自然发酵甜面酱中一株芽孢杆菌的分离鉴定及益生特性初探

从自然发酵甜面酱中分离筛选出一株淡红色的芽孢杆菌B30,经形态学、生理生化特征鉴定,16SrDNA序列分子鉴定和系统发育树分析,确定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对该菌进行产酶活性、人工肠胃液、猪胆盐耐受性试验,结果表明:该菌具有产蛋白酶和淀粉酶活性,对人工肠液、胃液和猪胆盐环境均有很强的耐受性。因此,此次研究得到的枯草芽孢杆菌具有良好的益生菌开发前景,是一株比较理想的潜在益生菌。     

枯草芽孢杆菌MX-6的特性研究

以中国豆豉中筛选到的一株枯草芽孢杆菌MX-6为研究对象,分析其生长曲线、耐受性、抑菌特性及耐药性。枯草芽孢杆菌MX-6培养14h达到最大生物量,菌株的活性强、生长快,具有较高的温度耐受性,在100℃处理30min存活率亦可达到52.91%。枯草芽孢杆菌MX-6经人工胃液pH(1～4)处理1～4h,存活率均达到71.87%以上,结果表明菌株对胃液的耐受性较强。人工肠液和不同浓度胆盐对菌株均有一定的影响,0.1%～0.4%的胆盐对枯草芽孢杆菌MX-6的存活率影响不显著(P0.05),存活率达到74.13%以上。枯草芽孢杆菌MX-6的发酵液对青霉、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有较强的抑菌效果,而对乳酸菌无抑制作用,不具有耐药性。结果显示:该菌株的发酵速度快、耐受性强、抑菌特性明显、无耐药性,具有开发为益生菌制剂的潜能,有助于其工业化应用。     

四特酒大曲中枯草芽孢杆菌的益生特性研究

在四特酒大曲中分离纯化出4株细菌,经鉴定为枯草芽孢杆菌。通过采用体外模拟动物胃肠道环境的方法,对该4株枯草芽孢杆菌的益生特性(对酸、胆盐的耐受性及抑菌效果和产酶特性)进行研究。结果表明,其中有2株枯草芽孢杆菌具有较强的耐酸和耐胆盐能力,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用,分解淀粉酶和蛋白酶的能力也较高。因此,可判断这两株枯草芽孢杆菌具有较好的益生特性。     

川西藏区牦牛酸醡肉中产蛋白酶和淀粉酶菌株的分离鉴定及其生理特性分析

实验从川西藏区牦牛酸醡肉中分离获得了7株具有产蛋白酶或淀粉酶的菌株。通过16SrDNA和ITS基因测序鉴定为淀粉液化芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌亚种、植物乳杆菌、戊糖片球菌、镰刀霉、黑曲霉;其中淀粉液化芽孢杆菌、多粘类枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌亚种可同时产蛋白酶和产淀粉酶,且酶活力较高,属于优质发酵菌。     

虾酱源芽孢杆菌的筛选及其益生特性

从市售农家制作传统虾酱中筛选分离5株芽孢杆菌，经鉴定后命名为解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32和蜡样芽孢杆菌BI6Y。5株菌都可在10%的盐质量分数下正常生长，具有不同产蛋白酶和脂肪酶的能力以及抑菌特性。其中，蜡样芽孢杆菌BI6Y具有β溶血性，对氯霉素、万古霉素、诺氟沙星不敏感，不适合作为益生菌。其它4株芽孢杆菌具有γ溶血性，对氯霉素不敏感，自聚集率在25%~35%之间，可耐受酸和胆盐；分泌表面活性素surfactin；人工胃肠液处理后的存活率多数集中在50%~70%之间，枯草芽孢杆菌Y13在人工胃液(pH 2.0)的存活率最高为95.3%，沙福芽孢杆菌Y32在人工肠液中的存活率最高为85.1%；其菌体、无细胞提取液、细胞内容物分别具有不同的抗氧化活性，其中无细胞提取液可同时清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和羟自由基，清除率在40%~60%之间。研究结果表明:除蜡样芽孢杆菌BI6Y外，解淀粉芽孢杆菌Y11、贝莱斯芽孢杆菌Y12、枯草芽孢杆菌Y13、沙福芽孢杆菌Y32具有作为益生菌的潜力。研究结果为基于芽孢杆菌的益生菌产品开发提供了一定理论依据。     

Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力

对Paenibacillus bovis sp.nov.BD3526作为益生菌的潜力进行了体外活性初步研究。采用模拟胃液、肠液、不同浓度的胆盐环境,测定BD3526菌株在酸性及高胆盐环境的存活率,并测试BD3526对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌的抑制作用。结果表明,BD3526可以耐受pH值为2.0、3.0、4.0的人工胃液、pH8.0的模拟肠液以及0.1%、0.2%、0.3%的胆盐环境;对金黄色葡萄球菌、藤黄、枯草芽孢杆菌有显著的抑制能力。说明BD3526在人工消化液环境中具有良好的存活能力,不具有溶血作用;可引起敏感菌细胞渗漏,达到杀灭部分细菌,包括金色葡萄球菌的作用,因此,该菌具备作为益生菌应用的潜力。     

高产中/碱性蛋白酶的枯草芽孢杆菌W1菌株的筛选及条件优化

为了筛选高产蛋白酶活性细菌,以大豆及其发酵制品为目标样品,采用酪蛋白平皿筛选到一株既可产中性蛋白酶又可产碱性蛋白酶的细菌菌株W1,经形态学及16S rDNA基因序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp. Subtilis),其产中性蛋白酶和碱性蛋白酶活力分别为28.99 U/mL和33.19 U/mL。通过单因素试验对其产蛋白酶的培养条件进行初步优化,并在此基础上以总蛋白酶活力为指标对其产蛋白酶条件进一步进行正交试验优化,最佳条件为培养基初始pH 9.0,接种量4%,培养温度35℃,培养时间48 h,此条件下中性蛋白酶活力为40.39 U/mL,碱性蛋白酶活力为52.02 U/mL,总蛋白酶活力为92.41 U/mL,优化后相应酶活力分别提高了39.3%、56.7%和48.6%,这将为枯草芽孢杆菌W1菌株蛋白酶的酶学性质研究提供帮助,同时也是对蛋白酶活性枯草芽孢杆菌资源库的丰富。     

芽孢杆菌的产酶特性及其对抗生素的耐受性

以4株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和2株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为研究对象,通过测定其成胞率、中性蛋白酶活性及对24种抗生素的耐受性,从中筛选优良芽孢杆菌。结果表明,从6株芽孢杆菌中筛选得到3株成胞率和产中性蛋白酶均较好的芽孢杆菌,分别为枯草芽孢杆菌BLCC1-0552、BLCC1-0615和地衣芽孢杆菌BLCC1-0441,液体发酵24 h后,成胞率较高,均达到98%;中性蛋白酶活性分别为90.58 U/mL、100.32 U/mL和24.72 U/mL。其中,枯草芽孢杆菌BLCC1-0615固体发酵玉米-豆粕型常规饲料产中性蛋白酶活力最高,发酵48 h时达到2 154.49 U/g。3株芽孢杆菌对抗生素的耐受性不一致,其中枯草芽孢杆菌BLCC1-0615对24种抗生素中的17种表现敏感,敏感率最高为70.83%。因此,确定优良菌株为枯草芽孢杆菌BLCC1-0615,其成胞率、产中性蛋白酶能力好及对抗生素耐受性较低,具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力。     

微生物利用油茶籽油工艺水产碱性蛋白酶的初探

本文通过对四种产蛋白酶微生物的筛选,选择具有较高产碱性蛋白酶能力的枯草芽孢杆菌,接种到水酶法提取油茶籽油的工艺水中使其产蛋白酶,并通过产酶条件优化提高蛋白酶产量,在原有产酶培养液配方（酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁 0.02%、pH 9.0、接种量4%（v/v））的基础上,得到最佳产酶条件为：工艺水预先白土处理2 h,5000 r/min离心10 min,按80%的比例添加到水中、培养时间96 h,枯草芽孢杆菌在该产酶条件下最高酶活力为34.8 u/mL。     

微生物利用油茶籽油工艺水产碱性蛋白酶初探

通过对4种产蛋白酶微生物的筛选,选择具有较高产碱性蛋白酶能力的枯草芽孢杆菌。接种到水酶法提取油茶籽油的工艺水中使其产蛋白酶,并通过产酶条件优化提高蛋白酶产量。在原有产酶培养液配方(酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁0.02%、p H 9.0、接种量4%(V/V))的基础上,得到最佳产酶条件为:工艺水预先白土处理2 h,5 000 r/min离心10 min,按80%的比例添加到水中、培养时间96 h,枯草芽孢杆菌在该产酶条件下最高酶活力为34.8 u/m L。     

Hyper expression of kojibiose phosphorylase gene and trehalose phosphorylase gene from Thermoanaerobacter brockii ATCC35047 in Bacillus subtilis and selaginose synthesis utilizing two phosphorylases

The kojibiose phosphorylase (KP) gene and trehalose phosphorylase (TP) gene from Thermoanaerobacter brockii ATCC35047 were intracellularly hyper-expressed under the control of the Bacillus amyloliquefaciens alpha-amylase promoter in Bacillus subtilis. The production yields were estimated to be 2.1 g of KP and 4.9 g of TP per liter of medium. Selaginose, non-reducing trisaccharide, was synthesized from trehalose utilizing the recombinant KP and TP from B. subtilis. Selaginose was not hydrolyzed by salivary amylase, artificial gastric juice, pancreatic amylase, or small intestinal enzymes.     

4株乳酸菌对模拟胃肠环境的耐受性及生长特性研究

对4株来源于自然发酵肉制品中的乳酸菌进行耐酸耐胆盐性能的测定,选取在pH3.0和含0.3 g/100 mL胆盐的MRS培养基中存活率均超过50%的2株菌（M12、M23）,进一步研究其在模拟胃肠液中的耐受性及MRS培养基中的生长特性。结果表明,这2株乳酸菌对人工模拟胃肠道环境有较好的耐受性,经过人工模拟胃液处理2 h后,存活率均＞50%,经人工模拟肠液处理10 h后仍可存活;这2株菌具有较强的增殖及产酸能力,24 h内均已进入稳定生长期,随着菌体数目的增加,培养基pH值快速降低,在肉制品的发酵温度范围内均能较好地生长。因此,这2株菌可作为潜在的益生菌菌株应用于肉制品的发酵。     

植物乳杆菌LPb1耐受性及发酵乳制备条件的优化

模拟人体消化道环境,即在人工胃液、肠液的环境下对植物乳杆菌LPb1的耐受性进行研究,结果表明：在37℃条件下,用人工胃液处理3h,收集的菌体再转入人工肠液处理3h,最后测得菌株存活率仍达88.6%。LPb1与一株嗜热链球菌混合发酵脱脂乳,与单菌发酵相比,混合菌产酸效果较好,发酵乳制品具有良好的持水性能,且发酵完成后,4℃冰箱贮存后酸化程度缓慢。通过单因素和响应面分析,混合发酵最佳发酵条件为：接种量4.45%、发酵时间8.53h、发酵温度40.40℃。     

黄嘌呤和谷氨酰胺对枯草芽孢杆菌XGL产腺苷的影响

该研究以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XGL为出发菌株,探究黄嘌呤和谷氨酰胺添加量及添加方式对其产腺苷的影响。结果表明,底物中添加100 mg/L黄嘌呤并在发酵16 h后持续向发酵液中流加3 g/L的黄嘌呤溶液200 mL可使腺苷产量达到34.4 g/L,相比于不流加黄嘌呤时腺苷产量（11.2 g/L）提高207%。在此基础上,再向底物中添加6 g/L谷氨酰胺,发酵32 h之后持续向发酵液中流加6 g/L的谷氨酰胺,腺苷产量达到45.8 g/L,相比于不添加谷氨酰胺腺苷产量（34.4 g/L）提高33%。因此,在B. subtilis XGL发酵过程中,可以通过底物添加和流加补料的发酵方式加入一定量的黄嘌呤和谷氨酰胺以提高腺苷产量。     

动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002益生特性的研究

该研究测定动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animails subsp. lactis）菌株HCS04-002对酸、胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性,并采用邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）法及甘油三酯试剂盒分别测定菌株的β-半乳糖苷酶活力和甘油三酯降解能力。结果表明,菌株HCS04-002在pH 2.0和pH 3.0环境下处理17 h,存活率达60%以上;在0.3%、0.5%、1.0%、1.5%的胆盐环境处理17 h,存活率达70%以上;经人工胃液和人工肠液消化后,存活率达99%以上;β-半乳糖苷酶活力为0.78 U/mL;甘油三酯降解率为43%。综上,动物双歧杆菌乳亚种菌株HCS04-002具有较好的耐酸、耐胆盐及耐胃肠液能力,进入人体后能够以较高存活率到达肠道发挥作用,并具有一定的缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能。     

产蛋白酶菌株的鉴定及其对虾壳的脱蛋白研究

从虾塘沉积物中分离到一株产蛋白酶的菌株C1,采用菌落形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析相结合的方法进行鉴定,进一步探究其在提取虾壳甲壳素工艺中脱蛋白的应用,并与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）对虾壳蛋白脱除效果进行比较分析。结果表明,菌株C1被鉴定为一株蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）,其对虾壳的脱蛋白能力高于枯草芽孢杆菌。当发酵培养基中葡萄糖添加量为50 g/L,虾壳粉添加量为20 g/L,酵母膏添加量为1 g/L时,枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌发酵5 d的蛋白酶活力分别为145.7 U/mL、220.8 U/mL,脱蛋白率分别达到80.4%、90.8%。     

鼠李糖乳杆菌及枯草芽孢杆菌发酵对饲料品质的影响

该研究通过测定发酵饲料pH值、活菌数、乳酸含量及中性蛋白酶活性,筛选出适宜基础饲料发酵的鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）BLCC2-0038和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BLCC1-0281,并对筛选出的鼠李糖乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行单菌及混菌发酵方式进行了研究。结果表明,BLCC2-0038单独发酵72 h时pH值降至3.73,活菌数达到7.05×109 CFU/g,乳酸含量为48.67 mg/g;BLCC1-0281单独发酵72 h时,活菌数达到2.28×1010 CFU/g,中性蛋白酶活性达到3 207 U/g;BLCC2-0038和BLCC1-0281混菌发酵时,以鼠李糖乳杆菌/枯草芽孢杆菌配比为3∶1,2%接种量,有氧发酵方式最优,发酵72 h时鼠李糖乳杆菌活菌数为5.35×109 CFU/g,枯草芽孢杆菌活菌数为7.80×109 CFU/g,中性蛋白酶活性为1 407.83 U/g。     

两种微生物水解脱淀粉小麦中蛋白效果的比较研究

为研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和米曲霉（Aspergillus oryzae）对脱淀粉小麦中蛋白质的水解效果,采用前发酵和后发酵获得发酵液,比较两种微生物培养过程中性蛋白酶活力和发酵液的pH值、可溶性无盐固形物、氨基酸态氮含量、氨基酸组成,并对其发酵液进行感官评价。结果表明,在最适前发酵工艺的条件下,枯草芽孢杆菌和米曲霉中性蛋白酶活力分别为1 060.82 U/g和908.02 U/g;两种微生物最终发酵液pH值为7.08和5.37,可溶性无盐固形物为15.60%和18.98%,氨基酸态氮含量为0.73 g/100 mL和0.75 g/100 mL,总游离氨基酸含量为4.35 mg/mL和9.04 mg/mL,蛋白质水解度为55.99%和59.71%。枯草芽孢杆菌发酵液中必需氨基酸的组成和比例更符合氨基酸模式谱,必需氨基酸与总游离氨基酸的比值（EAA/TAA）、必需氨基酸与非必需氨基酸（EAA/NEAA）的比值也高于米曲霉。感官评价结果显示,米曲霉发酵液好于枯草芽孢杆菌。     

抗性淀粉体外消化模拟的研究

采用体外消化模拟方法,研究了抗性淀粉在人工胃肠液和大肠液中的消化吸收情况,并用原淀粉作为对照组。结果表明,抗性淀粉和原淀粉在生理盐水中均没有被分解,生理盐水对抗性淀粉的消化毫无影响。与对照组原淀粉相比,抗性淀粉在人工胃液(pH3、pH4、pH5)和人工肠液(pH6.8)中变化很小,人工胃液和人工肠液对抗性淀粉不起消化作用。抗性淀粉在大肠液中有明显的失重,说明大肠液对抗性淀粉有影响,抗性淀粉能够被大肠中的微生物发酵或部分发酵。从而说明抗性淀粉不能在胃和小肠中消化吸收。