酶的提取及酶学特性研究

采用硫酸铵沉降法分离纯化米曲霉M3所产中性蛋白酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达159781．1μ／g；该酶的最适反应温度为50℃，最适作用pH值为7．5；该酶在30～40℃时具有良好的热稳定性，在pH值6．5—7．5的条件下酶是稳定的；NH4^1 ，K^1 对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe^3 则对其表现出强烈的抑制作用。     

海参体壁粗蛋白酶的提取及酶学性质研究

研究了海参体壁粗蛋白酶的提取方法和酶学性质，最佳提取条件为紫外线下照射30min，硫酸铵饱和度梯度为40％～60％。粗蛋白酶的最适pH值为5．0，最适反应温度为50℃，酶在50℃以下稳定性良好。在pH1．0-7．0范围内，Ca^2＋对酶有激活作用，Mn^2＋、Cu^2＋对酶有抑制作用。提取的海参体壁蛋白酶是一种含有巯基的，类似胰蛋白酶的酶类。     

鮰鱼鱼皮胶原的提取及性质研究

利用醋酸及胃蛋白酶从鮰鱼鱼皮中提取了胶原,并对其物理与化学特性进行了探讨研究。结果表明:提取的胶原属于典型的Ⅰ型胶原,胶原的三股螺旋分子组成为[α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ)。氨基酸组成及变性温度的分析说明提取的鮰鱼皮胶原由于其自身亚氨基酸含量的特征,使得它的稳定性远远高于其他鱼类的皮胶原,但仍然比大多数哺乳类动物皮胶原稳定性要弱。紫外扫描光谱、傅立叶红外光谱及圆二色性研究结果证明提取的胶原三股螺旋结构保持完整。     

大豆过氧化物酶纯化及酶学特性研究

大豆过氧化物酶与辣根过氧化物酶类似,是一种含有血红素的Ⅲ类过氧化物酶.我们从大豆加工副产物大豆皮中,采用精简的三步法提取和纯化大豆过氧化物酶,得到Rz值大于2.0的纯酶.三个纯化步骤分别是硫酸铵分级沉淀、丙酮分级沉淀和DEAE Sepharose离子交换层析.同时分析了温度、pH和常见化合物对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.结果表明,大豆过氧化物酶的温度和pH适用范围很宽,热稳定性、酸碱稳定性很高,并且在含有较高浓度有机溶剂的反应体系中的保持很好的酶活力.有这么优越的酶学特性,又有廉价的大豆皮来源,所以大豆过氧化物酶的产业化和应用前景将非常乐观.     

牛肝脏透明质酸酶提取工艺优化

以牛肝脏为原料,确定分离纯化牛肝脏透明质酸酶的最优条件。实验采用Plackett-Burman设计、最陡爬坡实验、响应面中心旋转组合实验确定的最佳提取条件为:乙酸-乙酸钠浸提液pH4.69,NaCl浓度0.22mol/L,提取时间为10.82h,该条件下牛肝脏透明质酸酶比活力为33.27U/g。采用硫酸铵盐析和SephacrylS-100初步纯化,得到牛肝脏透明质酸酶比活力为452.81U/g。      

莲子β-葡萄糖苷酶提取及酶学性质研究

β-葡萄糖苷酶是植物中醇系香气形成的关键酶类[1-4].在优化β-葡萄糖苷酶提取方法以及活性分析条件的基础上,用pNPG法测定酶活,对莲子中β-葡萄糖苷酶学性质进行初步研究.研究结果表明:氯化钠和亚硫酸钠都可以不同程度地抑制酶活;Vc和L-半胱氨酸盐酸盐在浓度低于8 mmol/L时能略微促进酶活;镁离子在浓度为4.0 mmol/L的时候能较大地促进酶活;在浓度高于6.0 mmol/L的时候,Ap3 、Zn2 能抑制酶活,而Mg2 、Ca2 对酶活几乎无影响.稳定性实验表明:酶在4℃条件下保存15 h,活性仍然能保持在90%以上;在pH5.0～7.0环境下酶活较大且稳定;酶在30～50℃之间热稳定性较好.     

香菇PPO超声辅助法提取工艺 及酶学特性的研究

对超声波辅助浸提法提取香菇中多酚氧化酶的工艺进行研究,并考察香菇中多酚氧化酶的酶学特性,并对3种抑制剂对多酚氧化酶的抑制效果进行比较。结果表明:最优提取工艺为:磷酸缓冲液中添加的PVPP含量为2.0%,超声时间150 s,固液比为3∶5(g/mL);香菇中多酚氧化酶的最适pH值为6.9,最适温度为40℃,选取邻苯二酚为底物时,其最适浓度为0.3 mol/L,3种抑制剂对香菇中多酚氧化酶均有抑制作用,抑制效果为抗坏血酸柠檬酸乳酸,其中抗坏血酸在浓度为2 g/L时,抑制效果为对照组的8.42%。