酪蛋白酶解液中β-酪啡肽-7的液相色谱检测

研究活性多肽β-酪啡肽-7的检测.采用高效液相色谱法对胃蛋白酶解样品中活性肽(β-酪啡肽-7)进行测定.结果表明,对比标准品的保留时间发现水解0.5,1.5,2.5h的1,3,5号样品含有β-酪啡肽-7.经过重复进样,结果仍然一致.     

胃蛋白酶水解酪蛋白生成β-酪啡肽-7的研究

研究酪啡肽生成最佳水解条件的确立。首先通过单因素试验研究了底物浓度、酶浓度、温度和pH值对水解的影响,并依据水解度的差异,选取了单因素最佳条件,而后选取4因素3水平正交试验设计对最佳酶解条件进一步探讨,确定最佳酶解条件为酪蛋白底物浓度10mg/mL,酶浓度1%,pH1.6,55℃水浴。     

乳源酪啡肽的研究进展

80年代以来，国外一些学者相继从酪蛋白的酶解产物中发现生物活性肽，证明乳除了具有营养作用外，还具有重要的生理作用。酪啡肽就是其中重要的乳源阿片肽，自从1979年Brantl等人首先从酪蛋白的水解产物中分离到β-酪啡肽-7，对于酪啡肽的制备、分离、纯化等各个方面均有广泛的研究。随着具各种生物活性的短肽的不断发现，其研究和开发日益受到各国学者的关注。     

高效液相色谱法测定β-酪啡肽

以SinoChrom 300A C8柱为分离柱,对高效液相色谱法测β-酪啡肽进行了研究.结果表明,以水(内含体积分数为0.1%TFA)和体积分数95%乙腈(内含体积分数为0.1%TFA)分别为流动A相和B相,在梯度洗脱流速1.0 mL/min,检测波长215 nm条件下,β-酪啡肽-5和β-酪啡肽-7被有效分离且具有较大的响应值,峰面积和保留时间具有良好的稳定性.同时在β-酪啡肽-5和β-酪啡肽-7质量浓度分别为1.0 g/L和1.2 g/L时,进样体积与峰面积呈良好的线性关系(回归系数r分别为0.9950和0.9955).该法可快速准确分离分β-酪啡肽.     

体外消化模型中酸乳β-酪啡肽-7和β-酪啡肽-5的释放及阿片活性

酸乳经过人体消化可在胃肠中产生具有舒缓紧张情绪的β-酪啡肽（β-casomorphin,β-CM）,为探究其在胃肠道中的释放量及其生物活性,本实验采用体外消化模型,模拟酸乳在体内的消化过程,采用高效液相色谱法检测β-CM-7、β-CM-5的释放;并用NG108-15神经杂交瘤细胞体外实验和小鼠体内实验测定其阿片活性。结果：在模拟胃消化液、胰消化液中,酸乳经消化释放的β-CM-7质量浓度分别是40.24、47.81 μg/mL,β-CM-5质量浓度分别是88.00、82.04 μg/mL。两种酸乳消化液均能降低NG108-15细胞内腺苷酸环化酶活力,且此作用可被纳洛酮逆转,体现了β-CM的阿片活性。小鼠在注射酸乳胃消化液30 min后达到最强的镇痛活性,痛阈提高率达到59.80%;注射纯化后的高剂量酸乳胃消化液使小鼠的平均游泳时间延长了18.94 min,表明酸乳胃消化液具有较好的抗疲劳作用。结论：人类在饮用酸乳后体内产生了β-CM,且酸乳β-CM具有阿片活性,能够对人体起到镇静舒缓、抗疲劳等功效。     

乳源β-酪啡肽-7对老年小鼠肾功能的影响

本文研究了β-酪啡肽-7对老年小鼠肾功能可能的影响。50只雄性昆明小鼠,按组分别灌胃0.90%的生理盐水和低、中、高剂量的β-酪啡肽-7。连续灌胃30d后,收集所有小鼠的血清及组织样本进行检测。组织病理学研究显示β-酪啡肽-7对老年小鼠的肾脏组织老化有一定改善作用,但高剂量组小鼠的肾小体肿胀似乎没有减轻,并且上皮细胞有坏死脱落现象。与模型组相比,中剂量组小鼠的血清肌酐(CRE)水平、肾脏组织中总抗氧化能力(T-AOC),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性分别增加了22.16%、69.02%、71.26%(p0.05)和24.41%,而高剂量组分别增加了13.12%、64.88%、67.33%(p0.05)和17.90%。提示β-酪啡肽-7可以调节老年小鼠的肾功能,增加其抗氧化能力,但不是剂量依赖式作用。此外,干预低中剂量β-酪啡肽-7小鼠的MDA含量都比模型组低(分别降低了15.40%、3.17%),但高剂量组反而提升了16.08%,说明高剂量组小鼠肾脏的氧化有所加重。上述结果表明,β-酪啡肽-7有改善老年小鼠肾功能异常的可能,可能通过提高抗氧化能力来改善衰老引起的老化损伤,但摄入过多β-酪啡肽-7似乎会加重肾脏负担。     

β-酪啡肽的生物活性的研究进展

酪蛋白(CN)约占牛乳蛋白的80%,主要由四种成分组成:α_s1-、α_s2-、β-和κ-。乳源中的主要生物活性多肽是由酪蛋白合成。酪啡肽通常是从β-酪蛋白得到,所以也称β-酪啡肽。β-酪啡肽(β-casomorphin,β-CM)作为来源于β-酪蛋白的小分子多肽,具有阿片肽活性,在过去几十年中,随着各种生物活性肽的研究发现,酪啡肽的研究受到了广泛关注,有关β-CM对健康的潜在影响的研究提供了更多结果。本文对这些研究进行了综述,强调了β-CM可以调整消化道的运动,影响胃肠内分泌,同时还能吸收进入血液,并且具有镇静止痛、诱导睡眠等作用,可以导致神经紊乱和神经元发育的改变。相反,β-CM的作用对其他非传染性疾病的发病或恶化的影响仍需要证据证明。总的来说,文献综述表明,“β-CM的生物活性”在人类营养中仍然是一个有趣的、但没有被详尽解释的话题。     

β-酪啡肽-7对大鼠血糖及脂质过氧化的影响

目的:观察β-酪啡肽-7(β-casomorphin-7,β-CM-7)对糖尿病大鼠的降血糖作用并初步阐明其作用机制。方法:2月龄SD雄性大鼠40只,用链脲佐菌素(STZ)致大鼠糖尿病,造模成功后将大鼠分为4个组:空白对照组、糖尿病对照组、胰岛素治疗组(优泌林3.7×10-8mol/(只.d))、实验组(β-CM-7 7.5×10-8mol/(只.d))。实验周期30d。测定血清中血糖含量、脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、胰岛素和胰高血糖素的含量以及腿肌糖原、肝脏糖原的含量。结果:β-CM-7组与胰岛素治疗组大鼠血糖明显下降;同时血清中MDA水平降低,SOD活性升高,与糖尿病对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);β-CM-7组胰岛素含量较糖尿病组有所增加,肌糖原含量较空白组显著升高(P<0.05)。结论:β-CM-7具有减轻链脲佐菌素性糖尿病大鼠氧自由基损伤、促进胰岛素分泌、加速肌糖原的合成、降低血糖的作用。     

乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用研究

探讨了乳源β-酪啡肽-7对自然衰老小鼠的抗衰老作用及其可能机制.选取10只2月龄C57小鼠作为青年对照组;40只16-18月龄C57小鼠随机分为自然衰老模型组β-酪啡肽-7处理组,其中β-酪啡肽-7处理组小鼠在饲喂与模型组相同日粮的基础上,每天灌胃高、中、低3种剂量的β-酪啡肽-7溶液.连续喂养60 d后,眼眶采血吸取...     

β—酪啡肽—7的多克隆抗体的制备

β-酪啡肽-7经戊二醛与牛血清白蛋白（BSA）交联后的复合物免疫伊莎蛋鸡5只。6个月后，对鸡血清、所产蛋的卵黄和卵黄氯仿抽提上清液进行琼扩效价分析，结果表明，血清抗体的最高效价达到1：8，后两者的效价为1：4。     

反相高效液相色谱法检测大豆蛋白外啡肽的研究

大豆蛋白序列中隐藏着外啡肽β-酪啡肽-3（β-CM-3）的片段,使得大豆肽食品中含有外啡肽β-CM-3成为可能,因此有必要对大豆肽食品进行外啡肽β-CM-3定性和定量的检测。采用反相液相色谱的方法,以β-酪啡肽-3标准品进行了包括分离柱、流动相的选择、柱温、柱压、流速、检测波长和灵敏度等色谱条件的探索,得出检测条件为波长220nm,柱温25℃,进样量10μL,采用等度洗脱,洗脱条件为:含0·1%TFA的14%乙腈溶液。流速0·9mL/min,洗脱时间为60min。该方法的相对标准偏差为4·07%,平均回收率为95·3%,最小检测浓度为0·4μg/mL。对照标准品保留时间和峰面积,得出酸性蛋白酶/Alcalase=4h/2h酶解液中含有目标外啡肽156·41μg/g。      

反相高效液相色谱法检测大豆蛋白外啡肽的研究

大豆蛋白序列中隐藏着外啡肽β-酪啡肽-3(β-CM-3)的片段,使得大豆肽食品中含有外啡肽β-CM-3成为可能,因此有必要对大豆肽食品进行外啡肽β-CM-3定性和定量的检测。采用反相液相色谱的方法,以β-酪啡肽-3标准品进行了包括分离柱、流动相的选择、柱温、柱压、流速、检测波长和灵敏度等色谱条件的探索,得出检测条件为波长220nm,柱温25℃,进样量10μL,采用等度洗脱,洗脱条件为:含0·1%TFA的14%乙腈溶液。流速0·9mL/min,洗脱时间为60min。该方法的相对标准偏差为4·07%,平均回收率为95·3%,最小检测浓度为0·4μg/mL。对照标准品保留时间和峰面积,得出酸性蛋白酶/Alcalase=4h/2h酶解液中含有目标外啡肽156·41μg/g。     

β-酪啡肽对早期断奶仔猪生长性能及小肠形态、菌群、吸收功能的影响

将26头21日龄早期断奶仔猪随机均分2组.在其日粮中添加β-酪啡呔,探讨β-酪啡呔对其生长性能及小肠形态、菌群、吸收功能的影响.经3周饲喂后发现①第1周至第3周的日增重分别提高33.33%(P<0.01)、16.13%(P<0.05)和2.5%(P>0.05),饲料转化率分别提高13.73%、6.11%和1.21%,腹泻率分别降低41.67%(P<0.05)、10%(P>0.05)和0%;②在第1周内能极显著(P<0.01)地改善小肠形态、菌群以及对D-木糖的吸收能力,而第2周后差异不再显著(P>0.05);③β-酪啡肽在仔猪早期断奶后1～2周内投喂,是缓解断奶应激最合理的一种经济方式.     

乳源β-酪啡肽-5对C2C12细胞的抗氧化损伤作用

通过建立过氧化氢(H2O2)对C2C12细胞的氧化损伤模型,从细胞水平探讨β-酪啡肽-5(β-casomorphin5,β-CM5)对H2O2致氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法：1) MTT法测定72h内β-CM5对C2C12细胞活力的影响,筛选安全剂量;2)测定不同浓度H2O2对C2C12细胞活力的影响,筛选H2O2的最佳剂量和作用时间;3)测定β-CM5对H2O2损伤后细胞活力的影响;4)检测培养液中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性。结果：1)β-CM5各浓度组MTT值与对照组无差异;2)0.25mmol/L的H2O2作用于C2C12细胞 1h,MTT值显著低于对照组 (P＜0.01);3)与损伤组相比,β-CM5预保护组的MTT值显著升高(P＜0.05),治疗组MTT值无明显变化;4)与损伤组相比,β-CM5预保护组的SOD活性显著提高(P＜0.05),LDH活性显著下降(P＜0.05)。结论：β-CM5具有较强的抗氧化作用,对H2O2损伤的C2C12细胞有明显的保护作用,其机制可能与增强抗氧化酶活力和维持细胞完整性有关。     

液相色谱-高分辨串联质谱法测定奶粉中A2β-酪蛋白及β-酪蛋白与乳清蛋白含量关系的研究

目的:建立奶粉中A2β-酪蛋白分离定量的液相色谱-高分辨串联质谱法,并利用婴儿配方奶粉中酪蛋白、乳清蛋白和总蛋白含量的关系,间接得到乳清蛋白含量。方法:样品经前处理后,采用ACQUITY UPLC HSS T_(3)柱(100 mm×2.1 mm×1.8μm),0.1%甲酸-水和乙腈为流动相,梯度洗脱分离。多反应离子监测模式定量测定其中的A2β-酪蛋白特征肽。结果:在0.02~2.0μmol/L范围内线性关系良好(r=0.9938)。在低、中、高三水平加标试验中,回收率在94.9%~98.7%,相对标准偏差在1.7%~3.7%,检出限为0.80 mg/100 g,可满足对奶粉中A2β-酪蛋白定量要求。采用该法对市售11批声称A2奶粉和18批未声称A2奶粉(以下简称A2奶粉和普通奶粉)中A2β-酪蛋白进行测定。结论:A2奶粉中A2β-酪蛋白占总β-酪蛋白含量的86.2%~98.7%,而普通奶粉则低至20.0%~50.0%。另外,乳清蛋白含量的间接测定值和理论计算值经统计分析,无明显差异(P>0.05),为分析婴儿配方奶粉中乳清蛋白含量是否符合国标要求提供参考。     

响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体检测方法的酶解条件

利用响应曲面法优化β-酪蛋白及其A1、A2型变异体超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法的酶解条件。将酶解设备（X1）、酶解时间（X2）和酶加入量（X3）作为影响因子,以A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）的质量浓度为评价指标。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理,针对检测方法中酶解反应这一关键步骤,通过单因素实验优选,响应曲面法研究酶解时间（X2）和酶加入量（X3）与A2型β-酪蛋白(Y1)、A1型β-酪蛋白(Y2)和β-酪蛋白总量（Y3）之间的关系。确定最佳酶解条件为：酶解设备（X1）为水浴摇床,酶解时间（X2）为2.5 h,酶加入量（X3）为15μL。     

RP-高效液相色谱法测定胡萝卜中的维生素A原及叶黄素

使用石油醚:丙酮=1:1(v:v)提取胡萝卜中的类胡萝卜素,用RP-高效液相色谱测定成熟期的维生索A原(α-胡萝卜素、β-胡萝卜素)和叶黄素.流动相为甲醇:乙腈=90:10(v:v),流速为0.8mL/min,检测波长为450nm.α-胡萝卜素、β-胡萝卜素和叶黄素的回收率依次为:98.8%、99.3%、99.0%.成熟期胡萝卜中检测到α-胡萝卜素、β-胡萝卜素和叶黄素的含量分别为:190.573、308.930、0.325μg/g.     

SPE-HPLC法测定啤酒中的微量反-2-壬烯醛

采用固相萃取-高效液相色谱法对啤酒中的微量反-2-壬烯醛进行检测.啤酒样品经水蒸汽蒸馏、Supelclean LC-18固相萃取小柱净化后,采用Nucleosil 100-5 C18色谱柱(250mm×4.0mm,5μm)分离,流动相乙腈:水=55:45(V/V),流速为lmL/min,检测波长226nm.在10～150μg/L范围内,峰面积与反-2-壬烯醛浓度呈良好的线性关系(r=0.9998),精密度(RSD)小于5%,样品浓缩250倍后检测限为0.25μg/L,平均回收率在80.4%～109.8%之间.     

高效液相色谱测定食品中非食用色素皂黃

建立了食品中非食用色素皂黄的高效液相色谱检测方法.样品经丙酮超声波提取,以乙睛-5mmol/L乙酸铵 0.06%三乙胺水溶液为流动相,XDB-C18色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,检测波长为418nm.该方法线性范围为0.5～15μg/mL,最低检出浓度为O.08mg/L,变异系数为0.4%～3.6%,加标平均回收率为102.29%,方法准确可靠,精密度较高.     

双酚A残留的检测方法研究

建立了用液相色谱.串联质谱技术测定双酚A残留的方法.质谱采用电喷雾电离源(ESI).负离子采集模式,选择反应监测技术(SRM),定量离子对为m/z 227>132、114;甲醇.水(3:7)为流动相,流速500μl/min.方法的检出限为1.8ng/ml,线性范围20.0～2000.0ng/ml,回收率91%.并实验比较了液相色谱紫外检测器与串联质谱检测的灵敏度和选择性,结果表明LC-MS2方法灵敏、准确、快速.