鸭肝丁酰胆碱酯酶的纯化与酶学性质研究

目的:获得鸭肝丁酰胆碱酯酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝丁酰胆碱酯酶;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子量测定。结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的丁酰胆碱酯酶,纯化倍数为156.45倍,酶活回收率为23.60%,比活达17.21U/mg。酶相对分子量为388.85kDa,亚基相对分子量为64.70kDa。推测该酶由六个相同亚基构成。该酶最大紫外吸收为278nm。酶催化碘化硫代丁酰胆碱水解的最适pH为8.0,最适温度为35℃。该酶在pH3.0～10.0区域较稳定;在40℃以下处理1h,酶活力保持稳定。Zn2+、Mn2+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用。以碘化丁酰硫代胆碱为底物,测定该酶的表观Km为71.15μmol/L,没有过量底物抑制现象。结论:成功分离纯化获得丁酰胆碱酯酶,该酶具有较好的酸碱耐受性。     

鸭肝丁酰胆碱酯酶的纯化与酶学性质研究

目的:获得鸭肝丁酰胆碱酯酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝丁酰胆碱酯酶;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子量测定。结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的丁酰胆碱酯酶,纯化倍数为156.45倍,酶活回收率为23.60%,比活达17.21U/mg。酶相对分子量为388.85kDa,亚基相对分子量为64.70kDa。推测该酶由六个相同亚基构成。该酶最大紫外吸收为278nm。酶催化碘化硫代丁酰胆碱水解的最适pH为8.0,最适温度为35℃。该酶在pH3.0～10.0区域较稳定;在40℃以下处理1h,酶活力保持稳定。Zn2+、Mn2+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用。以碘化丁酰硫代胆碱为底物,测定该酶的表观Km为71.15μmol/L,没有过量底物抑制现象。结论:成功分离纯化获得丁酰胆碱酯酶,该酶具有较好的酸碱耐受性。      

鸡血清胆碱酯酶的提取纯化工艺研究

以鸡血清为实验材料提取农药残留快速检测酶制剂胆碱酯酶,确定了鸡血清胆碱酯酶的最佳提取和纯化工艺,即对粗酶液进行盐析、透析、吸附层析和葡聚糖凝胶柱层析等实验方法。结果表明:鸡血清胆碱酯酶经过硫酸铵盐析,透析、吸附层析和Sephadex G-100柱层析处理后,酶活力分别提高了1.548、.21、9.03、13.00倍,冷冻干燥后酶活力提高了13.58倍,比酶活力由粗酶液中的0.538 OD值/mg提高到层析后的7.304 OD值/mg。     

马血清中胆碱酯酶的分离纯化及其性质研究

传统对血清中胆碱酯酶的分离纯化步骤繁琐且纯化倍数低,本实验采用硫酸铵分级沉淀、透析,再经DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤层析的方法,对马血清中胆碱酯酶进行分离纯化,得到胆碱酯酶纯品,纯化倍数达101.3倍。经SDS-PAGE不连续凝胶电泳显示为单一条带,并测定其相对分子量为72000Da。胆碱酯酶性质研究的实验结果表明,该酶最适温度为35℃,最适pH为7.4,对底物氯化乙酰胆碱的Km值为0.192mmol/L,最适底物浓度为4mmol/L,高浓度底物对酶有抑制作用,该酶对热不稳定。      

马血清中胆碱酯酶的分离纯化及其性质研究

传统对血清中胆碱酯酶的分离纯化步骤繁琐且纯化倍数低,本实验采用硫酸铵分级沉淀、透析,再经DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤层析的方法,对马血清中胆碱酯酶进行分离纯化,得到胆碱酯酶纯品,纯化倍数达101.3倍。经SDS-PAGE不连续凝胶电泳显示为单一条带,并测定其相对分子量为72000Da。胆碱酯酶性质研究的实验结果表明,该酶最适温度为35℃,最适pH为7.4,对底物氯化乙酰胆碱的Km值为0.192mmol/L,最适底物浓度为4mmol/L,高浓度底物对酶有抑制作用,该酶对热不稳定。     

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测.结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷＞乐果＞敌敌畏＞敌百虫 乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15 min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min 用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1％.     

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测。结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷>乐果>敌敌畏>敌百虫。乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min。用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1%。      

驴血清胆碱酯酶的生化性质

从不同的动物组织中筛选胆碱酯酶,研究胆碱酯酶的酶学性质和检测有机磷农药残留的条件。实验结果表明:驴血清胆碱酯酶活力较高,确定驴血清为检测有机磷农药的最佳酶源。胆碱酯酶最适反应温度为35℃,最适pH值为7.5～8.0,底物碘化硫代丁酰胆碱对驴血清胆碱酯酶没有过量底物抑制现象,最适浓度为5mmol/L;该酶热稳定性较好,在35℃保温60 min,酶活力基本不变。以有机磷农药—敌敌畏检测为例,对胆碱酯酶的半抑制浓度IC50为0.124 mg/mL,抑制时间为15 min。     

鸭血清胆碱酯酶抑制法检测果蔬农药残留的研究

对农药残留快速检测方法——胆碱酯酶抑制法进行了研究。以二次盐析后的鸭血清丁酰胆碱酯酶(BChE)为农药残留的检测用酶,碘化硫代丁酰胆碱(BTChI)为底物,5-5'-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,410nm比色测定吸光值变化,计算胆碱酯酶的抑制率,从而推算农药残留情况。当抑制率大于35%时,表明农药含量超标。检测过程只需20～40min,可同时检测多个样品,与气相色谱检测结果的符合率大于85%。     

农药残留快速检测用酶——胆碱酯酶的筛选

在常见易得的前提下,以猪血、鸡血、鸭血、链鱼和鸡肝为实验材料提取胆碱酯酶,通过比较不同来源、不同动物组织胆碱酯酶的活性,并进行了胆碱酯酶对常见农药的敏感性实验,结果表明:鸭血清BChE酶含量丰富、对常见的有机磷农药及氨基甲酸酯类农药较敏感、且来源广泛、廉价易得。可作为果蔬农药残留的快速检测用酶。      

分离纯化提高鸡肝酯酶对农药抑制响应的研究

本文对鸡肝酯酶粗酶液分别进行了硫酸铵分级盐析、硫酸铵分级盐析+透析和硫酸铵分级盐析+排阻色谱三种分离纯化操作,并采用四种结构不同的有机磷、氨基甲酸酯类农药,考察了不同的分离纯化操作对鸡肝酯酶对农药抑制响应的影响。发现经过这三种分离操作后,酯酶对农药抑制的响应程度显著提高,其被四种农药抑制的程度分别提高了6.49~11.30%、14.30~26.26%和10.95~39.87%,而敏感酯酶回收率分别为86.07~89.96%、66.60~73.57%和33.01~41.62%。由于分级盐析+排阻色谱的回收率过低,分级盐析+透析操作对于大规模的检测用酶制备更为实用。此外,研究还发现对这四种农药较敏感的酯酶均集中地分布在相同的分离部分,因此推测鸡肝酯酶粗酶液中对农药抑制敏感的酯酶可能是一种酶或几种溶解性质及分子量都比较接近的酶的混合。     

鸡肝酯酶在有机磷和氨基甲酸酯类农药检测中的应用研究

利用农药对酯酶活力的抑制反应,分别采用游离的和固定化的鸡肝酯酶,对不同浓度的敌敌畏、敌百虫、马拉硫磷和西维因进行了测定。结果发现,在低浓度时,农药浓度的对数值与其对应的酶活抑制率之间具有较好的线性关系;并且与游离鸡肝酯酶相比,固定化酶不同程度地降低了对农药检测的下限值。敌敌畏、马拉硫磷和西维因的检测下限值依次从游离酶检测时的0．001、4．34和2．52mg/L,降低到了用固定化酶检测时的0．00004、0．0004和0．78mg/L。固定化的鸡肝酯酶对敌百虫的检测下限改善不大。     

从鸡骨中制取明胶的加工工艺

以鸡腿骨为原料 ,采用碱法 (浸灰法 )制备鸡骨明胶。探讨了浸灰过程Ca(OH) 2 浓度、温度、浸灰时间对明胶提取率、明胶粘度和胶凝性的影响 ,同时优化提取工艺条件。试验表明 :明胶最佳提取条件为温度 70℃ ,pH 5。采用方差和响应面分析优化浸灰工艺条件为 :Ca(OH) 2 质量分数 0 1 % ,温度 1 0℃ ,浸灰时间 6d。浸灰处理可以去除杂蛋白 ,使明胶纯度有所提高 ,粘度和冻力都有所上升     

预乳化鸡皮对鸡肉香肠品质的影响

以添加鸡皮为对照组（C0,鸡皮添加量30%（质量分数,下同））,添加预乳化鸡皮为处理组,即T1组（鸡皮20%＋预乳化鸡皮10%）、T2组（鸡皮15%＋预乳化鸡皮15%）、T3组（鸡皮10%＋预乳化鸡皮20%）和T4组（预乳化鸡皮30%）,研究预乳化鸡皮对鸡肉香肠品质特性的影响。测定的品质特性指标包括近似组成、蒸煮损失、乳化稳定性、pH值、表观黏度、色泽、质构特性和感官特性。结果表明：随着鸡皮与预乳化鸡皮添加比例的变化,鸡肉香肠的水分含量、脂肪含量、蒸煮损失、乳化稳定性、亮度、质构特性、表观黏度和整体可接受性等指标均有所改变。T2组的水分含量最高（P＜0.05）,C0和T4组的水分含量最低（P＜0.05）;C0组的脂肪含量高于各处理组（P＜0.05）;T2组的蒸煮损失、总可表达流体和脂肪分离比例、硬度、弹性和黏聚性具有最低值（P＜0.05）;各处理组的总体可接受性评分均显著高于对照组（P＜0.05）。预乳化鸡皮的添加可改善鸡肉香肠的品质特性,其中鸡皮与预乳化鸡皮的最适宜添加比例为1∶1。     

鉴别雏与普通鸡肉冻藏处理对扒鸡食用品质的影响

通过对鉴别雏和普通鸡两种原料肉冷鲜及冻藏后加工的扒鸡进行水分含量测定、食用品质(保水性、嫩度)分析、感官评定以及微观结构观察,探析不同品种原料鸡肉及冻藏处理对扒鸡品质的影响,以期对扒鸡加工的原料选择及处理提供参考。实验表明,冷鲜加工时,两个品种原料加工的扒鸡品质差异不大,但普通鸡整体感官品质略高于鉴别雏;原料肉冻藏处理会一定程度上降低扒鸡品质,且对普通鸡影响相对更大,主要体现在微观结构破坏更严重(普通鸡腿肉肌纤维直径从31.29μm显著(p0.05)下降到18.91μm;胸肉从39.07μm显著(p0.05))下降到27.62μm,剪切力值(冷鲜加工为2.88 kg,冻藏后加工为1.46 kg)显著(p0.05)下降;而鉴别雏冻藏后加工的扒鸡品质在保水性、剪切力值等方面都优于普通鸡。     

乌骨鸡深加工酶解处理条件的探索研究

对乌骨鸡进行深加工,提高蛋白质的综合利用率,增加氨基酸尤其是游离氨基酸的含量,便于人体对其吸收利用。本论文阐述了研究国际上领先的酶制剂Flavourzyme风味蛋白酶水解乌骨鸡动物蛋白质的水解条件。特点是在原来采用传统炮制工艺提取乌骨鸡有效成分的基础上采用了现代生物工程-酶解技术,对乌骨鸡进行深度水解处理,比一般的和传统的酶解有更高的产率和更好的风味及口感。确定了正交分解试验方法,分别测定水解率,进行方案组合,确定最佳处理条件。结果表明,乌骨鸡肉经90℃,10min的加热预处理可促进酶解。酶解最佳条件为:pH=7.0,温度45℃,酶与底物浓度之比为0.5LAPU/g,底物浓度11%,时间3h。     

马齿苋多糖对雏鸡生长性能、血液代谢激素和血脂的影响

选用60只28日龄雏鸡随机分为4组,每组5个重复,每重复3只,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每天分别灌服0.5 mL质量浓度为2、20、40 mg/mL的马齿苋多糖(POP),连续给药7 d,对照组灌服等量生理盐水。分别于35、42、49日龄,每重复各取1只鸡,测定生长性能、血脂及血清激素指标。结果表明,与对照组相比,不同浓度的马齿苋多糖均能不同程度地提高雏鸡日增重,降低耗料量和料重比,以试验Ⅱ组(20 mg/mL)饲料转化率最高;血清T3、IGF-1及GH浓度升高,T4呈现降低的趋势,GHRH略有升高但差异不显著;不同浓度的POP试验组雏鸡血清TG、TC和LDL-C含量均呈现降低趋势,HDL-C和HDL-C/TC呈现不同程度的提高。从整个试验期来看,试验Ⅱ组降低雏鸡血清TG、TC和LDL-C含量及提高HDL-C的效果最好。说明,马齿苋多糖通过调控血液激素水平,提高雏鸡生长性能和饲料转化率,并具有一定的降血脂功效。     

果寡糖对不同生长阶段固始鸡血液生化指标的影响

选用1日龄固始鸡公雏150只,随机分成5个处理组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮的基础上分别饲喂添加0.3%、0.5%、0.7%、0.9%果寡糖的饲粮.于21日龄和42日龄分别研究果寡糖对固始鸡血液生化指标的影响.结果表明,(1)0.5%果寡糖能显著提高21日龄和42日龄固始鸡血清总蛋白(P<0.05)、清蛋白(P<0.05)和血清无机磷(P<0.05),同时显著提高21日龄血清球蛋白(P<0.05)和血糖含量(P<0.05);(2)0.3%和0.5%果寡糖能显著提高21日龄谷丙转氨酶(GPT)(P<0.05)和谷草转氨酶(GOT)(P<0.05)活性;(3)0.9%果寡糖能显著提高21日龄血清钙含量(P<0.05);同时显著降低21日龄和42日龄血清总脂含量(P<0.05).综合分析表明,固始鸡日粮中果寡糖的添加量为0.5%时效果较好.     

啤酒烤鸡加工工艺的研究

通过详细介绍啤酒烤鸡加工过程及关键工艺的影响因素,提出啤酒烤鸡加工的规范工艺。     

云南盐津乌骨鸡与武定鸡肌肉蛋白质组学差异研究

选取云南两种具有代表性的地方优质鸡种盐津乌骨鸡和武定鸡为研究对象,采用双向电泳(2DE)分析其腿肌与胸肌中蛋白表达差异,并以基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定腿肌与胸肌中差异蛋白质点。结果表明,经双向电泳图谱分析所获得的肌肉组织蛋白点分布于pH4.0~7.0之间,其中盐津乌骨鸡腿肌、胸肌中分别检测到(1421±34)、(1329±25)个蛋白点;武定鸡腿肌、胸肌中检测到(1585±19)、(1516±28)个蛋白质点。对比分析盐津乌骨鸡与武定鸡的DE图谱,发现有178个点存在明显的表达差异,在盐津乌骨鸡中高表达的点有72个,在武定鸡中高表达的点有106个。选取的蛋白质点经鉴定主要为核纤层蛋白A、磷酸葡萄糖变位酶1、β-烯醇酶、原肌球蛋白1、三磷酸腺苷合成酶、C-反应蛋白前体、B链α-晶状体蛋白、肌酸激酶M型、乙二醛酶1、磷酸甘油酸激酶 PGK1、慢骨肌肌钙蛋白T、蛋白酶体非ATP酶调节亚单位14、热休克蛋白β-1超氧化物歧化酶、以及一些假设蛋白和非特征性蛋白。