固定化脂肪酶的制备及其酶学性质的研究

以大孔树脂为载体进行脂肪酶的固定化,通过优化固定化条件得到高活性固定化脂肪酶并对其酶学性质进行研究。结果表明:弱碱性大孔阴离子交换树脂D301R是最佳的固定化载体;最优固定化条件为加酶量10%(以大孔树脂质量计),加水量30%(以大孔树脂质量计),4℃下在异辛烷中固定5 h。与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、储存稳定性、吸附稳定性和对有机溶剂的抗逆性,循环使用6次,水解橄榄油的酶活回收率仍可达到50%。     

海洋脂肪酶YS2071的固定化及酶学性质研究

为提高脂肪酶的利用效率,更好应用于工业化生产,研究了脂肪酶YS2071的固定化技术,筛选最优载体,通过单因素实验法对脂肪酶固定化的条件进行优化,并对其性质进行了研究。采用MI-BSI伯胺功能基吸附树脂为载体,京尼平为交联剂,吸附-交联的方法,分析了加酶量、吸附时间、吸附温度、初始pH、交联剂的浓度、交联时间等因素对脂肪酶固定化效果的影响,并通过PB实验和响应面实验,确定了最佳固定化条件:加酶量为8 mg,吸附时间8 h,吸附温度为20℃,初始pH 8.6,交联剂质量浓度为0.48 g/L,交联时间为1 h时,固定化效率最高,酶活回收率达到60%以上。     

转氨酶的固定化及酶学性质研究

利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50:6:5,在pH为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h.将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0的100 mmol/L磷酸钾缓冲液中,30℃保温30 h.取出后置于pH为8.5的3 mol/L甘氨酸-NaOH缓冲液中,25 ℃保温12h,制得固定化转氨酶,其比活力为52.7 U/g(湿载体),酶活回收率达到49.3％.酶学性质研究表明:固定化转氨酶催化反应最适pH、温度分别为7.0、50℃;固定化酶热稳定性及pH稳定性明显提高,50℃条件下的半衰期为20.2 d;在pH 8.0的三乙醇胺缓冲液中(4℃),10 d后酶活仍保持初始酶活的82.3％.     

游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质

研究游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质,结果表明,游离酶的最适温度为55℃,最适pH为4.0,明胶固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为3.5,固定化酶的稳定性比游离酶更好,底物与固定化酶的亲和力增强。     

海藻酸钠固定化碱性蛋白酶制备及酶学性质的研究

对采用海藻酸钠固定化碱性蛋白酶的方法和酶学性质进行了研究。在单因素实验基础上,采用响应面优化方法确定固定化的最优条件,得到的最佳条件为:海藻酸钠浓度3.1%,pH9.4,CaCl2浓度3.0%,游离酶添加量10000U/g,时间1.8h,固定化酶活力可达5518U/g。固定化酶的最适pH为10,最适温度为60℃,制得的固定化酶的热力学稳定性和操作稳定性较好。此外,固定化酶重复利用5个循环后酶活力仅降低40%。     

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl₂,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。     

牛肾溶菌酶的分离纯化及部分酶学性质

将新鲜牛肾匀浆后,经由缓冲液提取,正丁醇除脂,硫酸铵分级沉淀,CM-Sepharose阳离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析后得到电泳纯的牛肾溶菌酶。结果表明：该酶比活力为15 145.63 U/mg,回收率为29.13%,纯化倍数为231.05;分子质量约12.66 kD,为单亚基酶。最适反应温度为65 ℃,在65 ℃以下较稳定;最适pH 9.0,pH值在3.0～9.0范围内稳定性较好;测得最适条件下牛肾溶菌酶对溶壁微球菌的Km值为0.399 μg/mL;甲醇、乙醇、异丙醇和硫氰化钾（KSCN）对该酶有激活作用;十二烷基硫酸钠、Pb2＋、Ag＋对该酶有明显抑制作用。     

棉纤维固定化菊粉酶酶学性质及连续降解菊糖的研究

无花果曲霉SK004发酵产生的胞外菊粉酶经部分纯化,采用共价键吸附法固定在4-甲苯磺酰氯活化的棉纤维上。以菊糖为底物,固定化酶反应的最适温度为60℃,最适反应pH为5.0。热稳定性及酸碱稳定性几乎没有变化。在装有固定化酶的填充床反应器中,50℃,0.2mL/min流速下,5%菊糖可达到100%水解率,定容产率43g·L-1·h-1;10%菊糖的水解率为70%,定容产率53g·L-1·h-1,操作半衰期19d。     

棉纤维固定化菊粉酶酶学性质及连续降解菊糖的研究

无花果曲霉SK004发酵产生的胞外菊粉酶经部分纯化,采用共价键吸附法固定在4-甲苯磺酰氯活化的棉纤维上。以菊糖为底物,固定化酶反应的最适温度为60℃,最适反应pH为5.0。热稳定性及酸碱稳定性几乎没有变化。在装有固定化酶的填充床反应器中,50℃,0.2mL/min流速下,5%菊糖可达到100%水解率,定容产率43g·L-1·h-1;10%菊糖的水解率为70%,定容产率53g·L-1·h-1,操作半衰期19d。      

黑曲霉果胶酯酶固定化前后酶学性质比较研究

采用明胶加戊二醛包埋法和蛋壳微粒吸附法分别对黑曲霉果胶酯酶进行了固定化,并研究了两种固定化方法制备得到的固定化黑曲霉果胶酯酶的酶学性质.结果表明,通过固定化,黑曲霉果胶酯酶的各项酶学性质指标都得到了改善,明胶固定化果胶酯酶和蛋壳固定化果胶酯酶的酶活回收率分别为46.3%和42.2%,而且与游离果胶酯酶相比,两种固定化酶的最适温度都由40℃上升到45℃,最适pH由4.4下降到4.0和4.2,Km值0.0113%由下降到0.0033%和0.0027%.     

大孔树脂固定化磷脂酶A1及其用于菜籽油脱胶工艺的优化

选择8种大孔树脂对磷脂酶A1进行固定化,结果表明,离子交换树脂D001的固定化效果最好,其优化的最佳条件为缓冲液pH5.0、酶添加量1.5mL/g、固定化时间4h,在该条件下获得的固定化酶活力为665.8U/g。将固定化酶用于菜籽油脱胶实验,经响应面优化确定最优脱胶条件为固定化酶添加量1.8g/kg、反应时间3.6h、反应温度51℃、反应pH5.5,在此条件下得到的脱胶油中磷含量为5.82mg/kg。将固定化酶重复脱胶5次后,仍保留初始酶活力的47.9%,脱胶油中磷含量为9.78mg/kg。     

大孔吸附树脂脱除洋葱多糖色素技术研究

以黄皮洋葱为原料提取出洋葱粗多糖,采用大孔吸附树脂对多糖提取液中色素脱除技术进行研究。结果表明：优选出AB-8树脂、用量1g/20mL多糖提取液、pH5.0、温度40℃、质量浓度2792.5mg/L洋葱粗多糖液以3BV/h流速通过树脂柱,测得洋葱多糖液色素的脱除率86.71%,多糖保留率88.92%,表明AB-8树脂适合用于洋葱多糖提取液脱色。     

大孔树脂D101固定中性脂肪酶及其生物催化应用

以大孔树脂D101固定化中性脂肪酶,研究了固定化条件对酶催化活性的影响,得到了最佳固定化条件:给酶量为90IU/g,固定化温度为35℃,时间为12h,此时固定化酶的活力回收约为60%。固定化酶的半失活温度由游离酶的53℃提高到57℃,最适反应温度和最适pH分别由42℃上升至44℃和由7.5下降到7.3。对固定化中性脂肪酶在生物柴油合成中应用也进行了初步研究。     

AB-8大孔树脂对槐花总黄酮吸附性能研究

目的：探讨AB-8大孔树脂对槐花中总黄酮静态和动态的吸附性能。方法：用微波辅助法得到粗提液,利用分光光度法测定样品中黄酮含量,考察吸附剂用量、粗提液浓度、pH值、吸附时间等条件对吸附结果的影响。结果：AB-8树脂对槐花中总黄酮具有较好的吸附性能。静态吸附最佳条件：树脂与提取液比为1:20(g/ml)、25℃、pH5～6、粗提液中的黄酮含量0.10～0.17mg/ml、恒温振荡70min、70%乙醇洗脱,在此条件下,黄酮总回收率为71.94%;动态吸附的最佳条件为：提取液上样质量浓度0.045～0.070mg/ml、pH5、以0.2ml/min的流速通过径高比为1:8的层析柱,70%的乙醇4BV洗脱,在此条件下,黄酮总回收率为39.32%。结论：AB-8树脂较适于分离纯化槐花总黄酮。     

大孔树脂NKA-9负载RML催化高酸价油脂脱酸及制备甘油二酯

本文采用了大孔树脂NKA-9作为载体负载脂肪酶RML,然后用于催化油酸含量为25%的大豆油脂以酶促脱酸并同时制备富含甘油二酯(DAG)的油脂产品。研究采用了扫描电镜(SEM)和X-射线光电能谱仪(XPS)对NKA-9负载酶前后进行了结构表征,结果表明RML已成功负载在NKA-9上。所得固定化酶RML@NKA-9催化油酸含量为25%的大豆油脱酸及DAG制备的优化条件为:反应温度50℃,甘油用量为油脂质量的8%,RML@NKA-9用量为油脂质量的3%,在该条件下反应8 h后达到平衡,此时DAG含量58.95%,游离脂肪酸(FFA)含量降低至1.50%。此外研究了RML@NKA-9的重复利用性,结果表明,RML@NKA-9重复使用4次后其酶活几乎没有损失,重复使用6次后其酶活为初始酶活的49.10%。本研究制备的RML@NKA-9能有效脱除高酸价油脂中的FFA,并获得了可观含量的DAG,具有一定的重复利用性,因此,RML@NKA-9具有较大的应用前景。     

大孔树脂对脂蛋白的吸附研究

对大孔吸附树脂对低密度脂蛋白(LDL)的体外吸附过程进行研究。对3 种大孔树脂在相同的实验条件下进行小牛血清的脂蛋白吸附,通过比较3 种树脂对LDL 的吸附能力,选取出较适宜进行LDL 吸附的大孔树脂D113。然后在吸附柱上进行动态吸附,并通过数学模型进行吸附过程的描述。结果表明：模型的描述与实验结果相一致,对吸附过程的设计和实验有一定的参考价值。     

AB-8大孔树脂分离纯化枸骨叶总黄酮的工艺研究

以静态吸附与解吸为考察指标,利用五因素四水平的正交试验对AB-8 型大孔树脂分离纯化枸骨叶总黄酮的工艺进行研究。结果表明,AB-8 型大孔树脂对枸骨叶总黄酮有较好的纯化效果,最佳纯化工艺条件为吸附液pH4.5、吸附时间4h、解吸液体积与树脂质量之比为25:1(mL/g)、解吸液为体积分数90% 的乙醇、解吸时间2.25h,在此条件下,总黄酮回收率可达90.8%,纯度为33.4%。     

溶菌酶LyAa在黑曲霉中的高效表达与酶学性质分析

该研究探讨了将嗜碱顶孢霉中的GH25溶菌酶基因进行密码子优化后,构建包含糖化酶信号肽的溶菌酶单拷贝和双拷贝表达载体并均由启动子PnaⅡ控制表达,利用双拷贝表达载体和CRISPR/Cas9基因编辑工具,使用PEG介导法转化无孢黑曲霉宿主HL-1,获得高酶活力的溶菌酶表达菌株。重组菌株LyAa-C的溶菌酶活力达到2 291.37 U/mL,是仅使用双拷贝表达载体的LyAa-F菌株酶活力（869.74 U/mL）的2.63倍,是仅使用传统单拷贝表达载体的LyAa-T菌株酶活力（358.41 U/mL）的6.39倍。通过6×His标签使用镍柱亲和层析成功纯化了重组溶菌酶LyAa,并对其酶学性质进行了分析。溶菌酶LyAa蛋白大小约为25.0 ku,最适pH值为4.0,最适温度为30 ℃,并显示出良好的胃蛋白酶稳定性。综上,该研究基于双拷贝载体和CRISPR技术成功优化和提高了溶菌酶在黑曲霉中的表达。     

S-8大孔吸附树脂富集紫胶色酸

以提取液中紫胶色酸的含量为指标,通过静态吸附-解吸和动态吸附-解吸紫胶色酸提取液,确定S-8大孔吸附树脂富集紫胶色酸的工艺参数。结果表明：S-8大孔吸附树脂对紫胶色酸有良好的吸附性能,静态吸附过程中S-8大孔吸附树脂在30 ℃条件下吸附4.5 h后达到对紫胶色酸的最佳饱和吸附,吸附液流速为2 mL/min时,S-8大孔吸附树脂达到动态饱和最佳吸附;解吸液为95%乙醇溶液、100 mL乙醇中加1.0 mL 2 mol/L的盐酸溶液、解吸液流速3 mL/min时色酸富集效果好,解吸率大于90%;经20 次重复吸附/解吸后对紫胶色酸的解吸率依然达到89.50%,树脂可多次重复使用;经大孔吸附树脂富集精制后的紫胶色酸含量由24.77%提高至62.92%,纯度提高了1.54 倍,富集后紫胶色酸的得率（以原胶质量计）达到0.52%,说明采用S-8大孔吸附树脂富集紫胶色酸是可行的。