免疫亲和层析及其在真菌毒素检测中应用

该文简介免疫亲和层析工作原理,载体要求与选择,免疫亲和柱制备与使用,重点综述免疫亲和层析在黄曲霉毒素,赭曲霉毒素,玉米赤霉烯酮,脱氧雪腐镰刀菌烯醇,伏马毒素,T-2毒素等真菌毒素检测中应用最新进展。     

肉制品中真菌毒素污染现状与控制研究进展

简要介绍了肉制品中常见真菌毒素(黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、展青霉素、桔霉素)的来源及其危害,重点介绍了肉制品中常见真菌毒素的污染现状及其控制方法,并展望了肉制品中真菌毒素未来的研究方向。     

粮油食品中真菌毒素的LC-MS法检测

粮油食品中常见的真菌毒素有:黄曲霉毒素、赭(棕)曲霉毒素、展青霉毒素、玉米赤霉烯酮、串珠镰刀菌毒素及脱氧雪腐镰刀菌烯醇等,因含量较低,用常规方法检测不出来。用LC-MS检测,灵敏度高、前处理比较简单,结果准确可靠,在检测食品中真菌毒素上前景广阔。     

多功能柱净化-超高效液相色谱串联质谱法同时测定水产品中11种真菌毒素

建立了同步测定水产品中黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-Ac DON)、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-Ac DON)、镰刀菌烯酮(Fus-X)等11种真菌毒素的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。试样样品以乙腈/水溶液(84+16)提取,Myco Spin 400多功能柱净化,Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18柱分离,多反应监测(MRM)模式进行定量与定性分析,外标法定量。结果表明,11种目标物在各自的线性响应范围内线性关系良好,相关系数(r)≥0.9918,定量限(LOQ)为0.1~20.0μg/kg,加标平均回收率(n=3)为62.8%~115.3%,相对标准偏差(RSD)为2.6%~19.0%。该方法前处理简单、净化效果好、灵敏度高、重现性好,适合于水产品中痕量真菌毒素的多残留快速检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中24 种真菌毒素

运用基质分散固相萃取净化,建立牛奶中24 种真菌毒素（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、T-2毒素、HT-2霉素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、交链孢霉单甲基醚、交链孢酚、腾毒素、细交链孢菌酮酸）多残留检测的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品经80%乙腈溶液（体积分数）提取,通过基质分散固相萃取净化,氮吹至近干,1 mL 50%乙腈溶液（体积分数）复溶,采用超高效液相色谱-串联质谱进行测定。经ACQUITY UPLC HSS T3反相柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）分离,梯度洗脱,采用电喷雾离子源-多反应监测模式采集。24 种目标物的相关系数（R2）均大于0.985,加标回收率为71.0%～123.0%,相对标准偏差均小于10%。该方法具有操作简单、重复性好、灵敏度高、杂质干扰小等特点,可以用于牛奶中24 种真菌毒素的检测。     

超高效液相色谱串联质谱法检测谷物中8种真菌毒素

建立了液质联用法同时测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、玉米赤霉烯酮共8种真菌毒素谷物中的含量。样品经乙腈-水溶液提取,通过多功能净化柱净化、Waters Acquity UPLC? BEH C18色谱柱分离、超高效液相色谱串联质谱系统测定,脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其衍生物同位素内标法定量,黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮外标法定量。结果表明,8种真菌毒素在线性范围内线性相关性R~2≥0.999,检出限在0.3~1.0μg/kg之间,加标回收率在72.2%~101.7%之间,相对标准偏差在1.22%~9.69%之间。该方法操作简单、灵敏度高、回收率好,适用于谷物及其制品中多种真菌毒素的同时检测。     

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定谷物中的8种真菌毒素

建立了谷物中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3–乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15–乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇共8种真菌毒素的测定方法。样品采用改良的Qu ECh ERS方法进行提取,用超高效液相色谱串联质谱仪进行测定。8种毒素的线性相关系数(R2)均不小于0.998,检出限为0.3~1.0μg/kg,加标回收率为76.5%~113.4%,相对标准偏差为0.78%~5.03%。该方法简单快速、准确、灵敏度高,可适用于谷物及其制品中多种真菌素的同时分析。     

高效液相色谱法测定粮食中真菌毒素的效果评价

本实验依据国家标准GB/T 5009.111,GB/T 5009.96和GB/T 5009.209中高效液相色谱法分别测定小麦样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、赭曲霉毒素A(OTA)以及玉米赤霉烯酮(ZEN)这3种毒素的含量.按照检疫检验相关标准和文件要求,对该方法实践操作后结果的不确定性展开评定.结果表明:本次试验...     

免疫亲和柱净化-HPLC法测定小麦粉中的黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法。小麦粉样品经乙腈-水振荡提取,三合一免疫亲和柱净化后,采用双通道荧光检测器串联光化学衍生器同时测定黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮,二极管阵列检测器测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇。样品中各真菌毒素平均加标回收率为74.8%~105.2%,相对标准偏差为1.96%~6.26%。此方法可用于实验室开展小麦中3种真菌毒素含量的检测。     

2022年昭通市新收获玉米真菌毒素污染情况分析

目的：调查分析2022年云南省昭通市新收获玉米真菌毒素污染情况。方法：采集2022年昭通市各县区100份玉米样品,分别采用高效液相色谱-柱后衍生法、免疫亲和层析净化高效液相色谱法、液相色谱法测量黄曲霉毒素B₁、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮。结果：71份玉米样本未检测出真菌毒素,29份样本检测出真菌毒素,所有样本真菌毒素均未超标,脱氧雪腐镰刀菌烯醇总体检出率最高。盐津县有1份检出3种真菌毒素的玉米样本,巧家县有3份检出2种真菌毒素的玉米样本,且脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮检出率最高,巧家县和绥江县所收样本脱氧雪腐镰刀菌烯醇检出率最高,巧家县和水富市所收玉米样本赤霉烯酮检出率最高。结论：昭通市2022年新收获玉米真菌毒素污染情况在合理范围内,盐津县、巧家县新收获玉米易受真菌毒素污染,需加强关注。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中黄曲霉毒素B1和M1的方法研究

应用超高效液相色谱-串联质谱联用技术（UPLC-MS/MS）,在多反应离子检测（MRM）方式下对食品中的黄曲霉毒素B1（AFB1）和M1（AFM1）污染量进行检测.样品经乙腈-水混合试剂提取,中性氧化铝柱净化,经Agilem ZORBAX Eclipse plus C18色谱柱（100 mm×4.6 mm,1.8 μm）,以甲醇和10 mmol/L NH4Ac溶液（含0.1％的甲酸）为流动相洗脱分离,以MRM方式进行定量分析.AFB1和AFM1分别在0.12～6.12 μg/L和0.11～2.28 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相对标准偏差（RSD）＜5％,加标回收率为81.3％～97.2％.该方法具有低成本、准确、快速、简便、灵敏度高等优点,可满足我国对AFB1和AFM1检测限要求.     

牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的快速测定

采用免疫亲和柱－荧光光度法快速测定了牛乳及乳制品中黄曲霉毒素M1。试样经过离心、脱脂、过滤后滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力，黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上，用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20的混合液通过分离柱洗脱；加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度，衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1，检测低限为0．1μg/kg；在0．1－1．0μg/kg范围内，回收率为89．6％－96．1％，变异系数为0．52％－5．8％，分析一个样品的时间小于30min，分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质，结果表明，本方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。     

Comparison of two Analytical Methods (ELISA and LC-MS/MS) for Determination of Aflatoxin B1 in Corn and Aflatoxin M1 in Milk

The aim of this paper is to assess the closeness of agreement between results of ELISA and LC-MS/MS methods for determination of aflatoxin B₁ in corn and aflatoxin M₁ in milk. Samples of corn (n=100) and milk (n=250) were simultaneously analyzed using ELISA and LC-MS/MS methods, after the severe drought that affected Serbia in summer 2012 resulting in occurrence of aflatoxin B1 in corn and aflatoxin M₁ in milk. Regression analysis showed higher level of agreement between aflatoxin B₁ samples (R²=0.994), compared to aflatoxin M₁ samples (R²=0.920). However, both techniques were satisfactory in meeting the requirements for official control purposes.     

Aflatoxins and ochratoxin A and their Aspergillus causal species in Tunisian cereals

ABSTRACT

Occurrence of aflatoxins (AFs) AFB1, AFB2, AFG1, AFG2 and ochra toxin A (OTA) was studied in 65 samples of stored and freshly harvested wheat, barley and maize collected in Tunisia. The mycotoxins were simultaneously extracted and quantified by high performance liquid chromatography. Determination of AF-producing (section Flavi) and OTA-producing Aspergillus species (sections Nigri and Circumdati) was conducted in these samples by species-specific polymerase chain reaction (PCR). Results showed that most of maize samples were contaminated with AFs, data after storage showing lower values than those collected at harvest. All contaminated maize samples contained AFG1 and AFG2, among which 27.78% also had AFB1 and AFB2. This AFs pattern was consistent with the A. parasiticus toxin profile. A. flavus however showed the highest frequency in maize but was also found in barley and wheat where no AFs were detected. In contrast, OTA was neither found in maize nor in barley and only one wheat sample contained OTA. A. niger was the only OTA-producing species detected.     

Aflatoxin determination in peanut butter by enzyme-linked immunosorbent assay

High specificity, high titre antisera to aflatoxins B₁ and G₁ have been produced by immunisation of rabbits with a bovine serum albumin-aflatoxin B₁ conjugate. The antiserum has been used to set up an indirect, double antibody microtitration plate enzyme-linked immunosorbent assay with a limit of detection of 0.1 pg toxin per well. The assay has been validated for application to peanut butter, and demonstrates many advantages over conventional methodology, including the requirement for minimal sample preparation before assay, its technical simplicity, and its potential high sample through-put.     

乳杆菌及不同pH值对黄曲霉生长与产毒的影响

为探讨植物乳杆菌及不同PH值对黄曲霉生长与产毒的影响,将植物乳杆菌与黄曲霉孢子同时加入到MRS肉汤和先厌氧培养植物乳杆菌后再加入黄曲霉孢子;以乳酸将LTB培养基的初始PH值调整为3．0,4．0和5．0,以PH值为6．8为对照组,在LTB培养基中接种黄曲霉孢子悬液。上述试验均在28℃培养15d,在培养的第3、6、9、12和15天测定培养液中的PH值,黄曲霉素素B1和黄曲霉菌丝重量。结果显示：植物乳杆菌可显抑制黄曲霉生长（P＜0．05）,同时检测不到黄曲霉毒素B1。随着LTB培养液中PH值的降低,黄曲霉毒素B1的量增加,在PH3．0组,差异有极显性（P＜0．01）,各组间黄曲霉素菌丝量未见显性差异,结果表明：植物乳杆菌可显抑制黄曲霉生长与产毒。在PH值3．0－5．0范围内,乳酸可以刺激黄曲霉毒素B1的产生。     

食品中黄曲霉毒素B1污染研究进展

农作物（包括玉米、小麦等）在生长、收获和储存的过程中,容易受到产毒真菌及其代谢毒物（霉菌毒 素）的污染;其加工形成的粮、油等食品及被污染饲料饲养所得的畜产品进入食物链后,易引发人类急、慢性中 毒。黄曲霉毒素B1是众多霉菌毒素中较常见且毒性较高的一种,过量摄入具有致癌、致畸形、免疫抑制等毒性效 应。本文综合国内外研究进展,从食品中黄曲霉毒素B1污染发生的来源及影响因素、黄曲霉毒素B1的分子结构与毒 性、致病机理、限量标准、风险评估及防控等方面对食品中黄曲霉毒素B1污染展开综述。     

Aflatoxin B1 contamination of shrimp feeds and its effect on growth and hepatopancreas of pre-adult Penaeus monodon

A survey of aflatoxin B₁ (AFLB₁) levels in commonly used commercial shrimp finisher feeds in the Philippines showed a various range of values from not detected to 120 μg kg^?1 using high-performance thin-layer chromatography. Six experimental diets were prepared to contain various levels of AFLB₁ based on survey results to determine the effects of such contamination in pre-adult shrimp Penaeus monodon (17.5 ± 0.6 g). Results showed that shrimps fed diets containing AFLB₁ greater than or equal to 73.8 μg kg^?1 gave comparatively poor growth rate and higher susceptibility to shell diseases. No AFLB₁ residues were detected in sampled whole shrimp tissues after 62 days of exposure to AFLB₁ containing diets indicating a low potential for transmission of the toxin from edible shrimp tissues to consumers. Histopathological alterations in the hepatopancreas of shrimp chronically exposed to AFLB, were observed in all samples. The degree of alterations correlated with the level of AFLB₁. Based on growth performance, pre-adult shrimps can tolerate AFLB₁ levels of up to 52.3 μg kg^?1 in the feeds although histopathological changes were already evident in the tissues of shrimps given diets with 26.5 μg kg^?1 AFLB₁.     

月饼中黄曲霉毒素B1检测前处理方法的改进

通过对伍仁、蛋黄莲蓉、枣泥、水果、火腿、冰皮和吞拿鱼七种口味,共70批次月饼进行甲醇-水(1∶1,V/V)和三氯甲烷二次抽提两种处理方法对比,结果显示两种方法检测仅伍仁和吞拿鱼月饼差异显著,其余不显著.甲醇水提取方法检测结果重复性良好,加标回收率为84.0％114.7％,提高了月饼黄曲霉毒素B1的检测效率.     

云南省部分食品黄曲霉毒素B1膳食暴露风险评估

目的评估云南省部分食品中黄曲霉毒素B1(aflatoxinB1,AFB1)膳食暴露风险。方法结合2012～2017年云南省部分地区市售大米及其制品、玉米及其制品等6类主要食品的黄曲霉毒素B1含量数据,以及本省营养监测消费量数据,采用点评估方法对云南省居民AFB1暴露水平进行评估。结果云南省全人群来源于6类食品的AFB1暴露量为1.02×10-3μg/kgbw,其中来源于大米的AFB1暴露量最高,占总暴露量的50.98%,其次是玉米及其制品,占18.63%。总暴露量为大城市贫困农村中小城市一般农村;云南省居民AFB1膳食暴露量对肝癌发病率的贡献为0.040/10万人;各地区居民暴露边界比(margin of exposure, MOE)值介于144.07～180.85之间。结论云南省AFB1污染状况相对良好,仍需持续关注; 6类食物中大米、玉米是云南省AFB1的主要暴露来源。