驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测.结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷＞乐果＞敌敌畏＞敌百虫 乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15 min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min 用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1％.     

驴血清胆碱酯酶的生化性质

从不同的动物组织中筛选胆碱酯酶,研究胆碱酯酶的酶学性质和检测有机磷农药残留的条件。实验结果表明:驴血清胆碱酯酶活力较高,确定驴血清为检测有机磷农药的最佳酶源。胆碱酯酶最适反应温度为35℃,最适pH值为7.5～8.0,底物碘化硫代丁酰胆碱对驴血清胆碱酯酶没有过量底物抑制现象,最适浓度为5mmol/L;该酶热稳定性较好,在35℃保温60 min,酶活力基本不变。以有机磷农药—敌敌畏检测为例,对胆碱酯酶的半抑制浓度IC50为0.124 mg/mL,抑制时间为15 min。     

农药残留快速检测用酶——胆碱酯酶的筛选

在常见易得的前提下,以猪血、鸡血、鸭血、链鱼和鸡肝为实验材料提取胆碱酯酶,通过比较不同来源、不同动物组织胆碱酯酶的活性,并进行了胆碱酯酶对常见农药的敏感性实验,结果表明:鸭血清BChE酶含量丰富、对常见的有机磷农药及氨基甲酸酯类农药较敏感、且来源广泛、廉价易得。可作为果蔬农药残留的快速检测用酶。     

鸭肝丁酰胆碱酯酶的纯化与酶学性质研究

目的:获得鸭肝丁酰胆碱酯酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝丁酰胆碱酯酶;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子量测定。结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的丁酰胆碱酯酶,纯化倍数为156.45倍,酶活回收率为23.60%,比活达17.21U/mg。酶相对分子量为388.85kDa,亚基相对分子量为64.70kDa。推测该酶由六个相同亚基构成。该酶最大紫外吸收为278nm。酶催化碘化硫代丁酰胆碱水解的最适pH为8.0,最适温度为35℃。该酶在pH3.0～10.0区域较稳定;在40℃以下处理1h,酶活力保持稳定。Zn2+、Mn2+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用。以碘化丁酰硫代胆碱为底物,测定该酶的表观Km为71.15μmol/L,没有过量底物抑制现象。结论:成功分离纯化获得丁酰胆碱酯酶,该酶具有较好的酸碱耐受性。     

鸭血清胆碱酯酶抑制法检测果蔬农药残留的研究

对农药残留快速检测方法——胆碱酯酶抑制法进行了研究。以二次盐析后的鸭血清丁酰胆碱酯酶(BChE)为农药残留的检测用酶,碘化硫代丁酰胆碱(BTChI)为底物,5-5'-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,410nm比色测定吸光值变化,计算胆碱酯酶的抑制率,从而推算农药残留情况。当抑制率大于35%时,表明农药含量超标。检测过程只需20～40min,可同时检测多个样品,与气相色谱检测结果的符合率大于85%。     

鸡血清胆碱酯酶的提取纯化工艺研究

以鸡血清为实验材料提取农药残留快速检测酶制剂胆碱酯酶,确定了鸡血清胆碱酯酶的最佳提取和纯化工艺,即对粗酶液进行盐析、透析、吸附层析和葡聚糖凝胶柱层析等实验方法。结果表明:鸡血清胆碱酯酶经过硫酸铵盐析,透析、吸附层析和Sephadex G-100柱层析处理后,酶活力分别提高了1.548、.21、9.03、13.00倍,冷冻干燥后酶活力提高了13.58倍,比酶活力由粗酶液中的0.538 OD值/mg提高到层析后的7.304 OD值/mg。     

基于石石墨烯的丁酰胆碱酯酶传感器法快速测定水产品中的孔雀石绿

本文以壳聚糖（Chitosan）和石墨烯GS为复合修饰材料,通过交联技术固定化丁酰胆碱酯酶（BuChE）制备了BuChE/CS/GS/GCE纳米酶传感器,建立了一种快速而灵敏测定水产品中孔雀石绿（Malachite Green,MG）的方法。研究了BuChE/CS/GS/GCE纳米酶传感器修饰材料、电解质、固定酶量、抑制时间等对酶传感器响应电流的影响,优化了酶传感器法测定MG的试验条件,结果如下：修饰材料CS与GS之比为1:2、0.10 mol/L的PBS为电解质、pH 7、抑制时间为11 min、酶活是4.0 U/mL。在此条件下,该酶传感器的响应电流与电解质溶液中MG的浓度在1.0×10-7~1.1×10-6 mol/L范围内成线性关系（Ip=-6.97 C MG+22.81,R2=0.9885）,最低检测限为2.80×10-8 mol/L（S/N=3）,加标回收率在96.36%~99.78%。该方法用于水产品中MG的测定具有简捷、灵敏度高、选择性好、稳定性好、重复性好等优点,用于水产品中孔雀石绿的快速检测是可行的。     

马血清中胆碱酯酶的分离纯化及其性质研究

传统对血清中胆碱酯酶的分离纯化步骤繁琐且纯化倍数低,本实验采用硫酸铵分级沉淀、透析,再经DEAE-52离子交换层析和SephadexG-100凝胶过滤层析的方法,对马血清中胆碱酯酶进行分离纯化,得到胆碱酯酶纯品,纯化倍数达101.3倍。经SDS-PAGE不连续凝胶电泳显示为单一条带,并测定其相对分子量为72000Da。胆碱酯酶性质研究的实验结果表明,该酶最适温度为35℃,最适pH为7.4,对底物氯化乙酰胆碱的Km值为0.192mmol/L,最适底物浓度为4mmol/L,高浓度底物对酶有抑制作用,该酶对热不稳定。     

胶体金免疫层析法同时检测果蔬中克百威、水胺硫磷、百菌清及虫酰肼的应用研究

目的 研究胶体金免疫层析法同时检测果蔬中克百威、水胺硫磷、百菌清及虫酰肼残留量的适用性。方法 考察胶体金免疫层析法同时检测克百威、水胺硫磷、百菌清及虫酰肼在不同基质中的灵敏度, 并将该方法与参比方法进行比较, 验证其假阴性率和假阳性率。结果 克百威检出限为0.02 mg/kg, 水胺硫磷为 0.05 mg/kg、百菌清为3 mg/kg、虫酰肼为0.2 mg/kg, 基本满足国家标准对果蔬中这些农药的限量要求。对韭菜、大白菜进行加标实验, 均未出现假阳性及假阴性, 与参比方法无显著差异; 除丙硫克百威、丁硫克百威与克百威有交叉反应外, 水胺硫磷、百菌清及虫酰肼与非对应农药均无交叉反应。结论 该方法操作快速、准确、灵敏、简便, 适用于果蔬中克百威、水胺硫磷、百菌清及虫酰肼的同时检测。     

玉米秸秆酶解制备阿魏酰聚糖

玉米秸秆经多级旋风磨机械预处理后物理结构发生改变,更易被相应的酶水解从而释放出阿魏酰聚糖。相同酶解条件下,多级旋风磨预处理后的秸秆的阿魏酰聚糖含量是粗秸秆的3.34倍;用商品复合酶Validase TRL、HSP 6000BG和Rapidase Smart Clear,木糖苷酶及阿拉伯呋喃糖苷酶分别酶解机械预处理后的玉米秸秆,Validase TRL酶解效果最佳,阿魏酰聚糖得率为1.46μmol/g玉米秸秆,是不加酶时的3.48倍;协同酶解的最优组合为Validase TRL 100 U/g,木糖苷酶50U/g和阿拉伯呋喃糖苷酶50U/g,该条件下阿魏酰聚糖的得率为2.87μmol/g;酶解液经大孔树脂分离纯化后,阿魏酰聚糖的回收率为81.44%。     

血清蛋白质加热凝胶的形成

家畜血液中含有丰富的蛋白质。血液的主要成分——血清或血浆与卵白都有经加热可以形成凝胶的相同性质。食品中蛋白质凝胶的形成能力直接影响着食品的品质。通过对一定浓度的牛和猪的血清蛋白质加热形成凝胶强度的评价,分析了血清中主要蛋白质成分在凝胶形成过程中的作用及其机理。结果表明:牛血清的凝胶强度高于猪血清;牛血清中的白蛋白在血清加热凝胶形成过程中起着重要作用;通过加热血清蛋白,蛋白质分子间的二硫键交联形成凝胶;利用血清蛋白质经加热可以形成凝胶的性质将血清添加到食品中,不仅可以改善食品的品质,而且还可以提高食品中蛋白质的含量。     

甲基苯丙胺与蛋白偶联物的合成

研究合成甲基苯丙胺抗原.在甲基苯丙胺分子上引入偶联官能团,以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,用戊二醛法偶联合成了甲基苯丙胺抗原,并用红外光谱、紫外扫描、蛋白电泳以及胶体金免疫层析等方法进行检测.结果表明,每分子BSA连接甲基苯丙胺分子数为25;胶体金免疫层析检测结果显示合成抗原与抗体有特异性反应,具有活性.可在免疫检测中用作抗原的甲基苯丙胺与蛋白偶联物.     

鸭血浆胆碱酯酶的分离纯化和性质的研究

将鸭血浆用0．2mol／L pH7．2磷酸盐缓冲溶液等体积稀释后，以硫酸铵为盐析剂进行二次盐析、再经DEAE-52离了交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对胆碱酯酶进行分离纯化，可获得电泳纯的胆碱酯酶，纯化倍数为278．5倍，酶活回收为17．8％。实验表明，该酶的最适温度为37℃，最适pH为7．8，有过量底物抑制现象。     

Factors Influencing Serum Separation of Tomato Ketchup

The effect of tomato cultivar, breaking procedure, starting tomato paste concentration, reconstituted paste, homogenization treatment, percent total and water insoluble solids, and pH on serum separation of tomato ketchup was investigated. Homogenization, as well as increasing the total and/or the water insoluble solids of the ketchup reduced separation. Increasing the total solids of the starting tomato paste decreased the rate of separation, but increased the final amount of serum loss from the resulting ketchup. Among tomato cultivars and breaking procedures included in this study, the Peto 98 cultivar (high water insoluble solids content) and the medium break procedure (at 107.2°C after a 10 min hold at room temperature) gave ketchups with the least serum separation.     

双歧杆菌免疫血清的制备及性质分析

通过动物免疫方法制备了长双歧(B.longum)和两歧双歧杆菌(B.bifidum)的免疫血清，经ELISA检测，血清效价达到1：1280。用此血清和乳制品中常见细菌反应，未见明显交叉反应，这一结果为双歧杆菌发酵乳制品中双歧杆菌的血清学检测提供了参考。     

牛血清白蛋白与花青素纳米颗粒的特性及稳定性研究

目的：研究牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）与花青素相互作用形成的纳米颗粒的特性,及其对花青素的氧化稳定性的影响。方法：采用扫描透射电子显微镜和纳米粒度仪,研究BSA与笃斯越橘花青素形成纳米颗粒的表观形态及粒径大小,用盐析法测定BSA对花青素的结合量,并用自由基（DPPH自由基、ABTS＋·）清除方法和胃肠模拟体系分别研究BSA对花青素氧化稳定性的影响。结果：BSA-花青素在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中能通过自组装形成纳米颗粒,其纳米颗粒较BSA的粒径变小,由30～35 nm减小到15～20 nm。BSA对花青素的结合量是每摩尔BSA分子上结合的花青素为10 mol。BSA-花青素纳米颗粒较花青素的DPPH自由基、ABTS＋·清除能力明显增强。在胃模拟体系中,BSA与花青素结合对花青素稳定性没有显著性影响;在肠模拟体系中,BSA与花青素结合对花青素稳定性有显著性影响,未结合的花青素在6 h后含量降低70%左右,而有BSA结合的花青素含量几乎保持不变,表明BSA与花青素结合对花青素的氧化稳定性有明显的保护作用。     

Gelation of Bovine Serum Albumin by Glutathione

Bovine serum albumin (BSA) formed an opaque gel when incubated at 37°C with reduced glutathione (GSH). Gelation was highly dependent on concentration of GSH and pH, at 70 mM GSH and pH 8.2 BSA showed maximum gel hardness. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and the number of protein sulfhydryls revealed that gelation involves reduction of intramolecular disulfides in BSA and subsequent cross-links through intermolecular protein disulfides. Gelation was strongly inhibited by high concentrations of salts; inhibitory effects were highly dependent on species of anions, but not cations.     

膜法盐藻采收分离清液养殖盐藻的研究

通过聚丙烯中空纤维膜法采收盐藻所得的清液用于养殖盐藻,经过10 d的试验得到:清液养殖与原卤水养殖在细胞密度上没有明显差异;清液养殖盐藻体内的Pb和As含量分别是卤水养殖的1/5和1/50;用膜法采收分离清液养殖盐藻的方法是可行的.