裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

采用不同饱和度的硫酸铵溶液对内切β-1,3-葡聚糖酶粗酶液进行分段盐析,以确定最佳盐析条件,将盐析处理后的酶液经透析浓缩、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等进一步分离纯化,浓缩纯化后的含酶组分,经过SDS-PAGE电泳分析其纯度并初步确定其分子量。结果显示:经过纯化后的内切β-1,3-葡聚糖酶的比活力由20.90U/mg提高到933.37U/mg,纯化倍数为44.7倍,酶活回收率为11.6%,电泳分析呈单一条带,分子量近似为45ku。     

果胶酶在葡萄酒酿造中的作用及其实践应用

果胶酶是现代葡萄酒酿造中的重要辅料,大多数是由黑曲酶（Aspergillus niger）经特殊工艺制成的液体果胶酶或固体果胶酶。葡萄酿酒中常用的果胶酶通常是复合果胶酶,含有果胶裂解酶（Pectinlyase,PL）,果胶酯酶（Pectin esterase,PE）和聚半乳糖醛酸酯酶（Polygalacturonases,PG）等。     

一种龙须菜中纯化藻红蛋白的新方法

藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)是龙须菜主要的捕光色素蛋白之一,呈红色,具有高荧光量子产率,被广泛应用于生物医学、食品和化妆品行业。本文交替运用疏水层析和分子筛层析分离纯化龙须菜中的PE。先使用低温组织捣碎法对龙须菜细胞进行破壁作为粗提液,硫酸铵分级沉淀处理后经磷酸盐缓冲液重悬,经疏水层析和分子筛层析,最终获得纯度(A₅₆₅/A₂₈₀)达到3.8的PE,同时表征了最终纯化产物的可见光吸收光谱、荧光发射光谱及Gauss解叠运算分析,证明最终纯化得到的PE保持了天然的光学活性和蛋白构象。此纯化工艺为今后从龙须菜中大规模提取PE,开发相关产品提供了良好的借鉴。     

黑曲霉SL2-111产果胶酯酶的纯化与性质

通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛柱层析3个步骤,从黑曲霉SL2-111发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酯酶。经SDS-PAGE测定其分子质量约为48.8ku。最适pH值和最适温度分别为5.8和60℃。在50℃以下,pH值5.8-6.2之间酶活力相对稳定。     

豆豉纤溶酶活性检测及其纯化研究

通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测定收集到的豆豉中纤溶酶的活性,实验结果显示,采集于贵州南明蔡家关的豆豉样品DC-H8的纤溶酶活性最高,达到了285.759IU/mL.以该豆豉样品为研究对象,对其中的纤溶酶进行了纯化研究,实验确定的最佳纯化方案为:取一定体积的豆豉纤溶酶粗酶液,在低温(4℃)下,加入4％的活性炭粉末脱色35min;在分段盐析中,首先选择15％饱和度的硫酸铵除去杂蛋白,再用75％饱和度的硫酸铵使纤溶酶充分沉淀分离;最后用葡聚糖凝胶G-50层析分离纯化纤溶酶,收集具有较高纤溶活性的组分,得到了纯化的酶液.最终得到的豆豉纤溶酶酶液纯化倍数达到了27.74倍,活性回收率69.7％,比活力达到了13946.1IU/mg.     

内生多黏类芽孢杆菌纤溶酶的纯化及其体外溶栓作用

植物内生菌株 EJS-3 发酵液经离心除菌,硫酸铵分级沉淀,Hiprep phenyl FF 疏水层析,RESOURCEM Q离子交换层析和Sephacryl S-300HR 凝胶过滤,获得电泳纯的多黏芽孢杆菌纤溶酶(PPFE-I),聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量为63kD,高效液相色谱法(HPLC)鉴定其纯度为94.1%。每升发酵液中可获得1.6mg 活性蛋白,每毫克蛋白活力达2096IU,纯度提高了14.5 倍,回收率为3.3%。纯化后的纤溶酶PPFE-I 具有明显的体外溶栓作用。     

毛云芝菌漆酶的分离纯化和性质研究

将发酵液经真空抽滤后得粗酶液,以硫酸铵为盐析剂进行分级盐析沉淀、再经DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析对漆酶进行分离纯化,用SDS-PAGE证明可获得纯的漆酶,纯化倍数为183.69倍,酶活回收率为24.77%。实验表明,该酶在30℃条件下具有较高的稳定性;在pH3.4～5.8范围内的相对酶活均在80%以上,漆酶稳定性较好,pH3.8的时候漆酶的稳定性最好。     

克氏原螯虾壳膜几丁质酶的分离纯化

本研究以克氏原螯虾虾壳为材料,探讨克氏原螯虾壳膜中几丁质酶的分离纯化方法。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、苯基疏水层析和DEAE-32阴离子交换层析,获得比活力为44.93 U/mg、纯化倍数约16.28倍的电泳纯的几丁质酶制品。结合SDS-PAGE和飞行质谱测出该酶分子量为37.7 kDa,为单亚基蛋白。本实验的分离纯化方法可行,为后续酶学性质的研究提供了基础。     

蚯蚓血纤蛋白溶酶提取工艺研究

以新鲜蚯蚓为材料,先采用硫酸铵沉淀出粗酶,再用Ｓｅｐｈａｄｅｘ－５０,ＤＥＡＥ－纤维素层析方法从蚯蚓粗酶中分离纯化出血纤蛋白溶酶,为开发、生产纤溶酶提供参考。     

大麦芽极限糊精酶的分离纯化及酶学特性分析

将大麦芽提取的极限糊精酶粗酶液,利用硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤色谱等分离方法对极限糊精酶进行逐步分离纯化。结果表明：纯化倍数为31.23,回收率为8.81%。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,图谱显示样品具有较高的纯度,分子质量约为97kD。同时研究了纯化前后极限糊精酶在不同作用环境下酶的活性变化,发现纯化后样品在温度45℃和pH 5.5左右具有最大酶活性,与粗酶液中酶活性相比具有明显差异。在体系中添加不同浓度的金属离子,结果发现,Mg2+、Ca2+、Mn2+在浓度较低时,对酶活性具有激活作用,而浓度较高时,则具有抑制作用;整体上,K+对酶活性影响不大;Zn2+、Fe2+对酶活性具有抑制作用。     

分离纯化提高鸡肝酯酶对农药抑制响应的研究

本文对鸡肝酯酶粗酶液分别进行了硫酸铵分级盐析、硫酸铵分级盐析+透析和硫酸铵分级盐析+排阻色谱三种分离纯化操作,并采用四种结构不同的有机磷、氨基甲酸酯类农药,考察了不同的分离纯化操作对鸡肝酯酶对农药抑制响应的影响。发现经过这三种分离操作后,酯酶对农药抑制的响应程度显著提高,其被四种农药抑制的程度分别提高了6.49~11.30%、14.30~26.26%和10.95~39.87%,而敏感酯酶回收率分别为86.07~89.96%、66.60~73.57%和33.01~41.62%。由于分级盐析+排阻色谱的回收率过低,分级盐析+透析操作对于大规模的检测用酶制备更为实用。此外,研究还发现对这四种农药较敏感的酯酶均集中地分布在相同的分离部分,因此推测鸡肝酯酶粗酶液中对农药抑制敏感的酯酶可能是一种酶或几种溶解性质及分子量都比较接近的酶的混合。     

甜菜果胶的醇析工艺研究

乙醇沉淀法是纯化果胶的工业化方法,应用广泛。本文以甜菜果胶为研究对象,考察了醇析p H、乙醇浓度等对甜菜果胶的醇析率、物化特性的影响;通过zeta电位表征甜菜果胶在醇析过程中的分子相互作用,并采用通过高效液相体积排阻色谱(HPSEC)、高效阴离子色谱(HPAEC)和高效液相色谱(HPLC)等技术分析醇析所得甜菜果胶的分子结构。研究结果表明:纯化前后的SBP醇析率均在p H为2.5,体系乙醇浓度为71.25%时达到最大,分别为96.81%和57.23%;SBP的重均分子量范围为145.07~404.27 kg/mol;含有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖等五种中性糖,范围为16.23~17.83%。SBP溶液初始p H与体系乙醇浓度在一定范围内对SBP的水合作用有影响,醇沉所得SBP的结构受到了醇析条件的影响。     

Pectin lyase is a key enzyme in the maceration of potato tuber

The maceration of potato tuber (Solanum tuberosum cv Bintje) by technical enzyme preparations was examined with the aid of fluorescence microscopy using fluorescein diacetate as a dye. Treatment with Pectinex Ultra-SP-L from Aspergillus aculeatus resulted in a higher release of single viable cells and smaller clumps of cells than treatment with Rohament P from Aspergillus niger. Fractions with high pectin lyase and low polygalacturonase activity obtained by anion exchange chromatography of Pectinex Ultra SP-L showed the highest degree of maceration. When two different cloned polygalacturonases (PG1 and PG2) and a cloned pectin lyase (PL1) from A aculeatus were examined, the highest degree of maceration was observed with PL1. In conclusion, pectin lyase is probably the main enzyme in Pectinex Ultra-SP-L responsible for the maceration of potato tuber. © 1997 SCI.     

表面活性剂稳定性碱性蛋白酶纯化及性质研究

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)XG12发酵液中分离纯化表面活性剂稳定性碱性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了42.6倍,回收率为25.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子质量约为29.5kD。在pH7.0～11.0范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH值为10.0,最适作用温度40℃。Mg2+、Ca2+及Mn2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。酶分别对终质量浓度为0.1g/100mL的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂CTAB和体积分数为1%的非离子型表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100以及氧化剂均具有很强的稳定性。     

Evaluation of enzymes produced from yeast

Pichia pinus was found to be capable of growing on mango wastes, producing pectinase (pectin lyase, EC-4.2.2.10) and lactase (beta-galactosidase, EC-3.2.1.23) enzymes. The two enzymes were successively purified by precipitation with ammonium sulfate followed by chromatography on Sephadex G-120. The purification procedure provided 1,846 and 929 fold purification with 20.6 and 24% yield recovery of pectinase and lactase, respectively. the km value of pectinase was 0.33% for pectin at pH 4.5 and that for lactase was 0.166% for lactose at pH 7.0. The purified enzymes, pectinase and lactase are stable up to 50 degrees C for 60 and 45 min, respectively, with 20 and 35% loss of their activity. Gel filtration on Sephadex G-200 indicated that the molecular weights of the purified pectinase was 90 x 10(3) Dalton and of lactase 115 x 10(3) Dalton. On the basis of the evaluation tests done, the enzymes were considered to have a potential technological interest as treating mango pastes (residues left after mango juice preparation) with the two prepared enzymes resulted in an increase of the colour intensity, total carbohydrate content and juice yield. Treating milk with the purified lactase also showed an increase in the total carbohydrate and reducing sugar produced.     

红毛藻藻红蛋白的分离纯化及性质研究

从红毛藻(Bangiafusco-purpurea)中分离纯化得到纯度较高(A565/A280为5.0)的藻红蛋白(phycoerythrin,PE)。纯化过程包括:硫酸铵分级沉淀,阴离子交换柱层析,凝胶过滤柱层析。通过扫描藻红蛋白的紫外可见光谱,确定其为R-藻红蛋白。用SDS-PAGE及银染色法测定了组成R-藻红蛋白各亚基的相对分子量。并研究了pH值、温度、光照等理化因子对R-藻红蛋白稳定性的影响。     

猕猴桃果胶纯化及分子结构信息解析

猕猴桃果胶来源量大,纯化后可用于食品制造。解读和求证它的分子结构信息,为其生物学功能提供理论依据。本研究将猕猴桃果胶经DEAE-Cellulose 52阴离子交换柱纯化,采用高效液相凝胶渗透色谱及高效液相离子色谱、紫外光谱和红外光谱等现代技术,解析猕猴桃精制果胶组分、分子质量、碳链一级结构和高级结构官能团。结果表明,猕猴桃果胶至少包括3 个组分,其中酸性果胶1（AP-A1）分子质量524.31 kD,占84.8%,是猕猴桃果胶的主要成分;而中性果胶（AP-N）和酸性果胶2（AP-A2）分子质量仅为281.89 kD和273.88 kD。结构解析,AP-A1主要由D-半乳糖和D-木糖聚合而成,指纹区显示其碳链是由吡喃糖以α-糖苷键连接,且特征区同时存在C＝O和对称、非对称-COO基团,属于典型大分子果胶结构;而AP-N和AP-A2组分中无C＝O结构,且碳链中同时兼备α或β-糖苷键,属于非典型果胶低聚多糖结构。     

刺芹侧耳木质素降解酶纯化及对染料脱色作用

对Pleurotus eryngii Co60-7菌株发酵液中木质素降解酶的分离纯化过程进行了研究,设计了一条主要由加盐沉淀和离子交换组成的分离纯化路线。通过35%硫酸铵饱和度的初沉和75%硫酸铵饱和度二沉可最大程度去除发酵液中的杂蛋白并获得目标蛋白,蛋白回收率为90.8%,纯化因子为3.81。用DEAE-SepharoseTMFast Flow进行三步洗脱层析,可较好地实现发酵液中目标蛋白的捕获。经过该纯化路线,木质素降解酶蛋白回收率达75.42%,纯化因子为10.55。经SDS-PAGE和Native-PAGE电泳分析,洗脱液DEⅡ中含有3种木质素降解酶组分。用该酶液进行溴酚蓝、亚甲基蓝和刚果红降解实验,结果表明该木质素降解酶液对3种染料都有不同程度的降解,染料间结构的差异会影响其降解效率。     

采用盐析及Q Sepharose FF分离纯化酪蛋白胃蛋白酶水解物中的酪蛋白糖巨肽

本文探讨了利用了（NH4）2SO4分级沉淀、透析脱盐及Q—Sepharose FF层析分离纯化酩蛋白的胃蛋白酶水解物中的CGMP的工艺。结果表明：采用60％饱和度的（NH4）2SO4盐析，可从上清液中直接回收高纯度CGMP，得率为0．71％。低饱和度的（NH4）2SO4可有效脱除杂蛋白。脱盐粗提物CGMP Q—Sepharose FF层析条件为：pH8．5、20mmol／L Tris缓冲液平衡上样，用含0．3mol／L NaCl、20mmol、pH7．1的Tris缓冲液洗脱：浓缩物最大上样量为34．2mg蛋白／ml树脂。利用优化的工艺对水解液层析纯化，纯化产物得率约为2．19％（以酪蛋白汁），总结合态唾液酸回收率为87．4％（以酶解液中的唾液酸汁），糖基化度可提高到0．472以上。整个工艺路线简使、快捷、成本较低，适合工业化生产。     

胡椒经地衣芽孢杆菌发酵脱皮过程中的主要酶系及pH值变化

采用地衣芽孢杆菌进行静置液态发酵对胡椒进行脱皮,与生产实践中传统水沤法脱皮对比,研究二者发酵脱皮过程中的果胶酶、木聚糖酶、纤维素酶和发酵液pH值的动态变化。结果表明：在发酵脱皮过程中,两种方法的聚半乳糖醛酸酶(PG)和果胶裂解酶(PL)变化规律相似,都出现两次酶活力高峰;而纤维素酶活力都很低,果胶酯酶(PE)酶活力都比较高;在传统水沤法中木聚糖酶活力出现两个高峰,而在发酵法中木聚糖酶活力在脱皮后期逐渐上升;pH值变化总趋势也相似,脱皮完成时pH值均在5～5.5之间。由此推知,胡椒鲜果发酵脱皮过程中果胶酶系起主要作用,脱皮前期PG、PL先作用于果胶类物质,破坏胶质复合体的稳定结构,PE再作用于果胶分子,形成果胶酸,同时pH值降低,脱皮后期木聚糖酶活力上升,半纤维素降解加快,在多种酶的协同作用下,胡椒鲜果最终完成彻底脱皮。