酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2％、4％、6％、8％乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性.实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8％乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23....     

混合酵母菌株酒精发酵过程对葡萄糖和果糖利用的差异性研究

研究了酿酒酵母GJ2008和酿酒酵母GGSF16不同接种比例(V/V)在酒精发酵过程中葡萄糖和果糖利用的差异性,为蔗汁木薯粉酒精发酵提供研究基础.以等质量浓度的葡萄糖与果糖(总糖220 g/L)混合进行酒精发酵,调节酿酒酵母GJ2008与GGSF16不同接种比例(10∶0,8∶2,6∶4,4∶6,2∶8,0∶10,以初始酵母数为4.0×10~7CFU/mL)进行酒精发酵,测定发酵过程中总糖﹑葡萄糖﹑果糖﹑乙醇的变化,采用曲线下面积法和糖代谢一半与代谢完全所需时间法对两种糖利用差异性进行分析.结果表明:果糖的利用速率小于葡萄糖的利用速率,随着酵母菌株GGSF16接种量的增加,葡萄糖利用速率加快,整个发酵过程中,混合酵母菌株对果糖代谢的影响程度高于其对葡萄糖的影响程度;两种酵母菌株的接种比例对乙醇产量无明显影响;相比较之下,0∶10组总糖发酵效率和耗糖发酵效率均较高;因此,酿酒酵母GJ2008和GGSF16最佳接种比例为0∶10(V/V).     

丹参次生代谢产物丹参酮的调控研究

主要介绍了丹参次生代谢产物丹参酮中活性成分萜类化合物的合成途径及其代谢途径中的各种酶,在此基础上研究了赤霉素、诱导子对丹参酮代谢的细胞调控,柯巴基焦磷酸合酶、丹参4-（5′-二磷酸胞苷）-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶（SmCMK）对丹参酮代谢的分子调控。展望了通过分子调控机制改良丹参酮次生代谢途径,为丹参酮类化合物的产业化生产提供新的途径。     

发酵型洋葱保健酒的研制

利用酿酒酵母对洋葱破碎物进行发酵,开发一种新型的低醇保健酒。通过对发酵过程中酒度、酸度、总糖和还原糖等成分的测定．研究了发酵法酿制洋葱保健酒的生产工艺。     

酿酒酵母胞内代谢关键酶对乙醇的耐受性

分别添加2%、4%、6%、8%乙醇的酵母细胞糖酵解途径和三羧酸循环中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、异柠檬酸裂解酶活力等关键代谢节点处的酶活力,以期考查关键酶对酒精的耐受性。实验结果表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶对酒精的耐受能力较强,添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时提高23.65%;丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶和乙醇脱氢酶表现出对酒精的耐受力较差,丙酮酸激酶和乙醇脱氢酶在添加2%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别降低77.7%和62.72%,异柠檬酸脱氢酶在添加8%乙醇时的酶活力仅为0.003U;苹果酸脱氢酶和异柠檬酸裂解酶表现出对酒精良好的耐受性,在添加8%乙醇时的酶活力较无乙醇时分别提高256.25%和276.16%。     

Ser411磷酸化p70S6k的细胞免疫化学定位

培养NIH3T3细胞，结合免疫印迹和细胞免疫荧光染色法，对p70的S6激酶（p70^S6k）及其第411位丝氨酸（Ser^411）处于磷酸化状态的细胞定位进行研究．利用免疫荧光染色技术，发现p70^S6k存在于细胞的各个部分，而Ser^411磷酸化后的p70姒只存在细胞核内．将细胞核与细胞质分离，并利用抗磷酸化Ser^411的抗体进行免疫印迹分析，发现只有细胞核部分才出现免疫条带，说明Ser^411磷酸化后的p70^S6k特异性地存在于细胞核当中．     

甜橙种子中柠檬苦素类似物配糖体的测定

利用液质联用（ＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ）技术对甜橙种子的乙醇提取物进行了检测,从中发现了两种柠檬苦素类似物的配糖体－奥巴叩酮配糖体和诺米林配糖体。采用＾１３Ｃ和＾１Ｈ核磁共振谱法对化合物的结构进行了进一步证帝。     

黄连醇提物对真菌几丁质合酶的抑制作用

以酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）细胞为正筛选模型的筛选结果显示,中草药黄连醇提液能挽救酿 酒酵母在Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ　ｗｈｉｔｅ（ＣＦＷ）抑制浓度下的生长．利用酿酒酵母几丁质合成酶缺陷型菌株的最 低抑菌浓度试验发现,几丁质合成酶Ⅲ缺陷型菌株（ＣＨＴ００３）对黄连醇提液的敏感性比野生型大４ 倍．几丁质含量测定结果表明：黄连醇提液处理后野生型酵母和缺陷型菌株ＣＨＴ００３的几丁质含 量明显降低,由此推测黄连醇提物具有明显的抑制酵母细胞壁几丁质合成酶Ⅲ的活性成分．     

不同糖源对酵母生长及糖利用的影响

采用含有不同糖源的液体培养基对酵母进行培养,模拟面团中3种不同的糖源,研究其对酵母生长及糖利用的影响。结果表明:酵母在含有葡萄糖和麦芽糖的培养基中均表现出明显的延滞期、对数期和稳定期,在葡萄糖培养基中的酵母较早进入对数期,且对数期生长速率高于在麦芽糖培养基中,但酵母在淀粉和无糖环境中没有表现出明显的生长阶段;葡萄糖培养基与麦芽糖培养基中的酵母细胞在对数期呈椭圆形,细胞体积显著增大,细胞呈聚集状态,且大量出芽;酵母培养过程中,葡萄糖培养基中的葡萄糖浓度呈显著下降的趋势,最后趋于平稳,麦芽糖培养基中的葡萄糖浓度呈先升高后下降的趋势。葡萄糖和麦芽糖培养基pH值呈先下降后趋于稳定的趋势,无糖和淀粉培养基pH值变化不显著。葡萄糖和麦芽糖显著影响酵母的生长速率、细胞形态、糖的利用和培养基的pH值,为酵母利用面团中不同糖源发酵提供参考。     

蔗糖转化酶SUC2在商品化酿酒酵母中的高水平表面展示

蔗糖转化酶SUC2是酿酒酵母水解菊糖的关键酶,但SUC2在酿酒酵母中的低水平表达限制了其理性改造酿酒酵母以获得高效生产菊糖基乙醇工程菌的进程。本实验通过克隆获得蔗糖转化酶SUC2的编码基因,并利用AGA1-AGA2锚定蛋白复合体将SUC2表面展示于商品化酿酒酵母菌株EBY100中。酶活力测定结果表明,表面展示有SUC2的重组菌EBY-S蔗糖酶活及菊糖酶活分别达到241.6和9.4 U/mL,较之前报道的过表达SUC2的酿酒酵母重组菌酶活力有显著提高。该结果表明,AGA1-AGA2锚定蛋白复合体能够成功地将SUC2表面展示于酿酒酵母细胞壁上。