四季豆种子蛋白的高效液相色谱分析研究

介绍采用新的分离方法从四季豆种子中分离出2种蛋白,用高效凝胶蛋白柱(HPGFC)结合光电二极管阵列检测器,对2个蛋白进行紫外光谱分析以及各自的分子量测定之后,用柱后衍生法测了2个蛋白的氨基酸组成,并对其中出现的问题进行了讨论。     

黄海海燕酸性粘多糖的分离、纯化及鉴定

利用碱提法从黄海海燕中提取了多糖,粗品中糖和蛋白含量分别为28．6％和50．8％;Sevag法脱蛋白后,糖含量57．1％,蛋白含量13．8％;二次酶解后,糖和蛋白含量分别为63．2％和7．0％;粗品除蛋白、脱色后,用25％、42％、66％、88％乙醇分级沉淀分别得到多糖Ⅰ、多糖Ⅱ、多糖Ⅲ和多糖Ⅳ,糖含量分别为20．6％、20．7％、29．2％、19．9％,蛋白含量分别为29．2％、27．8％、59．5％、65．7％;多糖Ⅰ依次用离子交换层析（DEAE-52）和葡聚糖凝胶（G-75）进行分离、纯化,结果表明分子中带有同一种电荷,硫酸基离子鉴定反应为阳性,并至少含有三个组分;用葡聚糖凝胶（G-100）对其分子量进行测定,其平均分子量约为10kD;琼脂糖凝胶电泳结果表明,该糖带负电。研究结果为海燕资源的开发利用提供了科学依据。     

稀有(鲍)鲫卵黄蛋白原电泳表征

鱼类卵黄蛋白原是检测环境内分泌干扰化合物雌激素效应的敏感生物标志物。稀有鮈鲫是我国目前最具发展潜力的用于生态毒理学研究的实验室模型物种。本文采用强效人工合成的雌激素乙炔基雌二醇对成熟雄性稀有鮈鲫和未成年稀有鮈鲫进行诱导,然后用十二烷基磺酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳对血清中的蛋白进行了表征,发现雌激素诱导的特异性蛋白由两个亚单位组成,分子量分别为170和147kDa,该蛋白与成熟雌鱼所具有的特异性蛋白完全一致,而且分子量在其它硬骨鱼类卵黄蛋白原分子量范围之内,确定该蛋白为稀有鮈鲫的卵黄蛋白原。     

用鸡蛋清中的卵清蛋白测定常用超滤膜的切割分子量

提出了一种测定超滤膜切割分子量的简便方法,该法以鸡蛋清代替生化试剂作为标准分子量蛋白质,以卵清蛋白的截留率而不是截留率一分子量曲线作为判据来确定膜的切割分子量,切割分子量的确定范围为1万～6万．讨论了配制卵清蛋白溶液的适宜pH范围为10～11,实际使用质量分数为0．03％NaOH溶液即可;证明了用生化试剂和鸡蛋清配制的卵清蛋白溶液具有相同的分光光度性质,共享同一条浓度-吸光度工作曲线;阐明了比尔定律的适用范围,只需控制超滤前溶液的起始吸光度E。＝0．200左右就可用吸光度代替浓度计算膜对蛋白质的截留率;测定了不同鸡蛋中的卵清蛋白含量在10％～15％之间,同一只鸡蛋的蛋清中卵清蛋白的含量分布是相当均匀的;用已知切割分子量的膜测定了对卵清蛋白的截留率,并据此提出了确定切割分子量的判据;用细胞色素C的截留率证明了本法的适用性;还证明了用0．03％NaOH溶液配制的卵清蛋白溶液可在4～5℃下存放2～3周．     

双官能团大分子引发剂引发制备三嵌段共聚物

合成了以聚乙二醇400和聚氨酯预聚物为主体,两端各带有2-溴丙酰氧基的两种大分子引发剂,并以此分别对苯乙烯和甲基丙烯酸甲酯进行原子转移自由基聚合(ATRP),得到了PS-PEG-PS,PS-PU-PS,PMMA-PEG-PMMA,PMMA-PU-PMMA四种“大-小-大”三嵌段共聚物,用^1H-NMR、GPC、DSC、TGA分别对其进行了表征和检测。结果表明,两种大分子引发剂均能引发合成分子量可控、分子量分布较窄的嵌段共聚物,两种大分子引发剂对MMA的聚合速度明显高于St。热分析表明,三嵌段中的小嵌段,无论是较软的PEG-400或较硬的PU,均可使PS及PMMA的Tg有不同程度的下降。     

甲基丙烯酸2,2,2-三氟乙酯的可控聚合

采用活性阴离子聚合、原子转移自由基聚合(ATRP)溶液聚合法,分别对甲基丙烯酸2,2,2-三氟乙酯(TFEMA)进行分子设计,合成了结构明确的PTFEMA.采用IR,NMR,DSC对聚合物的结构与性能进行了表征;采用GPC对聚合物的分子量及其分子量分布进行了考察.     

表达重组蛋白的CHO-GS细胞的无血清培养

采用DOEHLERT和HADAMARD统计方法建立了一个适于重组CHOGS细胞生长和外源蛋白表达的无谷氨酰胺无血清培养基SFMB。对多种硫酸多聚糖进行了考察,选取低分子量硫酸葡聚糖,添加浓度为25mg/L,可以避免细胞结团。用SFMB在方瓶中培养重组CHOGS细胞,细胞生长优于含10%小牛血清的无谷氨酰胺DMEM/F12培养,最大细胞密度提高了40.7%,外源蛋白的表达水平也得到提高。在100ml转瓶中分批培养,最大细胞密度和蛋白表达分别达到1.5×106cells/ml和0.48mg/L。     

MALDI-TOF-MS法用于谷脱甘肽S-转移酶分子量的测定

利用MALDI-TOF-MS法测定了谷胱甘肽S-转移酶的分子量,并讨论和对比了三种不同基质对其影响,认为用α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-CHC)作基质是最佳适宜条件。实验结果表明本方法优于其它传统的测定生物大分子分子量方法。     

光引发合成聚丙烯腈研究

调控聚丙烯腈分子量及其分布一直是炭纤维制备的重要问题.本文以丙烯腈为反应单体,二甲基亚砜为溶剂,采用光引发方式结合溶液聚合方法研究聚丙烯腈的合成.分别用乌氏黏度计和凝胶色谱仪测定了聚合物的分子量和分子量分布,并用红外光谱仪以及核磁共振仪对聚合物的分子结构进行了分析.结果表明,不含化学引发剂的光引发溶液聚合方法所合成的产...     

膜法浓缩明胶蛋白水溶液

在中型板式超滤／纳滤器上,采用自制的荷负电膜进行了明胶蛋白水溶液的浓缩实验,探讨了一些因素对明胶蛋白的分离效果,确定了较合理的工艺参数。实验结果表明,用自制的膜浓缩明胶蛋白是可行的,有望改进现行的明胶生产工艺,并建议采用下列参数：膜的切割分子量为５万,流速压差范围为０．０６￣０．０８ＭＰａ,ｐＨ８,操作压力为０．３ＭＰａ,温度为５５℃。     

醋酸分子印迹电化学传感器的制备

基于循环伏安电化学聚合方法,以30mmol/L醋酸作为模板分子,5mmol/L苯酚作为功能单体,0.1mol/L氯化钾和0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=5.4)作为聚合底液,聚合电位为-0.8~1.2V,扫描圈数为20,以0.1mol/L碳酸氢钠溶液作为洗脱液进行洗脱20min,最终制得性能较佳的醋酸分子印迹电化学传感器。对该传感器进行循环伏安(CV)表征、阻抗表征、扫描电镜的形貌表征、差分脉冲表征,探索了不同pH磷酸盐缓冲溶液作为聚合底液、不同浓度洗脱液和不同洗脱时间对该传感器性能的影响。发现在以0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=5.4)作为最佳底液条件下,醋酸分子印迹电化学传感器与0~45×10^-9 mol/L浓度范围内醋酸分子二者呈现出良好的线性关系,其检出限为2.85×10^-9 mol/L,同时研究了该传感器的重现性和稳定性。     

中药黄芪蛋白成分的分离和分析

中药黄芪(Huangqi)的茎的抽提液经CM-SFF柱和Sephacryl S-200柱分离纯化,得到一种毒蛋白,用高效凝胶蛋白柱和反相高效液相色谱法分离后,利用光电二极管阵列检测器峰的光谱特性确认分离峰的纯度和蛋白特性,在高效凝胶蛋白柱上制备了少量毒蛋白纯样,测定了毒蛋白分子量和氨基酸组成。     

五种磺胺类药物残留的快速测定

采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),同时快速测定五种磺胺类药物残留。在Waters Nova-Pak C18 柱上,用紫外或PDA检测器,流速1.0 mL/min,柱温35℃,于267 nm波长处检测,流动相为5 mmol/L NaH2PO4 溶液-乙腈溶液(体积比为70∶30),磷酸调pH 3.0。完成整个色谱分离只须3.5 min,比原来的11 min大大减少了分离时间。     

低交联两性树脂吸附蛋白质与盐浓度关系的研究

研究低交联度两性树脂吸附刀豆蛋白与盐浓度的关系。通过盐浓度对吸附的动力学和热力学影响的研究，结果表明，在中性磷酸盐缓冲中，两怀树脂吸附刀豆蛋白，有盐（０．４ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ）的比无盐的扩散系数提高将近一半，且量增加其吸附等温线的效率在最初始部分高于无ＮａＣｌ时的；随着盐浓度（０￣１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ）的提高，树脂对蛋白的吸附最也变大，盐浓度提高时树脂听增大与蛋白吸附量的增加呈线性关系，内盐型     

HCl浓度对水合氧化铁复合吸附剂P吸附效能的影响

为避免传统水合氧化铁(HFO)负载树脂复合吸附剂制备过程中大量使用HCl对设备防腐、安全及环保带来的问题,优化HFO复合吸附剂的制备工艺方法,改变负载液中HCl浓度制备得到多种HFO复合吸附剂,考察制备得到的HFO复合吸附剂对P的吸附动力学、吸附等温线、初始pH、共存离子影响、解吸再生方法等,评价负载液中HCl浓度对吸附剂吸附效能的影响。结果表明,负载液中HCl浓度由2 mol·L?1降低至0.5 mol·L?1,并不会显著降低HFO复合吸附剂的P吸附容量。HCl浓度为0.5 mol·L?1时制备得到的HFO复合吸附剂对P的最大吸附容量为29.67 mg·g?1,显著高于D201树脂载体(16.39 mg·g?1),其吸附动力学曲线更符合准一级吸附动力学模型,最佳的P吸附pH为6~8,在共存离子Cl?、NO₃?、SO₄2?、CO₃2?浓度为1.0 g·L?1的条件下,吸附剂对P的吸附容量降低31.1%~53.0%。采用5wt%的NaOH溶液能有效实现吸附剂中P的解吸再生。      

高效毛细管电泳/电导检测法测定饮用水中的阴离子

本实验采用四乙烯五胺作为毛细管电泳的电渗流抑制剂,以10mmol/L Tris(三羟甲基氨基甲烷)+10mmol/L H3BO3(硼酸)+0.2mmol/L EDTA(乙二胺四乙酸)+0.2%(V/V)四乙烯五胺为电泳运行液,负高压分离(-15kV),电导检测,对饮用水中的Cl-、NO3-、SO42-三种阴离子进行了直接分离测定,并考察了分离电压,pH值,电解质溶液的组成及浓度,电渗流抑制剂,有机添加剂组成等对分离的影响。建立高效、快速的饮用水无机阴离子高效毛细管电泳/电导检测的分析方法。     

Stability of Vancomycin Hydrochloride Solutions at Various PH Values as Determined by High-Performance Liquid Chromatography

A stability-indicating HPLC assay method for the quantitation of vancomycin HCl has been developed. The developed method was used to study the effect of pH, phosphate buffer concentration and ionic strength on the stability of vancomycin HCl. The pH-rate profile curve showed 3 regions, acid-catalyzed, general base-catalyzed and the pH-independent region. The region of maximum stability was between pH 3.0 to about 5.7. On increasing the buffer concentration, phosphate ions hastened the decomposition of vancomycin HCl, the effect being more pronounced at pH 6.85 than at pH 4.43. In the pH region of 1-3, the decomposition was catalyzed by H⁺ and between pH 3-7 by HPO₄^2-, H₂PO₄^- and OH^-. An increase in the ionic strength decreased the rate of decomposition.     

On-column coaxial flow chemiluminescence detection for underivatized amino acids by pressurized capillary electrochromatography using a monolithic column

A new method for pressurized capillary electrochromatography (pCEC) coupling with chemiluminescence (CL) detection using a modified on-column coaxial flow detection interface was developed. To evaluate the feasibility and reliability of the experimental setup, the typical CL compounds luminol and isoluminol were separated and detected by using this pCEC-CL system. A detailed investigation of CL detection interface and postcolumn CL reagent flow rate parameters was described. The excellent resolution and detection sensitivity was achieved by using 3-microm ODS-C18 packed column with 30% ACN (v/v), 5 mmol/L phosphate buffer (pH 8.0). Moreover, with the presence of Co(II) (1.0 x 10(-4) mol/L) in the mobile phase, the linear range of the concentration for luminol was 2.0 x 10(-9)-2.0 x 10(-6) mol/L with a detection limit (S/N = 3) of 2.0 x 10(-10) mol/L, and 2.5 x 10(4) theoretical plates was achieved. In addition, separation and detection of the underivatized amino acids (l-threonine and l-tyrosine) were accomplished by using a polymerized monolithic column based on the principle of the luminol-H2O2-Cu(II)-amino acid CL system. Under the optimum conditions, the mixture of amino acids was efficiently separated with satisfactory results.     

基于钴(Ⅱ)-酪氨酸络合作用的酪氨酸极谱法分析研究

在0.02mol/L硼酸盐缓冲溶液(pH8.7)中,钴(Ⅱ)与酪氨酸生成的络合物在-0.82V(vs.SCE)有一阴极极谱还原峰。基于该极谱行为建立了酪氨酸的分析体系并进行实验条件优化,其浓度在8.0×10-5至4.0×10-4mol/L之间与极谱峰电流呈良好线性关系,检出限为2.8×10-6mol/L。