代谢改造酿酒酵母生产番茄红素

番茄红素是一种具有较高商业价值的萜类化合物,具有良好的抗氧化性,对心血管疾病有预防作用,可通过微生物发酵法高效生产。为了提高酿酒酵母胞内番茄红素积累,过量表达了三酰甘油途径(TAG途径)的关键基因dga1(酰基辅酶A:二酰基甘油酰基转移酶)、pah1(磷脂酸磷酸酶),同时敲入ldp1(脂滴附着蛋白);继续在ypl062w位点敲入来源于肠沙门氏菌的acs1^L641P(胞内乙酰CoA合成酶),为番茄红素和脂质载体提供充足的前体;过表达pap1(聚腺苷酸聚合酶)以满足多个基因过表达的转录需求。综上,该文构建了一个适合番茄红素累积的细胞工厂,番茄红素单位产量为109.26 mg/g DCW。该研究通过代谢改造得到1株高产番茄红素重组菌,研究结果为后续进行发酵优化奠定了基础。     

代谢工程改造毕赤酵母生产葡萄糖二酸

葡萄糖二酸是一种具有重要生物功能的有机酸,为了实现微生物合成葡萄糖二酸的高效生产,异源表达来源于小鼠基因组的MIOX基因及Pseudomonas putida KT2440的udh基因,在毕赤酵母中构建葡萄糖二酸合成途径,实现了葡萄糖二酸的生成。通过在摇瓶水平进行优化,确定了最适碳源为葡萄糖(初始质量浓度60 g/L最优),最适初始pH为5.5,最优接种龄为24 h,最适接种体积分数为25%,重组毕赤酵母生成的葡萄糖二酸产量从最初的(566.36±16.98) mg/L提高至(967.60±3.90) mg/L。在此基础上,重组毕赤酵母在3 L发酵罐中放大培养,葡萄糖二酸的产量达到了(2.60±0.04) g/L。     

酿酒酵母产脂肪酸乙酯代谢途径改造

脂肪酸乙酯(fatty acid ethyl ester,FAEE)是目前最具有潜力的新型能源,微生物细胞工厂生产FAEE比目前普遍的化学合成方法具有诸多优势,例如对环境污染小、生产成本低等.酿酒酵母具备良好的产乙醇和脂肪酰辅酶A的能力,我们试图通过改造酿酒酵母代谢途径来提高FAEE的前体——脂肪酰辅酶A的产量.通过引...     

代谢工程改造酿酒酵母生产L-苹果酸

为了研究胞质还原路径对酿酒酵母积累L-苹果酸的影响,通过在酿酒酵母中过量表达源于黄曲霉的丙酮酸羧化酶(Afpyc)、苹果酸脱氢酶(Afmdh)及C4-二羧酸转运蛋白(Afmae),成功构建了L-苹果酸合成的胞质还原路径。结果表明:(1)当低水平表达Afpyc时,其丙酮酸浓度降低了42%,但不能积累L-苹果酸;(2)当共表达Afpyc和Afmdh时,菌株W005积累了1.93 g/L的L-苹果酸,与对照菌株W004相比细胞干重提高了350%,丙酮酸降低了65.9%;(3)当共表达Afpyc、Afmdh和Afmae时,菌株W006的L-苹果酸产量提高了21.2%,达到2.34 g/L;4)通过提高接种量至初始OD_(600)=2,L-苹果酸的产量提高到3.28 g/L。通过在酿酒酵母中过量表达黄曲霉胞质还原路径的关键基因,使得工程菌能够积累L-苹果酸,为目标产物的高效积累提供了一种可借鉴的思路。     

代谢工程改造酿酒酵母生产2,3-丁二醇的研究进展

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为“细胞动力车间”能够生产生物燃料和工业产品,2,3-丁二醇（2,3-BD）是其重要的一 种次级代谢产物,广泛应用于工业化生产。 但野生型S. cerevisiae合成2,3-BD的效率低,制约着工业化生产进程,因此,应用代谢工程 法优化代谢途径来解决这一问题极其重要。 该研究对近年来利用代谢工程手段来提高S. cerevisiae 2,3-BD产量的策略进行了总结, 主要包括：过表达2,3-BD合成途径中的关键酶编码基因;敲除编码乙醇、甘油、乙酸等分支途径的关键酶基因;利用可再生能源合成 2,3-BD;应用辅因子工程手段对S. cerevisiae合成2,3-BD的代谢网络进行重新设计及合理改造等。 对S. cerevisiae未来的研究方向进行 了展望,为实现生物燃料2,3-BD的工业化生产提供了保障。     

双酶法生产葡萄糖酸锌的新工艺

介绍一种双酶法生产葡萄糖酸锌的新工艺。新工艺采用葡萄糖作为主要原料,葡萄糖氧化酶在过氧化氢酶的协同作用下将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,同时流加一定浓度的氧化锌悬液进行中和,最终生成葡萄糖酸锌。研究葡萄糖浓度、pH、温度、空气流量对葡萄糖酸锌合成工艺的影响,并对葡萄糖酸锌结晶的最适宜条件进行初步研究。通过本工艺生产的葡萄糖酸锌纯度可达99.6%,可用于食品、医药、饲料、化妆品等诸多领域。     

葡萄糖酸内脂生产豆腐的试验小结

江苏省调味副食品科技情报站引进萄酸葡糖δ内脂(下简称内脂),委托我厂作生产豆腐凝固剂试验。我厂取不同浓度和煮沸后回降到不同温度的豆浆,用石膏和内脂两种凝固剂相对照,进行多次实验,情况如下。一、内脂和石膏水溶前后的情况内脂:粉末状,色洁白,手拈细腻,口尝有甜     

酶酸法生产液体葡萄糖工艺的研究

本报告就酶酸法加工液体葡萄糖的工艺问题作了较系统的实验研究。新工艺不单比传统酸法生产或单纯酶法工艺降低成本,尤其对不同的淀粉原料不苛求,既能够适应精制淀粉,也可以直接转化淀粉质原料,显示出较大的灵活性。因此,这项研究成果除了在液体葡萄糖生产领域有特定的参考价值以外,即使对于进一步发展淀粉深加工产品(如果葡糖浆)以及其它淀粉降解产品(如麦芽糊精)也有借鉴作用。本编辑部谨向国外乡镇企业和中小型食品厂以及对于淀粉加工有兴趣的广大读者推荐这项科研成果。     

代谢工程改造酿酒酵母合成玉米黄质

玉米黄质是一种类胡萝卜素,在很多领域都有一定的应用。该研究在前期构建的脂质体积累酿酒酵母的基础上,表达玉米黄质合成酶,初步得到一株能够积累玉米黄质的酿酒酵母工程菌。进一步优化补料碳源、补料时间和补料方式,最终在5 L的发酵罐从48 h开始以指数流加的方式流加葡萄糖,得到玉米黄质的产量为47.7 mg/L。综上,该研究构建了一株高产玉米黄质重组菌并对其进行了发酵验证,研究结果为后续进行发酵优化提供了基础以及改进的方向。     

葡萄糖酸内酯豆腐

福建漳州市芗城区豆制品厂改造原有生产设备,引进先进生产工艺试制成功“葡萄糖酸内酯豆腐”,并批量投放市场。 “葡萄糖酸内酯豆腐”以葡萄糖酸内酯作为凝固剂,采用科学新工艺生产,摆脱了过     

酿酒酵母代谢木糖工程菌的构建

通过PCR方法从休哈塔假丝酵母基因组DNA中克隆得到木糖还原酶(XR)基因XYL1和木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2,将其分别连接到酵母表达载体pYES2上,得到重组表达载体pYES2-XYL1和pYES2-XYL2,从pYES2-XYL1上克隆得到含半乳糖启动子的XYL1,将其连接到pYES2-XYL2序列的下游,得到重组表达载体pYES2-XYL1-XYL2,通过电转化方法将pYES2-XYL1-XYL2转入酿酒酵母宿主菌INVSc1。在初始pH为5.5,温度为33℃,前5h转速为150r/min,后变为50r/min的条件下,乙醇产量为33.45g/L。     

粗淀粉酶酸法生产液体葡萄糖新工艺的研究

以粗淀粉原料直接投料，用酶液化、离交酸化糖化工艺生产液体葡萄糖，比传统的酶酸法工艺生产的产品质量好，比常用的双酶法工艺生产过滤快，产量高，效益好。     

2-酮基-D-葡萄糖酸发酵生产研究进展

2-酮基-D-葡萄糖酸（2KGA）是合成食品抗氧化剂D-异抗坏血酸钠及D-异抗坏血酸的前体,通常采用细菌发酵的方法由D-葡萄糖转化而来。本文概述了2KGA的生物合成途径、2KGA产生菌的选育、2KGA的发酵条件、2KGA的发酵工艺、2KGA发酵产物的提取、国内2KGA发酵生产中存在的主要问题及改善对策等。     

酿酒酵母脱除木糖母液葡萄糖发酵条件优化

木糖母液是木糖结晶后的副产物,主要成分为木糖,还有葡萄糖、阿拉伯糖及半乳糖等多种杂糖。采用酿酒酵母发酵法可以去除木糖母液中的葡萄糖,提高其中木糖及阿拉伯糖的纯度,以便进行后续分离,提高木糖母液的利用率。本研究的主要工艺路线:采用酿酒活性干酵母为种子,按照0.3%的接种量接种至扩繁培养基中,在温度为30℃、转速为150rpm的条件下,恒温振荡培养15 18h,然后,用离心机将菌体从培养液中分离,将菌泥转移至稀释到18%浓度的木糖母液中进行发酵,去除葡萄糖。发酵温度为34℃、振荡转速为200rpm、发酵时间为8h,葡萄糖浓度降至0.2%以下。去除葡萄糖后的木糖母液,经过高效液相色谱检测,得知发酵脱糖前后木糖母液中除葡萄糖以外的其他成分及其含量基本不变。     

电解氧化葡萄糖生成葡萄糖酸的研究

研究用电解氧化法将葡萄糖氧化成葡萄糖酸,葡萄糖酸及其衍生物可广泛应用于食品、医药、纺织和化工等领域。选用中性氧化剂溴化钠,考察葡萄糖浆浓度、氧化温度、氧化剂用量、反应时间、电解电流强度和搅拌速度等因素对葡萄糖酸产率的影响,在适当的工艺条件下,葡萄糖酸的产率为90.75%。      

定向进化肌醇加氧酶MIOX4提高葡萄糖二酸的产量

葡萄糖二酸是一种在医药、食品、服装纺织和化工均有重要作用的有机二元酸。葡萄糖二酸的生物合成途径已经在大肠杆菌、毕赤酵母和酿酒酵母细胞中成功构建。为了提高葡萄糖二酸合成关键酶-肌醇加氧酶MIOX4的活性,该研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为底盘微生物,通过定向进化-易错PCR的方法对来自拟南芥基因组的肌醇加氧酶MIOX4的关键氨基酸序列进行随机突变。以葡萄糖二酸的产量为筛选指标,利用大肠杆菌葡萄糖二酸传感器对MIOX4的突变体进行高通量筛选。实验结果显示,从突变体文库中筛到4株有潜力的MIOX4突变体(S133R、K88R、E72V、T40P),使得葡萄糖二酸产量相较于未突变菌株分别提高了53%、30%、21%、17%。通过对突变体MIOX4(S133R)进行结构分析,发现突变位点R133增大了该位点与底物肌醇之间的空间距离,从而减少了空间位阻,提高了对底物肌醇的催化能力。该研究为后续研究MIOX的结构和功能、以及进一步提高葡萄糖二酸产量奠定了基础。     

耐高渗酿酒酵母的代谢流分析

研究了指数生长期的酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 在高渗胁迫下的生理代谢.甘油和海藻糖是酿酒酵母的主要相容性溶质.在高渗环境下,胞外酒精质量浓度、甘油质量浓度、海藻糖质量浓度分别较对照提高100%、400%和11%.代谢流分析表明,高渗环境下,从节点6-磷酸葡萄糖合成海藻糖的碳流较常规培养增加了47.3%;从节点磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛合成甘油的碳流增加了55.7%;从节点丙酮酸流向乙醇的碳流增加了300%,而流向三羧酸 (TCA) 循环的流量减少了21.7%.