黑色素生物合成抑制剂产生菌株的筛选

采集了中国 1 1个省的土样和草样共 2 3 1份 ,分离出了 1 70 0株链霉菌 .筛选结果是 :3 9 2 4号菌株在比基尼链霉菌筛选模型中抑制圈的直径为 2 0mm ,属于直径较大者 ;其黑色素生物合成抑制剂初提物对CV 1细胞的急性细胞毒性 (致毒质量浓度 )为 1 0mg/mL ,属于毒性较小者 .根据以上试验结果 ,作者确定 3 9 2 4号菌株为黑色素生物合成抑制剂研究的试验菌株 .     

黑木耳甲醇提取物抑制黑色素的研究

为确证黑木耳与黑色素的关系,鉴于已有的研究,以甲醇为溶剂对黑木耳进行提取,提取物采用TLC检测与化学显色鉴别相结合的方法,明确其组成的物质类别;并以熊果苷为阳性对照,以鼠黑色素瘤B16细胞株作靶标,采用A405测定黑色素含量,MTT法测定细胞增殖能力,对提取物进行黑色素抑制活性研究和细胞毒性评价。结果显示,黑木耳甲醇提取物含有多酚、萜类、多糖和氨基酸;此提取物在浓度较高时,具有黑色素抑制活性和较低的细胞毒性。      

黑色素生物合成抑制剂（MBI）产生菌株的急性细胞毒性试验

根据Ｂｅｒｄｙ提出的筛选新的生物活性物质的理想模式基筛选黑色素生物合成抑制剂产生菌株的过程中，对于初筛的阳性产生菌株进行急性细胞毒性结果得到了３株可以用于二筛的阳性产生菌株。     

绣球菌浓缩液抑制黑色素合成和抗氧化活性研究

目的 探究绣球菌浓缩液(concentrated Sparassis crispa extract, SCE)对黑色素合成和氧化损伤成纤维细胞的影响。方法 以酵母β-葡聚糖为对照, 通过检测酪氨酸酶酶活抑制率、黑色素瘤B16细胞内黑色素产生、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除率及人成纤维细胞存活率、细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平和细胞合成胶原蛋白、弹性蛋白的浓度, 探讨SCE抑制黑色素合成和成纤维细胞氧化损伤的保护作用。结果 在本研究的测试浓度范围内, SCE对酪氨酸酶活性抑制率为35.0%~79.4%, 对黑色素瘤B16细胞黑色素产生抑制率为24.6%~52.1%, 并表现出浓度依赖性。同时, SCE能有效清除DPPH自由基, 对H2O2诱导的人成纤维细胞凋亡具有保护作用, 并可降低细胞内ROS水平; 与模型组比较, SCE在10~100 μg/mL范围内对成纤维细胞合成III型胶原蛋白提高了67%~79%、弹性蛋白合成提高了124%~199%, 且效果优于酵母β-葡聚糖。结论 SCE具有抑制黑色素合成、保护氧化损伤成纤维细胞和提高成纤维细胞合成胶原蛋白、弹性蛋白的作用, 这为其应用于美容功能食品提供依据。     

酸枣叶缩合单宁的分离鉴定及其对黑色素生成的抑制机制

目的:研究酸枣叶缩合单宁的结构特征及其对酪氨酸酶的效应和黑色素生成的抑制机制。方法:利用Sephadex LH-20凝胶柱色谱技术分离制备酸枣叶缩合单宁纯化物,采用硫醇降解结合高效液相色谱-电喷雾电离质谱（Thiolysis-HPLC-ESI-MS）解析酸枣叶缩合单宁的结构单元组成,运用酶动力学、紫外光谱、荧光猝灭等方法系统研究酸枣叶缩合单宁对酪氨酸酶的抑制作用机理,应用CCK-8法、多巴氧化法、NaOH裂解法和实时荧光定量PCR检测酸枣叶缩合单宁对小鼠黑色素瘤细胞（B16F10）的增殖、酪氨酸酶活性、黑色素合成及其相关基因表达水平的影响。结果:构成酸枣叶缩合单宁的主要结构单元是（表）儿茶素和（表）棓儿茶素;酸枣叶缩合单宁具有较强的酪氨酸酶单酚酶和二酚酶抑制活性,是二酚酶可逆的混合型抑制剂;酸枣叶缩合单宁可有效抑制B16F10细胞的增殖、酪氨酸酶活性、黑色素生成量以及酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP-1）、小眼畸形相关转录因子（MITF）等基因的表达。结论:通过在酶水平和细胞水平的综合分析,阐明酸枣叶缩合单宁对B16F10细胞黑色素合成的分子抑制机制,为后期酸枣叶缩合单宁开发为新的美白化妆品添加剂和果蔬保鲜剂提供理论依据。     

香水莲花提取物的美白功效研究

天然提取物由于其安全性高,近年来成为化妆品功效研究的热点。通过体外法测定香水莲花提取物所含活性成分及其对酪氨酸酶活性的抑制效果,再采用细胞模型探究其对B16小鼠黑素瘤细胞形态、增殖、黑素含量以及细胞内酪氨酸酶活性的影响。结果显示,黄色、蓝色香莲整花提取物均能有效抑制体外酪氨酸酶活性,其中体积分数60%醇提物能有效减缓B16黑素瘤细胞增殖、抑制黑素合成及胞内酪氨酸酶活性,添加100μg/m L的黄、蓝色整花体积分数60%醇提物的细胞增殖率分别为(84.44±1.77)%、(48.24±3.14)%,黑素质量分数为(69.69±1.40)%、(66.98±2.44)%,具有较好的美白功效。     

玫瑰蜂花粉中不同存在形态酚类物质的组成及其抑制B16黑色素瘤细胞的活性

本文研究了玫瑰蜂花粉中游离态和结合态酚酸类物质含量和组成;采用铁离子还原能力、ABTS和DPPH自由基清除能力三种模型评价其抗氧化能力;同时测定了其对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用;并进一步研究了对B16细胞的增殖形态、黑色素含量和酪氨酸酶活性的影响。结果表明,蜂花粉中游离态和结合态的总酚含量分别为23.36和1.47 mg GAE/g干重(DW),总黄酮含量为19.12和2.42 mg RE/g DW。酚酸类物质大多以游离态形式存在,富含槲皮素和芦丁,而结合态中鞣花酸和3,4-二甲氧基苯甲酸含量较高;游离态和结合态多酚在三种模型中均显示较好的抗氧化活性;抑制蘑菇酪氨酸酶活性IC50分别为22.26和26.34μg/m L,显著高于Vc;一定程度上影响了B16细胞的增殖和形态,同时显著降低细胞内相对黑色素含量和酪氨酸酶活性。玫瑰蜂花粉中不同形态多酚的活性与其酚酸的含量和组成有直接的关系。     

拮抗黄曲霉海洋放线菌的筛选及发酵条件优化

该研究从黄海海域沉积物中筛选一株能高效抑制黄曲霉（Aspergillus flavus）的海洋放线菌,通过形态观察、生理生化试验及 分子生物学技术对其进行鉴定,并以抑菌圈直径为响应值,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面试验对其产抑菌活性 物质的发酵条件进行优化。 结果表明,筛选获得一株对黄曲霉抑制活性较高的菌株B11,并鉴定其为锈赤蜡黄链霉菌（Streptomyces rubiginosohelvolus）;菌株B11产抑菌活性物质的主要影响因素为发酵温度、发酵时间及接种量,最优发酵条件为：发酵温度29 ℃、发 酵时间11 d、接种量5%。 在此最优发酵条件下,抑菌圈直径达到（2.9±0.15）cm,抑菌圈直径比优化前（1.4±0.15）cm增大51.72%。     

链霉菌HMJ-7的鉴定及其抗菌物质稳定性分析

为获得新型抗菌活性物质并应用于食品防腐,用土壤溶液悬浮法从江苏徐州奎河边上的土壤样品中分离到了一株链霉菌菌株,命名为HMJ-7。采用打孔法验证其产生的抗菌物质的抗菌能力,结果表明:该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌等细菌以及酵母菌都有良好的抑制作用,抑菌圈直径都在2 cm以上。对黑曲霉、黄曲霉、米曲霉等霉菌没有抑菌活性;通过对HMJ-7菌株形态特征、培养特性、生理生化性状以及16S rDNA序列分析,初步将该菌株鉴定为链霉菌属灰红紫类群灰红链霉菌(Streptomyces griseoruber);采用不同的温度、pH、有机溶剂、紫外线条件处理该菌株产生的抑菌活性物质,并分别通过打孔法测定其对蜡样芽孢杆菌的抑制活性。结果显示,这些条件对抑制活性没有明显影响,说明该抗菌物质比较稳定。上述结果表明,HMJ-7菌株有较大的利用潜力,也为进一步分离纯化其抑菌物质提供了依据。     

山西太子滩温泉土壤放线菌多样性及功能基因筛选的研究

收集太子滩温泉周围的4份土壤样品,用6种分离培养基对土壤中的细菌进行分离,再通过分析16S rRNA基因序列对分离菌株进行初步分类鉴定。采用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳检测放线菌是否具有抗生素生物合成基因NRPS、PKS I、PKS II。从4个土壤样品中共分离出104株放线菌,主要分布于放线菌域的3目5科12属,包括链霉菌属（Streptomyces）、微杆菌属（Microbacterium）、壤霉菌属（Agromyces）等;菌株M6W4-7-2与发表菌株Streptomyces ruber NRRC 14600T的16S rRNA基因序列相似性为98.58%,可能为链霉菌科链霉菌属的潜在新种。太子滩温泉附近土壤有着丰厚的放线菌资源,且放线菌的抗生素合成基因的阳性率较高,具备从中发现放线菌新物种及新抗生素的潜力。     

莲原花青素对小鼠黑色素瘤的体内抑制作用及机制研究

目的:研究莲房原花青素(LSPC)对黑色素瘤B16的抑制作用及其机制。方法:给小鼠连续灌胃不同剂量的LSPC 13d后,于第14d处死小鼠,计算抑瘤率并进行形态学观察,通过免疫组织化学观察瘤细胞内HMB45和S-100蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:一定剂量的LSPC能抑制黑色素瘤B16细胞生长增殖,且以120mg/kg·bw LSPC组最显著(p＜0．01),抑瘤率达55．3%,并有亚二倍凋亡峰。结论:LSPC对黑色素瘤B16细胞有抑制作用,其机制是诱导凋亡。     

远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagaxp olypeptide)的制备及其对酪氨酸酶的抑制作用

以远东拟沙丁鱼为原料,采用动物蛋白水解酶和风味酶联合水解,通过膜分离等工序制备远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagax Polypeptide/SSP),测定其分子量的分布,以生化水平上对酪氨酸酶的抑制率、细胞水平上对小鼠B16细胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的抑制率为检测指标,研究SSP对酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果显示:SSP的重均分子量为1664 u,其分子量区间主要为500~3000 u;无论是在生化水平还是细胞水平上,SSP对酪氨酸酶都具有一定的抑制作用,且SSP还能在一定程度上抑制细胞中黑色素的合成,这一结果表明了SSP具有一定的美白功能,有望作为无毒副作用的天然酪氨酸酶抑制剂,在医药、食品、化妆品等行业具有广泛的应用前景。      

The evaluation of depigmenting efficacy in the skin for the development of new whitening agents in Korea

In this review, the evaluation methods for the screening of depigmenting substrates were investigated. For this purpose, the evaluation method of tyrosinase, a key enzyme of melanin biosynthesis, is most frequently used, but evaluating methods based on the regulation of cellular signal transfer factors or the inhibition of melanosome transfer have also been developed. Evaluation of the depigmenting effect using melanocytes is complex. It has the advantage of being capable of analysing overall effects on melanin biosynthesis at cellular levels. Before the final clinical testing of depigmenting agents, in vitro testing should be conducted to confirm the depigmenting efficacy and safety. Clinical studies for depigmenting agents can be used to investigate the prevention of melanin biosynthesis and to determine whether melanin disappears from skin. Therefore, the most appropriate protocol has to be employed, depending on the mechanism of action of the depigmenting agent.     

链霉菌G-HD-4 产黑色素发酵条件的优化

为提高链霉菌G-HD-4 的黑色素产生量,以L- 酪氨酸为底物,对该菌种产黑色素的工艺条件进行研究,通过单因素试验和均匀设计试验,得到最佳产黑色素的发酵条件为：马铃薯15g/100mL、乳糖2.5g/100mL、干酪素2.07g/100mL、MgSO4 0.11g/100mL、KH2PO4 0.25g/100mL、L- 酪氨酸 0.25g/100mL、以接种量为6%(体积分数),培养基起始pH 值为6.0,装液量为25mL,28℃,150r/min 振荡培养5d,黑色素产量可达(13.4 ± 0.05)g/L,比在基础培养基中的黑色素产量(5.78g/L)提高约2.3 倍。     

一株产抑菌物质的蜡样芽胞杆菌的鉴定及其抑菌物质性质

从酱渣中分离到一株产抑菌物质的新菌株,暂命名为菌株B。研究表明,该菌株经碱中和后的无细胞发酵液对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有抑制作用;其发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后,仍然有抑菌活性;双缩脲和茚三酮实验表明,抗菌活性物质为肽类物质。生理生化实验、16S rDNA序列比对及系统发育分析表明,菌株B为蜡样芽胞杆菌,其生长和抑菌最适培养基为NB培养基,在pH 7.0的NB培养液中培养40h其抑菌活性达到最大。     

酱油渣中色素及大豆异黄酮的提取研究

应用乙醇溶液和超声波辅助的提取方法,从大豆原粒酱油渣中提取酱油色素,并利用乙酸乙酯萃取回收乙醇提取液中的大豆异黄酮。结果表明,酱油渣中色素的最佳提取工艺为乙醇体积分数65%、料液比1∶1.75（g∶mL）、提取时间24 h、超声波时间35 min。在该条件下,酱油渣色素得率为1.8 g/100 g;高效液相色谱法分析,大豆异黄酮得率约为37 mg/100 g。光谱分析表明,酱油渣色素在紫外和红外区间均有非常强的吸收峰。色素稳定性分析表明,酱油渣色素容易被过氧化氢氧化,而亚硫酸钠对其有一定的增色作用;蔗糖、苯甲酸钠、山梨酸钾和光照对酱油渣色素的稳定性影响较小,偏酸性和80 ℃以上的高温环境对酱油渣色素具有降解作用。