腹泻性贝类毒素DSP的磷酸酶抑制检测法研究

对腹泻性贝类毒素DSP的快速筛选方法——磷酸酶抑制法进行了研究,分析了该方法的检测原理,并提出了该方法的筛选检出限,对标准溶液、加标回收样品及市场采样样品进行了检测,并就该方法的重复性进行验证。检测结果显示,磷酸酶抑制法检测准确率高,重复性较好,提出的筛选检出限(200μg/kg)远低于我国相关标准的规定(600μg/kg),是一种对于腹泻性贝类毒素DSP较为理想的筛选方法。      

贝类毒素大田软海绵酸的免疫分析检测技术研究进展

大田软海绵酸(okadaicacid,OA)是一种广泛存在于贝类等生物中的海洋生物毒素,可引起人或动物的急性中毒,对食品安全和海产养殖具有严重危害。因此建立快速、可靠、灵敏的OA检测技术具有重要意义。免疫分析检测技术基于抗原抗体的结合,特异性强、灵敏度高、应用范围广,是当前检测贝类毒素OA的主要手段。本文综述了近年来针对贝类毒素OA的免疫分析检测技术,其中包括酶联免疫吸附检测、免疫层析检测、时间分辨荧光免疫检测和基于免疫传感器的检测技术等。本文着重阐述了不同免疫分析技术的原理及其在OA检测中的实际应用,同时探讨了免疫分析技术在贝类毒素OA检测方面的挑战和发展趋势,以期为开发性能更加优异的OA免疫检测技术提供研究思路。     

超高效液相色谱串联质谱法快速测定贝类中3种腹泻性贝类毒素

建立了应用EMR-Lipid小柱净化结合超高效液相色谱串联质谱法快速测定贝类样品中3种腹泻性贝类毒素的分析方法。样品用80%乙腈溶液提取,以安捷伦Captival EMR-Lipid小柱净化,经超高效液相色谱串联质谱分析测定,采用大气压电喷雾负离子电离,选择反应监测模式,基质匹配外标法定量。实验结果表明,3种腹泻性贝类毒素的检出限为0.5～1.0μg·kg^-1,回收率为82.6%～107.1%,相对标准偏差为3.5%～9.9%。该方法操作简单、灵敏度高、回收率和精密度较好,适合应用于日常贝类样品中腹泻性贝类毒素的监测。     

基于固定化酶的蛋白质磷酸酶抑制率法测定腹泻性贝类毒素

目的 建立和优化用于检测腹泻性贝类毒素(DSP)的固定化蛋白质磷酸酶2A(PP2A)抑制率法。方法 以分离提取的PP2A为材料,根据DSP抑制PP2A酶活性的原理,建立用于检测DSP的固定化PP2A酶抑制率法,并对最佳酶用量和反应体系参数等进行了优化。结果 最佳的固定化PP2A酶蛋白量2μg、固定化配比为琼脂糖与PP2A酶蛋白量为1:1、pH值为8.4;采取4参数Logistic曲线法进行标准曲线拟合,曲线R2值达0.994,检测限为3.45μg/L,实际样品测定时具有良好的准确性和重复性。结论 建立的固定化PP2A酶抑制率法有望作为低成本、操作简单的DSP快速筛检方法推广应用。     

天津市售贝类腹泻性贝类毒素的调查研究

目的 对2011年2月至2012年1月天津市售双壳经济贝类腹泻性贝毒(DSP)污染状况进行为期一年的抽样,调查其食用安全性。方法 分别采用小白鼠生物法和液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）对可食部分进行检测,测定毒素含量及分析毒素组成。结果 在所抽查的10种,103个贝类样品中,只有产自河北唐山的毛蚶中5月、8月2个样品呈阳性,且全部超标。对阳性样品进行LC/MS-MS检测,检出DTX-1和YTX毒素。结论 腹泻性贝毒在天津市场范围内检出率及含量整体水平不高,但应提示有关部门应在春季预防,在夏季加强对食用贝类的监测和宣传,保证市民健康安全。     

天津市市售贝类腹泻性贝类毒素的调查研究

目的 对2011年2月-2012年1月天津市售双壳经济贝类腹泻性贝毒(DSP)污染状况进行为期一年的抽样,调查其食用安全性.方法 分别采用小鼠生物法和液相色谱-串联质谱法(LC/MS-MS)对可食部分进行检测,测定毒素含量及分析毒素组成.结果 在所抽查的10种103个贝类样品中,只有产自河北唐山的毛蚶中5月和8月采集的样品中有2个呈阳性且均超标.对阳性样品进行LC/MS-MS检测,检出DTX-1和YTX毒素.结论 腹泻性贝毒在天津市场范围内检出率及含量整体水平不高,但应提示有关部门应在春季预防,在夏季加强对食用贝类的监测和宣传,以保证市民健康安全.     

液相色谱-串联质谱法检测9种腹泻性贝毒毒素

目的建立腹泻性贝毒毒素9种代表性化合物:大田软海绵酸、鳍藻毒素、蛤毒素2、扇贝毒素及其衍生物、环亚胺米氏裸甲藻毒素、螺环内酯毒素1和原多甲藻酸的高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MS/MS)检测方法。方法以80%甲醇水溶液对贝类组织中的毒素进行提取,再以亲水亲脂平衡柱(HLB)对提取液进行净化,最后以高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定。结果 DSP毒素9种代表性化合物在各自浓度范围内线性良好,回收率为68.9%~94.2%,精密度为3.5%~9.5%。结论该方法具有灵敏度高、重现性好、操作简便、准确可靠等特点,适用于贝类中腹泻性贝毒毒素的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定双壳贝类中9种腹泻性贝类毒素

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,测定双壳贝类样品中9种腹泻性贝类毒素(DSP)。方法样品经100%甲醇提取过滤后,经ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱分离,乙腈-0.01%氨水为流动相,流速为0.2 ml/min,柱温为30℃,采用电喷雾电离和正负离子分段扫描,在多反应监测(MRM)模式下测定游离态的毒素(原多甲藻酸1、原多甲藻酸2、原多甲藻酸3、大环内酯类扇贝毒素2、软海绵酸、鳍藻毒素1、鳍藻毒素2、虾夷扇贝毒素和类虾夷扇贝毒素)。当软海绵酸、鳍藻毒素1或鳍藻毒素2任一种或多种毒素呈阳性时,须采用碱水解将酯化的软海绵酸、鳍藻毒素1和鳍藻毒素2转化为游离态形式后,用UPLCMS/MS测定其水解态毒素含量,外标法定量。结果 9种DSP在3个添加水平的平均回收率为85.9%~95.3%,相对标准偏差(RSD)为2.76%~4.18%,检出限(LOD)为4.4~9.9μg/kg,定量限(LOQ)为14.7~33.0μg/kg。结论该方法操作简便、灵敏度高,适用于DSP的日常检测。     

免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱法测定贝类中腹泻性贝类毒素

建立贝类中腹泻性贝类毒素的免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱分析方法。样品采用80%甲醇溶液提取,选择磷酸盐缓冲液与提取液(4∶1,V/V)混合稀释后,免疫亲和选择专一净化,液相色谱-串联质谱分析。根据腹泻性免疫亲和柱的使用特性,对上样液、淋洗液、洗脱液等参数进行优化。质谱采用电喷雾负离子电离,多反应监测模式,外标法定量。3种分析物在1.0~100μg/L质量浓度范围内线性相关系数均大于0.996,对应的检出限和定量限均为0.3μg/kg和1.0μg/kg,平均回收率为82.7%~94.3%,相对标准偏差为0.70%~7.61%。本方法基质干扰小、净化效果强、灵敏度高,适合贝类中腹泻性贝类毒素的分析测定。     

9种腹泻性贝类毒素的高效液相色谱-串联质谱测定方法的建立

建立一种同时测定贝类产品中9种腹泻性贝类毒素的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）方法。本文通过优化色谱条件、质谱条件、前处理等步骤,最终确定以80%乙腈水溶液对样品进行提取,利用QuEChERS和分散固相萃取技术进行净化,以C₁₈色谱柱进行分离,5 mmoL/L乙酸铵（加0.1%甲酸）缓冲液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱采用多反应监测模式（MRM）,外标法定量。9种腹泻性贝类毒素在质量浓度0.5～50 ng/mL的范围内线性关系良好,其线性相关系数均在0.996以上,检出限为1～10 μg/kg,回收率为87.2%～111.2%,相对偏差（n=6）为2.8%～9.2%。结果表明,该方法前处理简便快捷,准确性高、灵敏度较高、重现性好,而且节约成本,适合大批量检验,满足实际检测要求。     

生物传感器在贝毒快速检测中的应用

贝类毒素是继病原菌、弧菌和病毒之后,又一威胁海洋水产品质量的重要问题。随着水产品的安全性越来越受到关注,生物传感器作为一种新的分析工具,在水产品贝类毒素检测中具有广泛应用价值。文中简单介绍了贝类毒素和生物传感器及它们的特点,重点回顾了近年来生物传感器在贝毒快速检测中的应用。     

Influence of body weight of mice on the susceptibility to okadaic acid,a diarrhetic shellfish poisoning toxin

The mouse bioassay (MBA) for diarrhetic shellfish poisoning (DSP) toxins has been widely used in many countries of the world. However, different body weight ranges of mice are designated to be used in the Japanese official method and European Union procedure. In this study we investigated whether and to what extent the body weights of the mice affect the susceptibility to DSP toxins. A lethal dose of okadaic acid, one of the representative DSP toxins, was injected intraperitoneally into mice of five different body weight range groups, from 14 to 24 g. The mice were observed until 24 h after injection. The lethality was 100% in the 14–15 and 16–17 g groups, 80% in the 19–20 g group, 50% in the 21–22 g group, and 40% in the 23–24 g group, with significant differences. Survival analysis indicated a relationship between body weights of mice and susceptibility to okadaic acid. These results would be quite useful not only for the MBA, but also to improve understanding of the biological responses to DSP toxins.     

Contamination of shellfish from Shanghai seafood markets with paralytic shellfish poisoning and diarrhetic shellfish poisoning toxins determined by mouse bioassay and HPLC

This paper reports the results of investigations of shellfish toxin contamination of products obtained from Shanghai seafood markets. From May to October 2003, 66 samples were collected from several major seafood markets. Paralytic shellfish poisoning (PSP) and diarrhetic shellfish poisoning (DSP) toxins in shellfish samples were monitored primarily by a mouse bioassay, then analysed by HPLC for the chemical contents of the toxins. According to the mouse bioassay, eight samples were detected to be contaminated by PSP toxins and seven samples were contaminated by DSP toxins. Subsequent HPLC analysis indicated that the concentrations of the PSP toxins ranged from 0.2 to 1.9 µg/100 g tissues and the main components were gonyautoxins 2/3 (GTX2/3). As for DSP, okadaic acid was detected in three samples, and its concentration ranged from 3.2 to 17.5 µg/100 g tissues. Beside okadaic acid, its analogues, dinophysistoxins (DTX1), were found in one sample. According to the results, gastropod (Neverita didyma) and scallop (Argopecten irradians) were more likely contaminated with PSP and DSP toxins, and most of the contaminated samples were collected from Tongchuan and Fuxi markets. In addition, the contaminated samples were always found in May, June and July. Therefore, consumers should be cautious about eating the potential toxic shellfish during this specific period.     

基于无标记适配体-纳米金比色快速检测四环素类抗生素

该研究以四环素类（Tetracyclines,TCs）抗生素的适配体为识别探针,以纳米金为信号传导元件,构建了一种无标记、简便快速的TCs多残留比色检测方法。在优化条件下将其应用于食品中TCs多残留快速检测,并与国标法（GB 31658.6-2021）对比验证。结果显示,样品经甲醇+乙腈（6:4,V/V）提取后采用该方法进行检测,在适配体浓度为150 nmol/L、NaCl浓度40 mmol/L、反应时间5 min等检测条件下,该比色方法对四种TCs的检测线性范围为0.25~5.0 ng/mL（R>0.981）,可视化检测限为0.5~1.0 ng/mL,检测时间约5 min。该方法对四环素、土霉素、金霉素和多西环素具有高的特异性,与氯霉素和庆大霉素等无交叉反应。将方法应用于牛乳中TCs检测,加标回收率为63.52%~102.48%,相对标准偏差2.49%~6.81%。结果表明,该方法具有简便、快速、成本低、灵敏度高等优点,适用于批量样品中TCs的现场快速检测。     

海产品贝毒素大田软海绵酸ELISA及HPLC-MS/MS检测方法的研究

为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)检测法,并对部分市售海产品进行了实际检测,ELISA方法标准曲线为y=－34.212x+83.49,相关系数为0.9784,线性范围0.4～25μg/L,灵敏度0.18μg/L;HPLC-MS/MS检测方法标准曲线y=193.07x－780.6(Q1/Q3：m/z 827.4～m/z 723.5)和y=83.021x－335.6(Q1/Q3：m/z 827.4～m/z 809.5),R2 均为0.9991,线性范围10～800μg/L,灵敏度小于2μg/L,平均RSD为4.34%。在检测的实际样品中两种样品ELISA呈阳性反应,其中一种经过了HPLC-MS/MS的验证。所建立的ELISA及HPLC-MS检测方法均可用于海产品腹泻性贝毒OA限量标准检测,为进出口海产品OA标准方法的建立提供实验基础。     

比色法测定油脂酸价的研究

本文研究比色法测定油脂酸价,为了避免使用昂贵的表面活性剂双-(2-乙基己基)磺基丁二酸钠,采用振荡离心操作方法。通过和国标法比较测定红花籽油,葵花籽油和玉米油三种油脂酸值,结果表明,比色法和国标法的精密度相似,两者之间相对误差分别为30.0%,15.3%和9.1%。