芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

荷叶生物碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究荷叶生物碱提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的作用机理。方法:采用MTT法检测荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞生长的抑制效果并确定半抑制浓度(IC50);流式细胞仪技术测定细胞周期及凋亡情况;使用诱导剂对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法分析荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞分化程度的影响。结果:荷叶生物碱提取物(LLAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖且呈剂量时间依赖性;在G0/G1期产生阻滞,有效诱导细胞凋亡;能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,降低细胞中脂肪滴的积累。结论:荷叶生物碱提取物(LLAE)能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖及分化,揭示其可能具有预防肥胖的功效。     

紫马铃薯花色苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究紫马铃薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其机理。方法:采用MTT法检测紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对细胞生长的抑制效果,确定半抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况;对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色比色分析紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对其分化程度的影响。结果:紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖且呈剂量时间依赖性;能有效诱导细胞凋亡,同时在G2/M期产生阻滞;紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。结论:紫马铃薯花色苷提取物能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化,提示其可能具有预防肥胖的功效。     

翅果油甾醇对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

体外培养大鼠前脂肪细胞,分别以2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L的翅果油甾醇对其进行处理.采用MTT比色法检测细胞增殖情况;油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）分析过氧化物酶增殖物激活受体γ2（PPARγ2）mRNA表达情况,探讨翅果油甾醇对前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的机制.结果显示：各组细胞MTT测试OD值均低于对照组,4μmol/L及8μmol/L组细胞油红O染色的OD值及PPARγ2mRNA的表达量均显著下降.     

鸡蛋黄蛋白质水解产物制备及其对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

鸡蛋黄经脱脂得到蛋黄蛋白质,直接以MC3T3-E1细胞增殖活力为指标,对水解条件进行优化,从而制备蛋黄蛋白质水解产物(egg yolk proteins hydrolysate,EYPH)并对其促MC3T3-E1细胞增殖分化的活性进行研究。结果表明:在对比胰蛋白酶与风味蛋白酶水解过程中,发现单一胰蛋白酶反应得到产物活性最好,胰蛋白酶反应的最佳水解条件为水解时间6 h、水解温度37℃、酶与底物质量比1∶50、p H 8.0。EYPH使MC3T3-E1细胞增殖活力得到提高,为129.89%,细胞周期分析得到S期细胞增加了4.69%,这2个方面证实EYPH对MC3T3-E1细胞的增殖活力有显著的提高。EYPH对MC3T3-E1细胞分化矿化有显著影响,碱性磷酸酶活力提高了9.1%;刺激骨钙素分泌,其含量上升2 mg/mL;形成更多的矿化结节。此外,EYPH还能刺激RUNX2特异性转录因子的基因表达,表达量提高了6.12倍。结果说明EYPH对成骨细胞MC3T3-E1增殖分化有显著的促进作用,因此,EYPH对于抗骨质疏松方面有较好的应用潜力,为开发其功能性食品提供一定的数据参考。     

代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

蜂胶及其提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖的作用

研究巴西蜂胶、中国蜂胶乙醇提取物,中国蜂胶乙酸乙酯及水提取物以及蜂胶中主要组分短叶松素、咖啡酸苄酯、咖啡酸苯乙酯、芹菜素、松属素、白杨素、高良姜素和木犀草素对3T3-L1前脂肪细胞的影响。采用正常培养的3T3-L1前脂肪细胞经不同浓度、不同提取方法得到的蜂胶及其主要组分分别处理24 h,倒置显微镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率。蜂胶及其各种提取物抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖效果各不相同,中国蜂胶、中国蜂胶乙酸乙酯提取物、咖啡酸苯乙酯抑制增殖尤为明显。蜂胶及其主要组分抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。     

叶酸代谢抑制剂对小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、细胞形态分析法及诱导分化法结合油红O染色法研究叶酸代谢中二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨喋呤（methotrexate,MTX）、甲氨苄啶（trimethoprim,TMP）和乙胺嘧啶（pyrimethamine,PTM）对OP9小鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨叶酸代谢与脂质合成的关系。MTT实验结果显示,在一定浓度范围内,3 种叶酸抑制剂均能抑制OP9细胞增殖,并呈现一定的剂量-效应依赖关系。且3 种叶酸抑制剂在高浓度时对OP9细胞有毒性作用。倒置显微镜观察和油红O染色检测结果显示,TMP在500～1 000 μmol/L浓度范围内对OP9细胞分化为脂肪细胞具有抑制作用。荧光定量聚合酶链式反应分析表明,TMP会使叶酸代谢途径中二氢叶酸还原酶和亚甲基四氢叶酸脱氢酶的转录水平发生下调,这可能是TMP抑制脂肪细胞诱导分化的原因。     

新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制

为探讨新橙皮苷对脂肪细胞脂肪形成的影响及其作用机制,采用MTS法检测新橙皮苷对3T3-L1前脂肪细胞的细胞活力的影响,确定新橙皮苷的作用浓度后,油红O染色法和分光光度法测定3T3-L1脂肪细胞的分化及胞内甘油三酯的含量,RT-PCR测定脂肪形成相关基因CCAAT增强子结合蛋白 α(CCAAT/enhancer bind...     

异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的：考察异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,探究其作用机制。方法：采用3T3-L1前脂肪细胞,利用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）法检测异甘草素对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,采用传统的鸡尾酒法诱导3T3-L1细胞分化为脂肪细胞,利用油红O染色法检测分化细胞脂滴形成;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应方法,检测细胞CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP）亚型C/EBPα、C/EBPβ、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）、脂肪分化相关蛋白adipophilin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK）的mRNA表达水平,Western blotting法检测AMPK蛋白磷酸化水平。结果：异甘草素可浓度依赖性地抑制3T3-L1细胞增殖,并明显抑制分化细胞内脂滴形成,同时抑制了细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPβ、FAS、adipophilin、PPARγ mRNA的表达,AMPK mRNA的表达未受影响,但异甘草素处理明显上调了AMPK蛋白的磷酸化水平。结论：异甘草素可抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,其机制可能与活化AMPK信号通路相关。     

3T3-L1前脂肪细胞在功能性成分评价中的应用

脂肪细胞的增殖与分化异常是导致人类肥胖、心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等的发生的主要原因,而3T3-L1前脂肪细胞是国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型,因此脂肪细胞的增殖与分化已成为研究的热点。本文主要论述3T3-L1前脂肪细胞的体外培养、增殖与分化及调控及其在功能性成分的评价中的应用,以期为预防和治疗肥胖及糖尿病等并发症提供一定的理论参考。     

笃斯越桔花青素提取物对3T3-L1前脂肪细胞生长抑制作用

目的：研究笃斯越橘花青素提取物对3T3-L1 前脂肪细胞生长抑制作用及其作用机理。方法：采用MTT法观察细胞生长抑制并确定半数抑制浓度(IC50),LDH(lactate dehydrogenase)法评价提取物引起的细胞膜损伤,流式细胞计法测定细胞周期,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果：笃斯越橘花青素提取物能够有效地抑制3T3-L1 前脂肪细胞的生长且IC50 约为214μg/mL;LDH 实验表明细胞LDH 释放率在24、48、72h 分别为89.0%、85.2%、67.8%,72h 时相对24h 或48h 明显降低(P ＜ 0.05),提取物对3T3-L1 前脂肪细胞膜的通透性未见明显增加;笃斯越橘花青素提取物能够有效诱导细胞凋亡,同时在S 或G0/G1 期产生阻滞,但是对细胞的G2/M 期未见明显影响,荧光显微镜观察细胞出现典型凋亡特征。结论：笃斯越橘花青素提取物能有效抑制3T3-L1 前脂肪细胞生长的作用,具有开发为天然抗肥胖功能因子的潜在可能。     

双酚S影响3T3-L1前脂肪细胞分化及其作用机制的研究

双酚A(BPA)的内分泌干扰作用以及对人体产生的不良影响,使双酚S(BPS)作为替代品在食品包装材料中应用更加广泛。BPS在大规模应用之前,并没有对其安全性进行充分研究。本文以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,探究BPS对3T3-L1前细胞分化的影响及作用途径,评价BPS安全性的同时,也为肥胖等慢性代谢疾病的预防提供参考。研究结果表明:BPS能促进3T3-L1前脂肪细胞生长,当浓度超过400μmol/L时,才能显著抑制细胞的增殖;BPS能显著诱导分化的3T3-L1细胞内脂质的积累,并呈现非剂量依赖关系;与模型组相比,BPA上调PPARγ、C/EBR和aP2基因的表达,而BPS只作用PPARγ基因的过表达,BPS和BPA都能使GLUT4基因的表达显著下降(p0.01)。总之BPS和BPA作用脂肪细胞分化的途径不完全一样,可能是在多种转录因子的共同作用下完成的。     

不同茶多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用比较

本实验利用小鼠3T3-L1前脂肪细胞对绿茶多糖（green tea polysaccharides,GTP）、红茶多糖（black tea polysaccharides,BTP）和乌龙茶多糖（oolong tea polysaccharides,OTP）的减肥作用进行评价。使用气相色谱对GTP、BTP、OTP的单糖组成进行分析。采用噻唑蓝染色法测定3?种茶多糖（tea polysaccharides,TPs）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活力的影响。使用流式细胞仪检测3?种TPs对3T3-L1前脂肪细胞细胞周期的影响。采用传统“鸡尾酒”法诱导3T3-L1细胞分化成脂后,测吸光度并计算其分化率。采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶（glycerol phosphate oxidase-peroxidase,GPO-PAP）法测定细胞中甘油三酯（triglyceride,TG）含量的变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术测定与脂质代谢相关基因的表达量。结果显示3?种TPs均能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化（P＜0.05）。添加100?μg/mL的TPs能使细胞分化率显著下降至（62.00±6.61）%（GTP）、（82.95±4.25）%（BTP）、（97.24±5.80）%（OTP）。另外,在细胞培养至第5天检测表明,这3 种TPs显著促进G0/G1期细胞数量的累积,细胞比例分别为（68.52±2.28）%（GTP）、（67.11±1.68）%（BTP）、（59.69±1.35）%（OTP）。RT-PCR分析结果显示TPs可以调控相关脂肪细胞因子的表达。在本研究中,在3T3-L1前脂肪细胞中GTP的减肥作用强于BTP和OTP。TPs的加入上调脂联素的表达从而激活腺苷酸活化蛋白激酶信号通路调控相关脂肪细胞因子的表达,并最终抑制TG的合成与3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂代谢的影响

研究乳酸菌发酵大麦提取物(LFBE)对3T3-L1前脂肪细胞分化及其脂代谢的影响与作用途径。利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum dy-1)发酵大麦获得LFBE,采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量;凯氏定氮法测定蛋白质含量与苯酚硫酸法测定多糖含量;采用CCK-8法检测细胞增殖能力和油红O染色法分析前脂肪细胞的分化程度;采用Realtime PCR法检测LFBE对脂代谢关键基因转录水平的调控作用。结果表明,与未发酵大麦提取物相比,LFBE中总酚含量增加了20.88%;LFBE中蛋白质含量从发酵前的13.93%增加至34.94%;多糖含量从未发酵时的64.94%下降至35.43%。与未发酵大麦提取物组相比,LFBE能够有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长,其IC_(50)约为560μg/mL;与模型组和未发酵大麦提取物组相比,400μg/mL LFBE能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制率达到58.85%。与模型组相比,LFBE能显著抑制脂代谢关键基因C/EBPα、PPAR-γ、SREBP-1c、PTP1B和aP2的mRNA表达水平,上调GLUT4的mRNA表达水平(p0.05)。LFBE可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并通过调节脂代谢相关基因的转录水平抑制其分化,表明其可能具有预防肥胖的作用。