产蛋白酶、淀粉酶芽孢杆菌的筛选及鉴定

采用酪素平板和可溶性淀粉平板初筛,产酶活力测定复筛,获得一株具有产蛋白酶、淀粉酶复合酶芽胞杆菌菌株CA02003。经酶活力测定,CA02003菌株在36 h时蛋白酶、淀粉酶均达到酶活最高峰,酶活力分别为8 723.16、251.19 U·m L~(-1)。通过形态特征、生理生化特征以及gyr B基因进化分析结果,鉴定为地衣芽孢杆菌。     

鸡肠道枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

为研究和开发动物新型微生态制剂,最大程度的提高经济效益,改变抗生素滥用、药物残留等现状,从健康鸡肠道中分离出1株芽孢杆菌,并命名为W,且对其进行形态观察、生化试验鉴定和16S rRNA序列分析及同源性比较。结果表明,本菌株与Bacillus subtilis strain CICC 10023(GU980947.1)的同源性达99.5%,最终确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该菌株进行药敏试验和安全性试验。结果表明,该菌对青霉素、杆菌肽耐药,对小鼠无致病性。     

鸭源高产L-乳酸凝结芽孢杆菌的分离与鉴定

为了获得高产L-乳酸的凝结芽孢杆菌,从河南省汝州市的肉鸭养殖场采集50份鸭肠道黏液样品。利用分离培养基对细菌进行分离和纯化,用试剂盒检测L-乳酸产量,结合菌落形态、显微形态、生理生化试验和16S r DNA序列鉴定其种属。鉴定结果表明:从50株细菌中分离得到一株高产L-乳酸的菌株BC07,L-乳酸产量为43.2 g/L。经鉴定为凝结芽孢杆菌,能形成芽孢,而且该菌株能够耐受较强的酸、胆盐和高温。     

饲用凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌组合使用对仔猪生长性能影响初探

将28日龄断奶仔猪32头(杜×长×大)分为4个处理组:对照组(抗生素组)、试验组1(凝结芽孢杆菌组)、试验组2(枯草芽孢杆菌组)、试验组3(同时添加凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌组),研究凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌组合使用对仔猪生长性能和饲料养分消化率的影响。试验结果表明,平均日增重指标,试验组1和试验组3差异不显著(P>0.05),均显著高于对照组和试验组2(P<0.05)。料肉比指标,试验组1显著低于其他3个处理组(P<0.05)。试验组1仔猪对饲料的干物质表观消化率与对照组差异不显著(P>0.05),均显著高于试验组2(P<0.05)。试验结果表明,仔猪商业饲料在组合使用多种常规饲用抗生素的基础上,单一添加饲用凝结芽孢杆菌能够进一步改善断奶仔猪的生产性能,然而单一添加枯草芽孢杆菌或凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌组合使用均没有获得显著的正效应。     

芽孢杆菌L15菌株发酵培养条件的优化

芽孢杆菌L15菌株能有效降低刺参Apostichopus japonicas养殖水中的化学耗氧量(COD)和氨氮(NH+4-N)含量,促进刺参生长,为大量发酵培养L15菌株并降低培养成本,以豆粕、麦麸、玉米酒糟、棉籽粕为碳、氮源,对发酵培养L15菌株的最佳碳、氮源及其配比和最佳发酵条件(如装液量、接种量、转速等)进行了初步优化研究。结果表明:培养芽胞杆菌L15菌株的最佳碳、氮源为麦麸和豆粕,最佳添加量分别为3、2 g/L;最佳发酵培养条件为装液量1/3、接种量1%、转速160 r/min;在最佳培养基和最适培养条件下,发酵培养的L15菌株细菌数量可达1011cfu/m L,与用2216E培养基培养的L15菌株相比,在实验室条件下,对海参底泥COD的去除率虽无明显变化,但培养成本却降低了91%。研究表明,用豆泊和麦麸作为培养基培养L15菌株具有可行性,不仅细菌数量达标,且培养成本显著降低。     

纺锤芽孢杆菌降解水中萘的特性研究

从处理石油废水的曝气池污泥中筛选、分离到一株能有效降解萘的菌株,经鉴定为纺锤芽孢杆菌(BFN),研究了其对水中萘的降解特性。结果表明:在温度为30℃、自然pH(6.68～6.76)、接种量为0.2%、(NH4)2SO4浓度为0.15g/L的最适降解条件下,BFN对萘(初始浓度为50mg/L)的降解率在96h内达到99.8%;BFN还具有较好的耐盐度,对高浓度的萘也有较好的耐受性。BFN对萘的降解过程符合一级反应动力学。通过检测不同底物水样的吸光度、pH和底物浓度的变化,发现BFN还能降解苯甲酸、水杨酸、邻苯二甲酸、甲苯、苯酚以及1-萘酚。     

固定化芽孢杆菌修复油污染地表水的研究

采用改进的聚乙烯醇-硼酸包埋固定化微生物法固定芽孢杆菌，并用于处理油污染地表水。结果表明，固定化芽孢杆菌对地表水中油和COD的去除能力均大于游离茵，作用120h后固定化芽孢杆菌对油的去除率为80．1％，对COD的去除率为79．4％；游离菌对油的去除率为50．4％，对COD的去除率为66．5％。采用改进的聚乙烯醇-硼酸法制得的固定化颗粒机械强度高、传质性能好、水溶膨胀性小，扫描电子显微镜观察表明，改进后的聚乙烯醇凝胶微观结构更适合芽孢杆菌生长。可见，采用微生物固定化技术修复油污染地表水是可行的。     

一株短小芽孢杆菌的16S rDNA基因序列分析

从黄颡鱼中分离得到一株优势菌BP-1,经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA基因序列分析,表明该菌为发酵型,能运动,革兰氏阳性杆菌.获得的16S rDNA基因序列长度为1478 bp,Gen Bank数据库中登录号为KP299290.该序列与GenBank数据库中多条短小芽孢杆菌16S rDNA基因序列相似性高达99%,系统进化树上与短小芽孢杆菌亲缘关系最近,从而判定菌株BP-1为短小芽孢杆菌.这为短小芽孢杆菌的鉴定和分类提供科学依据.     

16S rDNA与gyrB序列联合法鉴定一株蜡样芽孢杆菌

以从凝结芽孢杆菌活菌片中分离得到的一株YSSNJ-005菌株为目的菌株,经16S r DNA与gyr B序列联合法对其精确鉴定。研究结果表明:经过16S r DNA序列分析,初步判定菌株YSSNJ-005属芽孢杆菌属。由gyr B基因序列同源性分析及构建系统发育树对菌株YSSNJ-005继续鉴定。BLAST在线对比可知:菌株YSSNJ-005为芽孢杆菌属,且与蜡样芽孢杆菌标准菌株Bacillus cereus ATCC14579基因序列同源性达100%,可精确断定菌株YSSNJ-005是蜡样芽孢杆菌。     

枯草芽孢杆菌B504菌株形态学及生理生化性状研究

目前,生防细菌中应用较多的主要有:芽孢杆菌、假单胞杆菌、土壤放射杆菌等。其中,芽孢杆菌因其能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子,是研究较多的一类生防细菌,是理想的生防菌筛选对象。枯草芽孢杆菌因其抑菌谱广且对多种植物病害具较好防效而得到广泛关注和研究。本实验主要是利用传统方法对枯草芽孢杆菌B504的细胞形态、结构及生理生化特性进行鉴定。     

刺参养殖池塘周年盐度变化微观特征研究

为研究刺参养殖池塘水体盐度跃层形成机理及盐度跃层变化规律的微观特征,对旅顺一个刺参养殖池塘水体表、底层盐度周年变化和四季代表日盐度昼夜垂直变化进行了监测。结果表明:养殖池塘表层盐度变化为24.6~31.7,底层盐度变化为28.4~31.7,夏季盐度较低;7—9月、12月到翌年3月,养殖池塘表、底层存在盐度差且底层大于表层;夏季和冬季代表日池塘盐度存在昼夜和垂直变化,夏季变化幅度较大;夏季-120 cm以下和冬季-60 cm以下水层无昼夜变化。研究表明,刺参养殖池塘上层盐度波动较大,下层基本上稳定。     

南京国民政府铁道技术标准审订委员会述评

中国早期的铁路建设受西方国家干涉未有统一的技术标准。为修订1922年制定的铁路技术标准，南京国民政府铁道部设立了铁道技术标准审订委员会。委员会以中国工程师为主体，主要成员大多有留学经历。委员会主要负责已有标准的改良、审订及机械设计，对之前拟定标准在补充、细化等方面做了工作，历经7年制定了15项标准规范。对规范当时铁路建筑与技术、推进近代中国铁路技术标准化进程做出了重要贡献。     

非线性编辑系统的编辑管理

非线性编辑系统在电视节目制作中的应用非常广泛,但是在具体的使用过程中,如果有些小小的疏忽,就可能使整个节目制作工作难以进行。因此,有必要对节目的素材采集、片段存放以及整个系统进行科学有效的管理,以保证节目制作工作顺利的进行。     

不同硒源对刺参呼吸代谢的影响

为了研究不同硒源对刺参Apostichopus japonicus特定生长率和呼吸代谢指标的影响,以刺参幼参和成参为研究对象,分别强化投喂硒添加量为0.6 mg/kg的硒代蛋氨酸、硒酸钠和亚硒酸钠饲料,试验周期为60 d。结果表明:硒添加组成参和幼参的特定生长率均显著大于对照组(P<0.05),其中硒代蛋氨酸组最大,且显著大于硒酸钠组和亚硒酸钠组(P<0.05),除硒代蛋氨酸组外,其他各试验组成参的特定生长率均大于幼参;硒添加组成参和幼参的耗氧率均显著大于对照组(P<0.05),其中硒代蛋氨酸组最小,显著小于硒酸钠组和亚硒酸钠组(P<0.05),对应组中,幼参耗氧率大于成参;硒添加组成参和幼参的排氨率均低于对照组,除硒代蛋氨酸组成参显著低于对照组(P<0.05)外,其余硒添加组与对照组均无显著性差异(P>0.05),硒代蛋氨酸组的排氨率最小,对应组中,幼参排氨率大于成参;硒添加组成参和幼参的O/N值均显著大于对照组(P<0.05),其中硒代蛋氨酸组最小,但硒添加组间无显著性差异(P>0.05),对应组中,成参的O/N值大于幼参。研究表明,饲料中添加硒能够提高刺参的代谢率,促进刺参生长,其中有机硒(硒代蛋氨酸硒)的促生长效果好于无机硒(硒酸钠和亚硒酸钠),且硒代蛋氨酸对幼参的促生长效果要好于成参。     

镉对刺参幼参体内金属硫蛋白含量及其变化规律的影响

为评价水体中镉(Cd~(2+))对刺参Apostichopus japonicus体内金属硫蛋白(MT)的诱导效果,以刺参幼参(体质量8.87 g±1.12 g)为研究对象,在水温16~18℃下,探讨水体中不同浓度Cd~(2+)(<0.005、0.025、0.050、0.250、0.500 mg/L)胁迫下幼参体内MT含量随Cd~(2+)胁迫时间(0、12、36、60、84、108h)的变化规律。结果表明:随着Cd~(2+)胁迫时间的延长,幼参肠道、呼吸树和体壁中MT含量呈先升高后趋于平稳的趋势,且在36 h时各组织中MT含量最高或相对较高;Cd~(2+)胁迫36 h时,幼参体内MT含量依次为肠道>呼吸树>体壁,且Cd~(2+)胁迫后幼参各组织间MT含量有显著性差异(P<0.05);各时间点下,Cd~(2+)浓度试验组幼参肠道、呼吸树和体壁中MT含量均显著高于对照组(P<0.05);在Cd~(2+)胁迫各时间点,幼参肠道和呼吸树中MT含量随Cd~(2+)浓度的升高呈显著"阶梯式"升高(P<0.05),体壁中MT含量则随Cd~(2+)浓度的升高而升高,Cd~(2+)浓度为0.025、0.050 mg/L时,体壁中MT含量相差不大(P>0.05),但均显著低于Cd~(2+)浓度最高组(0.500 mg/L)(P<0.05)。研究表明,水体中的Cd~(2+)可诱导刺参组织合成金属硫蛋白,其中对肠道和呼吸树的诱导效果最明显,36 h即可达到较为显著的诱导效果,因此,刺参肠道和呼吸树组织中的MT含量可作为评价水体中重金属Cd~(2+)污染的生物标志物。     

几种中草药对刺参幼参的急性毒性试验

为探究刺参Apostichopus japonicus对中草药的毒性反应,在水温13~15℃下采用水生生物急性毒性试验方法对体质量为(2.36±0.41)g的刺参幼参进行了5种中草药急性毒性试验。结果表明:单方中草药对刺参幼参的毒性大小依次为五倍子>乌梅>石榴皮>黄芩>甘草;五倍子、乌梅、石榴皮、黄芩和甘草对刺参幼参的48 h半致死浓度分别为0.340、2.027、2.149、2.234、4.900 g/L,安全浓度分别为0.055、0.272、0.166、0.271、0.605 g/L;6组复方药物中毒性最大的是五倍子+甘草,其次是五倍子+黄芩、甘草+黄芩、石榴皮+五倍子,乌梅+石榴皮、五倍子+乌梅两组复方的毒性最低。研究表明,在安全浓度范围内,单方中草药五倍子、乌梅,复方五倍子+乌梅、石榴皮+乌梅可用作刺参细菌性疾病的防治药物。     

刺参补体AjC3活性相关miRNA的筛选与初步研究

为了从miRNA调控方面探索刺参Apostichopus japonicus的免疫机制,用脂多糖刺激刺参,在第0、6、12 h取样(记为样本A00、A06、A12),以海胆Strongylocentrotus purpuratus基因组为参照基因,运用高通量测序和相关生物信息学方法筛选与刺参补体(AjC3)相关的miRNAs,并通过实时定量PCR验证相关miRNA和AjC3 mRNA的表达变化。结果表明:经比对筛选出刺参体腔细胞的miRNA共41个;通过靶基因预测和差异表达分析,共得到靶基因为补体AjC3的miRNA有3个,分别为spu-miR-133、spu-miR-137、spu-miR-2006;3种miRNA和AjC3 mRNA实时定量PCR显示,spu-miR-133表达量呈先升高后降低的趋势,12 h达到最高值,spu-miR-137表达量呈先降低后升高的趋势,9 h达到最低值,12 h达到最高值,spu-miR-2006表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值,AjC3 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值。研究表明,spu-miR-133、spu-miR-137可能共同抑制调控补体AjC3基因表达,spu-miR-2006在免疫反应中对其他靶基因进行调控。     

扇贝土和黄土在刺参幼参饲料中的应用研究

为探寻刺参Apostichopus japonicus饲料中品质优、资源广、价格廉的海泥替代物,用扇贝土和混合一定比例螺旋藻(1∶9)的黄土分别替代海泥,并搭配海带投喂平均体质量为0.35 g的刺参幼参,试验设海泥组、扇贝土组、黄土组,每组设3个重复,在室内水族玻璃缸中进行试验,每个缸中放80头幼参,饲养时间为56 d,养殖试验结束后,分别测定各组刺参的生长、消化和非特异性免疫指标。结果表明:扇贝土组和黄土组刺参的成活率、增重率、特定生长率、蛋白质效率等均高于海泥组,而饲料系数略低于海泥组,但均无显著性差异(P>0.05);黄土组脏壁比、比肠重显著低于扇贝土组和海泥组(P<0.05);扇贝土组刺参肠道中淀粉酶活力显著高于黄土组(P<0.05),但两组与海泥组均无显著性差异(P>0.05);扇贝土组刺参体腔液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力显著高于黄土组(P<0.05),且两组显著高于海泥组(P<0.05);扇贝土组和黄土组刺参体腔液过氧化物酶(POD)活力及总抗氧化能力(T-AOC)高于海泥组,但无显著性差异(P>0.05)。研究表明,扇贝土和混合螺旋藻的黄土均可作为新资源完全替代海泥饲料,且以扇贝土最优。     

基于栖息地适宜度指数模型的刺参环境适宜性初步研究

为了评价刺参Apostichopus japonicus生存环境的适宜度,基于动物栖息地适宜度指数(Habitat suitability index,HSI)模型,对刺参的环境适宜性进行了研究。选取温度、盐度、溶解氧、底质环境类型和底质砂砾含量作为影响刺参适应性的环境因子,根据经验赋值法和数理统计方法,绘制了大长山海域刺参各影响因子的适宜性指数(Suitability index,SI)曲线图,并利用几何平均法综合估算HSI值。结果表明:2013—2014年7个航次调查的HSI平均值分别为0.66、0.59、0.67、0.46、0.66、0.65、0.65,冬季的适宜度(HSI=0.46)明显低于其他季节,而春季(HSI=0.66)及秋季(HSI=0.67,HSI=0.65)的适宜度相对较高;同一航次中(以2014年11月为例),7个站位的HSI值分别为0.66、0.67、0.65、0.62、0.63、0.62、0.67,其中DCS01、DCS02和DCS07站位的适宜度较高。研究表明,春季及秋季在DCS01、DCS02和DCS07站位进行刺参苗种底播,刺参的成活率和生长情况可能更好。     

复合免疫增强剂对刺参生长和非特异性免疫酶活性的影响

为研究不同复合免疫增强剂对刺参Apostichopus japonicus非特异性免疫酶的影响,试验设置正常对照组(A组)、芽孢杆菌+壳寡糖+刺五加等中草药组(B组)、芽孢杆菌+壳寡糖+百合等中草药组(C组)、芽孢杆菌+壳寡糖+大黄等中草药组(D组)、芽孢杆菌+壳寡糖+黄芪等中草药组(E组)、芽孢杆菌+壳寡糖组(F组)、壳寡糖组(G组)和芽孢杆菌组(H组)8组,通过在饲料中添加中草药、芽孢杆菌和壳寡糖,研究了芽孢杆菌、壳寡糖和中草药对体质量为(3.87±0.54)g的刺参幼参生长及其酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)等非特异性免疫酶活力的影响。结果表明:投喂芽孢杆菌、壳寡糖和中草药制剂均促进了刺参的生长,各试验组刺参的增重率和特定生长率均显著高于对照组(P<0.05),其中,D和E组均显著高于其他试验组(P<0.05);在饲料中添加不同配伍的复合免疫增强剂对AKP活力无显著性影响(P>0.05);投喂50 d后,C、D、E组ACP活力显著高于对照组(P<0.05);投喂50 d后,除H组外,其他试验组SOD活力均显著高于对照组(P<0.05),其中B、C和D组SOD活力较高;投喂50 d后,除G组外,其他试验组LZM活力均显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,饲料中共同添加芽孢杆菌、壳寡糖和中草药复合免疫增强剂能进一步提高刺参非特异性免疫酶活力,其中C、D和E试验组均能提高刺参的非特异性免疫力,且C组效果最好。