黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选鉴定

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。     

黄曲霉毒素B_1降解菌的筛选及鉴定

目的:在易被黄曲霉毒素B_1(AFB_1)污染的不同环境中,筛选能够降解AFB_1的菌株。方法:以香豆素为唯一碳源和能源进行AFB_1降解菌株的初筛,得到生长良好的菌株,分别与AFB_1标品(2.5μg/m L)共同作用进行复筛。对降解率最高的菌株通过形态以及16S r DNA序列分析,进行初步鉴定;并对胞外粗提液、菌细胞、胞内裂解物降解AFB_1进行研究。结果:从腐烂朽木中筛选出的菌株XY1降解AFB_1能力达71.91%。根据XY1菌株形态、16S r DNA序列同源性分析,初步确定菌株XY1为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。胞外粗提液降解率为70.23%,菌细胞悬液降解率为8.26%,胞内裂解物的降解率为3.18%,表明菌株XY1的降解活性与胞外粗提液有关。结论:筛选到能高效降解AFB_1的克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)XY1,XY1降解毒素的活性物质主要存在于胞外粗提液。     

细菌M19培养条件对降解黄曲霉毒素B_1的影响

对经筛选的一株降解黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的菌株M19进行16S rDNA基因序列分析及系统发育树分析,从而进行菌株鉴定;以AFB_1降解率为评价指标研究培养条件(培养温度、培养时间、接种量、培养基的初始pH、培养基的装液量)对AFB_1降解率的影响。结果表明,该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa);培养温度和培养基初始pH对AFB_1降解率的影响较为显著,不同温度及不同初始pH条件下AFB_1降解率存在明显差别(P0.05),而培养时间、装液量、接种量对AFB_1降解率的影响不显著。培养温度37℃时,AFB_1降解率为90%;初始pH为5时,AFB_1降解率为95.2%。     

复合菌系降解黄曲霉毒素B_1的效果及组成多样性研究

采用"外淘汰法"筛选了一组对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)具有高效降解能力的复合菌系FBAD-2,该复合菌系在120 h内能将质量浓度为2 000μg/L的AFB_1完全降解,对质量浓度为5 000μg/L的AFB_1能降解90%。FBAD-2在30~70℃的范围内均能保持对AFB_1的高效降解能力,其最适温度为60℃。毒素降解实验分析表明,FBAD-2对AFB_1的降解主要是胞外酶的作用,其最适产酶时间为24 h,此时的胞外粗酶液在48 h内能将5 000μg/L的AFB_1完全降解。16S rDNA基因组测序分析结果表明,FBAD-2的微生物组成主要包括土芽孢杆菌(Geobacillus)、嗜热小杆菌(Symbiobacterium thermopilum)、梭菌(Clostridium)和热厌氧杆菌(Tepidanaerobacter)等。     

一株黄曲霉毒素B_1降解菌的筛选及鉴定

以香豆素为唯一碳源进行AFB1降解菌的初筛,从青岛土壤中筛选出高效降解AFB1的菌株A6,分离该菌的上清液、菌悬液、胞内液并分析各组分降解AFB_1特征,通过形态学、生理生化和16S rRNA基因对该菌株进行鉴定。研究结果表明,菌株A6能高效降解AFB1,其胞外上清液、菌悬液和胞内液能分别降解90.6%、19.6%和12.8%的AFB_1,表明起降解的活性物质主要位于胞外液。在平板上该菌落呈现乳白色,具有皱褶,革兰氏染色呈阳性;能利用葡萄糖、阿拉伯糖、乳糖等碳源; 16S rRNA基因分析表明该菌与贝莱斯芽孢杆菌CR-502~T(Bacillus velezensis)相似度为99.64%。综合形态学特征、生理生化特征和16S rRNA基因分析结果,鉴定菌株A6为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),命名为Bacillus velezensis A6。本研究结果为深入研究该菌的降解机理奠定了基础。     

解淀粉芽孢杆菌黄曲霉毒素B_1裂解酶的分离纯化及鉴定

解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021能够高效降解黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1),确定其降解AFB_1的活性蛋白及其机理是今后工业化生产应用的重要基础。通过硫酸铵分级沉淀、DEAE FF阴离子交换层析和Superdux 75凝胶过滤层析对解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021发酵液中降解AFB_1的活性物质进行分离纯化,通过Tricine-SDS-PAGE和质谱鉴定初步分析该活性蛋白为裂解酶(分子质量约27 ku)。同时,采用荧光色谱技术初步分析了裂解酶对AFB_1的降解机理可能是破坏AFB_1的内酯环结构。     

低温射频等离子体降解农产品中黄曲霉毒素B1效果的研究

研究采用低温射频等离子体技术处理农产品中的黄曲霉毒素B_1(AFB_1),并通过HPLC分析其中黄曲霉毒素的降解率。结果表明,等离子体降解农产品中AFB_1效果显著,150 W等离子处理500 s,花生中AFB_1的降解率达到88.3%,玉米中AFB_1的降解率达到92.2%。等离子体功率越大,处理时间越长,AFB_1的降解率越大。在相同降解条件下,不同细度样品中AFB_1降解率有显著差异。花生、玉米粗粉试样中AFB_1的降解率低于花生、玉米细粉试样。     

黑曲霉菌降解黄曲霉毒素B_1的影响因素的研究

谷物类原料因保管不善造成或加工过程中操作不当易产生大量黄曲霉毒素B_1。目前,微生物法已成为降解黄曲霉毒素B1的研究热点。本研究用已筛选出具有降解黄曲霉毒素B1能力的黑曲霉菌为研究对象,从发酵液不同处理方式,热稳定性,p H稳定性,金属离子稳定性等方面,对其降解的影响因素进行了研究。通过对其发酵液不同处理途径和不同条件对其降解黄曲霉毒素B_1能力的影响的研究,初步判断筛选菌株是通过直接代谢和分泌胞外酶两种途径共同降解黄曲霉毒素B_1的,而分泌胞外酶又是其主要的降解黄曲霉毒素B1的手段,因此易受温度、p H、和金属离子的影响。     

细菌M19降解黄曲霉毒素B1降解产物的毒性分析

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性,致癌性和致突变性,对人类健康造成严重威胁。本研究基于实验室筛选保藏的AFB_1降解菌M19产生的AFB_1降解酶(PADE),采用致突变性实验(Ames实验)和HepG2细胞的细胞毒性实验对AFB_1降解后的毒性进行分析。研究发现, AFB_1经PADE降解后对鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100的回复突变数明显大于AFB_1对这些菌株的回变菌落数,与自发突变无明显差异,降解3 d后,其降解产物已表现出致突变阴性结果;与未处理细胞组相比,AFB_1降解产物作用于细胞的存活率均达到83%以上。结果表明,AFB_1经PADE降解后,其致突变性和细胞毒性均明显降低。     

微波光波组合辐射去除花生表面黄曲霉毒素B_1的研究

针对花生表面存在的黄曲霉毒素污染问题,考察了微波光波组合辐射处理对花生表面黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的降解效果。将花生在一定微波光波辐射频率下进行试验,研究结果表明:微波光波联合辐射法可有效降解花生表面的AFB_1,并随着时间增加,毒素减少量也增加,8min时降解率达到74.06%;AFB_1降解速率与样品最初被污染的水平有关;经该法处理后的花生,其基本成分变化不大.营养成分损失较少。由于微波光波组合辐射法降解条件温和、操作简单、降解效率高,可应用于受黄曲霉毒素污染的粮食物料中。