超声波联合酶解处理对β-伴大豆球蛋白抗原性的影响

试验以大豆分离蛋白为原料,选择超声波和酶解联合处理大豆蛋白,采用间接竞争ELISA法和免疫印迹法测定大豆主要抗原蛋白β-伴大豆球蛋白的抗原性和免疫活性,并分析超声波和酶解处理后大豆蛋白的结构变化。结果表明,超声波联合酶解处理能够显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性和免疫活性, 400 W、15 min超声波预处理的大豆蛋白质再经酶解处理后,β-伴大豆球蛋白的抗原抑制率降低了61.15%;电泳结果显示,超声波联合酶解处理能够使蛋白质肽键断裂,分解为小分子肽段;表面疏水性结果表明,蛋白质的空间结构发生解聚和重新聚合,三四级结构被破坏,构象型表位可能被改变。β-伴大豆球蛋白的抗原性的变化主要是因为超声波与酶解联合引起大豆蛋白氨基酸序列及空间结构的变化。     

大豆蛋白水解度与大豆肽抗氧化力关系研究

通过研究酶解大豆蛋白的水解度与大豆肽的抗氧化力大小,探索大豆蛋白水解度与大豆肽抗氧化力的关系。结果表明,两种组合蛋白酶所水解大豆蛋白的水解度大于其中任一种蛋白酶的水解度,小于两种蛋白酶的水解度之和;组合蛋白酶制备的大豆肽抗氧化力也大于其中任一种蛋白酶制备的大豆肽抗氧化力,小于两种蛋白酶制备的大豆肽抗氧化力之和;大豆肽抗氧化力的大小和大豆蛋白的水解度、单一蛋白酶及组合蛋白酶的种类有关,大豆肽抗氧化力有最佳水解度范围（18%~19%）,大豆蛋白水解度过大或过小时,大豆肽抗氧化力都会下降。     

碱性蛋白酶控制酶解诱导大豆分离蛋白纳米颗粒的形成机制

以大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）为原料,利用碱性蛋白酶对其进行酶解处理（0～24 h）,探究SPI的结构变化规律,发现碱性蛋白酶控制酶解可诱导SPI自组装形成系列分布均匀（多相分散系数＜0.3）、粒径可控（90～200 nm）且具有不同表面特性的大豆蛋白纳米颗粒（soy protein nanoparticles,SPNs）,其中水解度（degree of hydrolysis,DH）及亚基解离/降解是影响SPNs形成的关键性因素。酶解初期（10～30 min,DH约3%）,SPI中β-伴大豆球蛋白（7S）组分α与α’亚基的部分降解有利于两亲性结构的释放,提高蛋白表面疏水性,降低临界聚集浓度,形成包含相对完整的7S及大豆球蛋白（11S）亚基的I类纳米颗粒（SPNs-DH 3%）。随着酶解时间的延长（1～2 h）,α与α’亚基的进一步降解促进了疏水性β亚基与B亚基的暴露,增强的疏水相互作用导致体系浊度增加,其中可溶性聚集体向不溶性疏水聚集的转化使得蛋白表面疏水性急剧下降,形成以A亚基及部分β亚基为主导的II类亲水型纳米颗粒（SPNs-DH 5%）。酶解后期（4～24 h）,A亚基的进一步降解则产生更多亲水性多肽,不利于纳米颗粒的形成。进而探究SPNs的形成机制,圆二色光谱结构表明,SPNs的形成与蛋白α-螺旋和无规卷曲结构向β-折叠转化有关。两类SPNs的整体结构均由疏水相互作用维持,而氢键和二硫键分别参与颗粒表面与内部结构的形成。与SPNs-DH 3%相比,SPNs-DH 5%中形成了更多由二硫键与氢键稳定的折叠结构。此外,由于酶解过程中不断释放抗氧化肽段,其所形成SPNs的抗氧化性较原始SPI均有所提升。     

响应面法优化元宝枫籽粕酶解工艺及多肽功能特性研究

本文以元宝枫籽粕为原料,采用碱性蛋白酶法对元宝枫籽粕进行酶解,以酶解时间、加酶量、pH、酶解温度、料液比为考察因素,酶解多肽得率为评价指标,在单因素实验的基础上,根据Box-Behnken中心组合实验设计对元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽制备工艺进行优化,并对优化工艺获得的酶解多肽进行了氨基酸组成、吸水性、吸油性、起泡性质、乳化性质和表面疏水性等功能特性表征。结果表明:最优的酶解制备工艺为:酶解时间3.3 h,pH为10,加酶量为3%,酶解温度为55 ℃。在最优制备工艺条件下元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽得率为40.13%±0.15%。氨基酸组成分析表明酶解多肽所含八种必需氨基酸量高达20.3%,远高于国际粮农组织所建议成人所需必需氨基酸量。此外,酶解多肽的吸油性（4.553 g/g）高于大豆蛋白（2.61 g/g）,其表面疏水性（1365.3）与大豆7S球蛋白的表面疏水性相似,乳化性和乳化稳定性略低于大豆分离蛋白。本研究所获得的元宝枫籽粕碱性蛋白酶酶解多肽具有较好的功能特性,这也表明它可作为一种潜在的功能成分应用于食品中,为元宝枫籽粕的新应用开发提供数据和理论支撑。     

大豆蛋白改性酶解制备大豆肽的研究

利用大豆蛋白改性酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析大豆肽的分子量分布,并检测了大豆肽的体外抗氧化效果。结果显示：在20g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比8 000U/g、温度55℃、pH值7.5、水解时间5h,水解度为51.4%。大豆肽主要为130～1 000u的短肽,占肽总量的86.3%。大豆肽对超氧阴离子（O2·^-）和羟自由基（.OH）的半最大清除浓度分别为1.3mg/mL和8.0mg/mL。表明大豆蛋白改性酶对大豆分离蛋白的水解能力较强,大豆肽有较强的抗氧化功能。     

联合酶法提取豆渣蛋白肽和可溶性膳食纤维

豆渣是大豆加工的主要副产物之一,含有丰富的蛋白质和膳食纤维。为促进豆渣高值化利用,采用联合酶法从豆渣中提取蛋白肽和可溶性膳食纤维（SDF）。首先用碱性蛋白酶酶解豆渣蛋白,以蛋白肽得率为指标,通过单因素试验优化了提取豆渣蛋白肽的工艺条件,再将脱蛋白豆渣用纤维素酶酶解制备SDF,以SDF提取率为指标,通过单因素试验优化提取SDF的工艺条件。结果表明：碱性蛋白酶酶解提取蛋白肽最佳工艺条件为料液比1∶ 35、酶与底物比2%、酶解时间5 h、酶解温度50 ℃、pH 95,在此条件下豆渣蛋白肽得率为66.81%;纤维素酶酶解提取SDF最佳工艺条件为料液比1∶ 30、酶与底物比3%、酶解温度50 ℃、酶解时间2 h、pH 4.0,在此条件下SDF提取率为1554%。利用碱性蛋白酶和纤维素酶依次酶解后,豆渣总利用率达到了89.81%,这为豆渣综合开发利用提供了一种新途径。     

大豆酶解蛋白复合酶组合试验研究

将非淀粉多糖酶、蛋白酶进行优化组合,酶解处理豆粕,能将大豆中大分子蛋白质降解成小分子肽,同时消除抗营养因子,以提高蛋白质消化吸收利用率。试验采用两次正交试验设计和单因素试验,结果表明,优化组合非淀粉多糖酶形成非淀粉多糖复合酶,酶解处理豆粕,处理后豆粕中非淀粉多糖去除率达到24.91%;优化中性蛋白酶,酶解处理豆粕,处理后豆粕中肽的质量分数达到18.34%,大豆球蛋白去除率达到97.61%,β-伴大豆球蛋白去除率达到96.60%;经非淀粉多糖复合酶、中性蛋白酶复合处理豆粕后得到大豆酶解蛋白:粗蛋白质49.15%、酸溶蛋白28.32%、肽质量分数18.49%、非淀粉多糖11.74%、大豆球蛋白3.40 mg/g、β-伴大豆球蛋白4.90 mg/g、棉籽糖1.00 mg/g、水苏糖3.20 mg/g、脲酶活性0.01 U/g、粗灰分6.44%、钙0.44%、水分8.10%。     

生物解离大豆过程中形成的乳状液结构

以不同酶解时间（1、2、3?h）、不同酶添加量（1%、2%）生物解离大豆过程中形成的乳状液为研究对象,探究乳状液中乳滴聚集机制、结构特征及分子间相互作用。通过乳状液中蛋白水解度、显微镜观察、Zeta电位、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）、荧光色谱等指标的测定发现：经过蛋白酶酶解,乳状液中蛋白水解度在7%左右;生物解离使乳状液蛋白被酶解成分子质量较小的肽段,乳状液油脂与蛋白之间的亲和力降低,乳滴出现聚集,Zeta电位绝对值减小;SDS-PAGE条带上出现了由二硫键引起的大分子质量的蛋白聚集体;另外,乳状液荧光光谱中,乳状液相对于相同酶解条件下大豆分离蛋白荧光强度明显减弱,可能是由磷脂的存在、蛋白质-油脂之间的相互作用及蛋白质聚集体导致。     

大豆蛋白抗氧化活性肽的制备工艺研究

以豆粕为原料,优化大豆蛋白的最佳提取条件。以大豆蛋白为底物,以体外抗氧化活性为指标,从4种蛋白酶中筛选出一种碱性蛋白酶为最佳水解酶,并优化其最佳水解条件。结果表明:大豆粕的基本成分为蛋白质41.2%,水分10.1%。通过预处理大豆粕,选用豆粕与水的比例1∶10、pH值9.0及40℃条件下浸泡2 h,此时大豆蛋白提取率可达92.7%。采用碱性蛋白酶制备大豆蛋白抗氧化活性肽的最佳水解条件为:在底物浓度5%、酶底比0.7%、pH值8.5及温度50℃下酶解4 h,此时用亚油酸法测得大豆蛋白抗氧化活性肽的过氧化抑制率为82.2%。     

大豆低聚肽对自发性高血压大鼠血压及血浆血管紧张素的影响

目的：探究大豆低聚肽对于大鼠血压及血浆血管紧张素的影响。方法：采用酶法制备大豆低聚肽,随后进行体外血管紧张素I转换酶（angiotensin I converting enzyme,ACE）活性抑制实验及体内实验,实验设正常对照组（正常血压大鼠（WKY大鼠）饲喂高剂量大豆低聚肽）、阴性对照组（自发性高血压大鼠（SHR大鼠））、阳性对照组（SHR大鼠饲喂卡托普利）和低、中、高剂量组（SHR大鼠饲喂0.90、1.80、4.50 g/kg大豆低聚肽）,喂养30 d后,观察大鼠血压、心率、尿蛋白质量、血管紧张素II质量浓度等指标的变化。结果：大豆蛋白最佳酶解条件为：碱性蛋白酶和中性蛋白酶质量分数各0.1%、50 ℃酶解4 h,此条件下10 mg/mL大豆低聚肽ACE活性抑制率达到71.2%。经饲喂不同剂量大豆低聚肽30 d后,WKY大鼠血压变化不显著（P＞0.05）,SHR大鼠血压有下降趋势;饲喂高剂量大豆低聚肽在第4周时可以显著降低SHR大鼠血压和血管紧张素II质量浓度（P＜0.05）,但对于大鼠心率和尿蛋白质量无显著影响（P＞0.05）。结论：体外实验证明,与大豆蛋白相比,大豆低聚肽对于ACE活性的抑制效果更好;体内实验证明大豆低聚肽可以降低SHR大鼠的血压和血管紧张素II质量浓度,且对正常大鼠血压无明显影响,推测大豆低聚肽通过抑制ACE活性的方式发挥降压功效。     

响应面法优化大豆分离蛋白提取及复合酶解制备活性肽

用碱提酸沉法从大豆中提取大豆分离蛋白,并经单因素及响应面优化法确定大豆分离蛋白最佳提取工艺为碱提时间60 min、碱提温度60℃、碱提pH值11.0、酸沉pH值5.0.使用最佳提取工艺提取大豆分离蛋白提取率为29.25％.用胰蛋白酶、糜蛋白酶分别酶解大豆蛋白产生的肽均具有抑菌活性,而采用胰蛋白酶与糜蛋白酶复合酶解大豆分...     

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×105 Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

鸡肉酶解工艺及其产物功效研究进展

鸡肉蛋白在适宜的工艺条件下与蛋白酶发生酶促水解反应，从而使肽键断裂生成分子质量较小的肽及游离氨基酸。因而，鸡肉酶解产物中含有丰富的氨基酸和肽类物质，具有抗氧化、抗疲劳、免疫调节等多种生物活性，用于研发相关天然功能性产品、调味料等，可大幅度地提高鸡肉的附加价值和利用率。本文主要对鸡肉酶解工艺、酶解产物功效及其应用进行综述，以期促进对鸡肉酶解产物的深入研究，为鸡肉酶解产物的开发利用提供理论参考。     

大豆粕蛋白酶酶解条件和产物分析研究

以水解度为衡量指标,通过正交试验设计,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和As1.398蛋白酶酶解大豆粕的最佳水解条件进行了筛选.试验结果表明:木瓜蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度60℃、时间5 h、酶浓度5%.胰蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%;As1.398蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH6.5、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%.对酶解产物进行超滤和SDS-PAGE电泳分析表明,因酶解条件不同,大豆粕酶解产物中蛋白质和肽的组成及其数量也不同;酶的种类不同,大豆粕酶解产物组成也不同;大豆粕水解度越高,其酶解产物中小分子肽数量越多.     

大鳞副泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的酶解方式研究

为开发大鳞副泥鳅蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,使用高效液相色谱法测定大鳞副泥鳅蛋白的氨基酸组成,考察泥鳅蛋白的单一酶解方式和复合酶解方式对产生ACE抑制肽的影响,并使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证实不同酶解方式对泥鳅蛋白的水解效果。结果表明,大鳞副泥鳅蛋白富含疏水性氨基酸(39.823%)、支链氨基酸(18.102%)以及芳香族氨基酸(8.216%),是制备ACE抑制肽的良好来源。脯氨酸蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶单一酶解泥鳅蛋白,酶解产物的最高ACE抑制率分别是81.01%、64.91%和87.84%,最高水解度分别为1.48%、9.04%和28.29%。使用碱性蛋白酶与脯氨酸蛋白酶对大鳞副泥鳅蛋白进行分步酶解与同步酶解,同步酶解方式可以产生更高活性的ACE抑制肽,最高的ACE抑制率为90.14%,IC50为0.491 mg/mL。     

大豆肽的制备及其营养功能研究进展

大豆肽是大豆蛋白水解后,由3～6个氨基酸残基组成的低肽混合物,分子量在1 000 u以下。为了提高大豆蛋白资源的利用率,降低大豆肽的成本,综述了以豆粕为原料制备大豆肽的2种方法,发酵法和酶解法。同时也阐述了其功能特性及在食品工业的应用。由于它具有很多优良的理化特性和生理活性,具有极高的利用价值和广阔的发展前景。     

不同底物浓度花生粕酶解产物特性的研究

花生粕是花生榨油后的副产物,压榨过程中高度变性导致蛋白利用率较低。本文通过生物发酵技术诱导米曲霉分泌蛋白酶水解花生粕,在不同底物浓度条件下酶解花生粕,对比酶解产物的蛋白回收率、水解度、总糖回收率、分子量分布、游离氨基酸组成,同时采用电子舌对富含呈味肽的酶解产物进行感官评价分析,探究不同底物浓度条件下发酵花生粕的酶解产物特性,并筛选适宜的酶解浓度。研究发现,发酵花生粕经不同底物浓度酶解后,蛋白回收率在70.68%~84.14%之间,水解度在30.04%~40.05%之间;酶解产物以小于1 ku的短肽为主(87.57%~90.21%),并含有较多游离氨基酸;在呈味特性方面,酶解液含有较强的鲜味。结果表明,在料液比为1:5时,获得较高的蛋白回收率、水解度以及较多小分子肽,鲜味评分也相对较高。     

大米蛋白肽的制备与ACE抑制活性分析

通过优化大米蛋白的单酶酶解与双酶酶解工艺,确定了采用碱性蛋白酶加蛋白酶B复合酶解制备大米蛋白肽的工艺.蛋白回收率高达43.9％,制备的大米蛋白肽感官评价高、苦味低、分子质量小.对比市售的大豆蛋白肽、鱼胶原蛋白肽,3种蛋白肽的水分含量、蛋白质含量、脂肪含量基本接近.大米蛋白肽与大豆蛋白肽中分子质量<2000 Da的总比例...     

超声波辅助酶法制备大豆蛋白抗氧化肽的研究

采用超声波辅助木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的方法制备抗氧化肽。结果表明,大豆蛋白的最佳水解条件如下:90℃预处理15min,pH6.5,[E]/[S]为7%,超声波处理30min,65℃水解3h,水解度可达19.2%。大豆蛋白肽抗氧化性的高低和水解度的大小没有直接的线性关系,采用此法制备大豆蛋白抗氧化肽的效果较好,具有良好的应用前景。