多宝鱼不同水解物肽段组成及体外抗氧化活性比较

为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价其水解度、相对分子质量分布、氨基酸组成、肽段组成和体外抗氧化活性的差异。结果表明:生肉碱性蛋白酶水解物的水解度最高,为20.18%;4种水解物的分子质量分布差异明显,共有肽段仅有1条,但氨基酸组成没有显著性差异;碱性蛋白酶水解物以肽段小于1000 Da的组分为主,2～4肽的含量达64.57%～51.73%,而模拟消化产物中1000～3000 Da的组分占比超过50%,以多肽(>10)为主,熟化过程会减少小肽(<6)的比例;体外抗氧化活性分析显示,碱性蛋白酶水解物的抗氧化活性均高于模拟消化样品,熟化会降低生肉碱性蛋白酶水解物的抗氧化能力,生肉碱性蛋白酶水解物具有最高的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,以及最佳的铁离子还原能力。因此,碱性蛋白酶是优于模拟消化的多宝鱼蛋白水解方式,鱼肉的熟化总体上会降低水解物的抗氧化能力。     

核桃饼粕蛋白提取、多肽制备条件优化及其酶解液的抗氧化性研究

本研究以去除多酚的核桃粕为原料,利用均匀试验优化核桃粕碱溶性蛋白提取条件,利用二次通用组合旋转设计优化双酶法制备核桃粕多肽制备条件,结合项目组前期建立的模拟胃肠道消化体系及模拟胃肠道消化体系+混合乳酸菌两种体系,制备核桃粕蛋白酶解液,采用体外实验对比三种体系制备核桃粕蛋白酶解液的抗氧化活性。核桃粕蛋白质最佳提取条件为:提取溶液的pH11、料液比为1:21 (g/mL)、提取温度65 ℃、提取时间70 min,提取2次,在此条件下提取液蛋白含量为221.6233 mg/g。双酶法制备核桃粕多肽工艺条件分为两个阶段,第一阶段胃蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:底物质量浓度为1 g/100 mL、pH2.4、加酶量为133.53 U/g、温度为40 ℃、时间139 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液水解度25.90%;第二阶段胰蛋白酶酶解阶段,其最佳条件为:加酶量800 U/g、温度20 ℃、pH为6、酶解时间240 min,在此条件下酶解,核桃粕多肽酶解液的水解度为35.57%。三种酶解液的总抗氧化能力V_C当量值分别为:双酶酶解液0.0516 mg/mL,体外模拟胃肠道消化酶解液0.0634 mg/mL、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌酶解液0.0411 mg/mL,用双酶、体外模拟胃肠道消化、体外模拟胃肠道消化+混合乳酸菌三种体系制备的核桃粕蛋白酶解液均具有抗氧化性活性,而双酶法制备的核桃粕酶解液具有较强的抗氧化活性。     

酪蛋白体外消化过程中DPP-IV抑制活性的变化规律及其机制分析

近年来二肽基肽酶(dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ)抑制肽已成为辅助治疗糖尿病的重要手段。本实验以牛乳酪蛋白为研究对象,采用体外胃肠消化模型水解,研究酪蛋白在消化过程中的消化特性和DPP-Ⅳ抑制活性变化情况,并采用液相色谱串联质谱法分析消化过程中DPP-Ⅳ抑制肽典型特征结构序列变化规律,旨在寻找酪蛋白在消化过程中DPP-Ⅳ抑制活性变化机制与典型结构肽变化之间的关系。结果显示:消化特性上,酪蛋白在消化过程中水解度及消化率均随消化时间延长而增加,而其消化产物的DPP-Ⅳ抑制率与未消化产物相比总体上也处于增加趋势,并于240 min时达到最高值58.04%,为120 min胃消化产物的2倍左右(23.22%),水解度及蛋白消化率与DPP-Ⅳ抑制活性之间可能存在某种关联。进一步基于液相色谱串联质谱法分析酪蛋白消化产物中具有DPP-Ⅳ抑制肽典型特征结构(Xaa-Pro/Ala-及Trp-Xaa-,以下均简称特征肽)肽段,胃蛋白酶消化产物中共鉴定出25条特征肽,分子质量主要集中在大于5 kDa,而胰酶消化组分共鉴定出48条特征肽,分子质量集中在小于1 kDa,结合热图结果,发现特征肽段数目及含量均随消化时间呈现增加趋势,与DPP-Ⅳ抑制活性变化规律类似,揭示了酪蛋白消化过程中DPP-Ⅳ抑制活性变化机制与Xaa-Pro/Ala-及Trp-Xaa-肽数目及含量紧密相关。     

苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物协同对二肽基肽酶-IV的抑制活性

为评价动植物源天然产物的二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV）抑制活性,以苦瓜皂苷（momordica saponins,MS）、乳清蛋白胃蛋白酶水解物（whey protein pepsin hydrolysates,WPPHs）、乳清蛋白胰蛋白酶水解物（whey protein trypsin hydrolysates,WPTHs）为原料,采用单因素试验和响应面分析优化水解条件,再将MS与WPPHs、WPTH进行复配,结合模拟体外消化,探究DPP-IV抑制活性。结果表明,MS、WPPHs及WPTHs具有DPP-IV抑制活性,最佳水解条件为：当酶添加量4%、pH 2.7酶解2 h时,WPPHs的DPP-IV抑制率最高为15.43%;当酶添加量4%、pH 7.6酶解4 h时,WPTHs的DPP-IV抑制率最高为14.62%。苦瓜皂苷与乳清蛋白水解物具有协同对二肽基肽酶-IV抑制活性作用,当MS与WPPHs、WPTHs的复配体积比均为1:1时,显著高于两者单独累加（p<0.05）。经胃消化后,WPPHs的DPP-IV抑制率降低2.02%,MS和WPTHs的DPP-IV抑制率升高0.99%、7.01%;经肠道消化后,WPPHs的DPP-IV抑制率升高2.23%,而MS和WPTHs的DPP-IV抑制率降低4.12%、2.70%。研究结果可为天然动植物源产物协同对二肽基肽酶-IV抑制活性提供了基础性数据,为降血糖功能性产品的开发提供新的方向。     

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme, ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC₅₀=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC₅₀=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。     

利用牡蛎制备DPP-IV抑制肽及其活性分析

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC 3.4.14.5）抑制肽。通过对比5 种蛋白酶（木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶）制备的酶解液对DPP-IV的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-IV抑制效果最好。通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8%、pH 8.0、温度37 ℃,酶解时间90 min。酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段。通过质谱鉴定筛选得到2 种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys（EITALAPSTMK）和Ile-Leu-Ala-Pro-Pro-Glu-Arg（ILAPPER）。利用BIOPEP在线模拟分析了这2 个肽的胃肠液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-IV抑制活性研究。结果显示,2 个肽段的IC50值分别为354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子对接结果表明,抑制肽与DPP-IV的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主。本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-IV抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础。     

生姜蛋白酶水解产物中二肽基肽酶-IV抑制肽的虚拟筛选及活性分析

根据生姜蛋白酶的水解特异性,从其水解物中虚拟筛选出高活性肽段,进行体外活性验证和体内吸收入血成分研究。利用Peptide Ranker和分子对接虚拟筛选出高活性肽段,建立体外酶促反应体系测定活性肽对二肽基肽酶-IV（DPP-IV）的抑制活性（IC50）,并且在此基础上,引入表面等离子体共振（SPR）技术深入研究DPP-IV与活性肽的相互作用,并开展大鼠灌胃实验研究活性肽在胃肠道消化系统中的稳定性。通过计算机模拟,虚拟筛选得到Gly-Pro-Ser-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Hyp-Gly（GPSGPXGPXGPXG）DPP-IV抑制肽。体外酶促实验表明GPSGPXGPXGPXG对DPP-IV具有较强的抑制作用,IC50为457.3 μmol/L,SPR实验进一步表明二者之间具有快速结合和快速解离的动力学过程,但是大鼠体内实验提示,该多肽无法维持胃肠道稳定性,不是以原型形式被消化道吸收,而是部分以二肽和三肽的形式进入血液循环系统,包括Pro-Hyp、Gly-Pro-Hyp和Pro-Hyp-Gly等寡肽。该研究表明筛选得到的活性肽口服经消化道吸收后无法保持结构完整性,会被体内的肽酶水解,这为后续进行体内的药代动力学和药效学研究提供理论支撑。 关键词：生姜蛋白酶;虚拟筛选;药靶结合动力学;表面等离子体共振技术     

高温花生粕功能肽的酶法制备

以高温花生粕为原料,制备兼具界面活性和抗氧化性的肽,研究酶种类对水解度、蛋白质提取率、起泡性、乳化性、抗氧化性的影响,筛选最适用酶;建立最适酶水解高温花生粕的动力学模型。结果表明,碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶水解产物的蛋白质回收率均在60%以上;碱性蛋白酶水解物的水解度最高,木瓜蛋白酶水解物在120 min时,水解度达到最大;酶解物的分子量随着水解度的增大逐渐减小,木瓜蛋白酶水解物大分子量组分和小分子量组分含量相当;木瓜蛋白酶水解物的起泡性为216.24%、泡沫稳定性为67.19%、乳化活性为39.70 m2/g、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率最高（IC50为0.72 mg/mL）,优于其他酶解物。木瓜蛋白酶为制备界面活性兼抗氧化性肽的最适用酶,其水解动力学模型为DH=0.839ln[1+（1 826.859E0/S0-78.772）t]。     

三种蛋白酶酶解核桃饼粕的抗氧化活性研究

该研究以核桃饼粕（WC）、石油醚脱脂核桃饼粕（PEWC）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕（PEAWC）、核桃饼粕分离蛋白（WCP）、石油醚脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEWCP）、石油醚及丙酮脱脂核桃饼粕分离蛋白（PEAWCP）为研究对象,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶超声水解,以抗氧化活性为评价指标,筛选最佳的蛋白酶及原料处理方法。结果表明,碱性蛋白酶水解PEWC对OH·、O2-·和DPPH·清除率最高,分别为18.74%、28.44%和79.96%;胰蛋白酶酶解PEWC的总还原力最大;胰蛋白酶水解PEWCP的OH·和DPPH·清除率最高,分别为21.44%和80.22%,但O2-·清除率较低;胃蛋白酶水解PEWCP的O2-·清除率最高,达30.23%;碱性蛋白酶酶解PEWCP的总还原力最大;核桃饼粕经石油醚脱脂后的酶解产物抗氧化活性最高,且以碱性蛋白酶为最佳水解酶。     

复合蛋白酶水解核桃粕制备血管紧张素转化酶抑制肽工艺优化

以低温榨油后的核桃饼粕为原料提取核桃蛋白,采用复合酶水解法制备得到具有降血压活性的血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。在优选复合蛋白酶种类的基础上,以ACE抑制活性为评价指标,通过单因素试验和正交试验进行复合酶酶解参数的优化。结果表明,核桃粕制备ACE抑制肽的最优条件为:复合酶添加质量比1∶2(碱性蛋白酶:中性蛋白酶)、底物浓度4%、酶解温度45℃、pH 8.0、酶添加量8 000 U/g、酶解时间60 min。该条件下制备获得的降血压肽的ACE抑制活性为(63.42±0.70)%,IC50值为(0.838±0.015)mg/mL,多肽相对分子质量主要为0～2 k Da,具有良好的常温贮藏性和消化率。     

核桃综合深加工的思路与技术评价

为了充分发挥核桃资源的价值,必须对其进行综合深加工.核桃综合深加工的基本思路是:将核桃壳加工成核桃壳超细粉,将核桃仁加工成核桃油、核桃粉和核桃乳等产品.核桃壳超细粉的用途比较广泛,具有广阔的市场前景.核桃油的制取方法比较多,通过快速液压法制取的核桃油既保留了核桃油的天然品质,又避免了核桃蛋白的变性.采用含有部分油脂的核桃蛋白既可以加工成半脱脂核桃粉,也可以加工成品质稳定的半脱脂核桃乳,还可以添加在肉类食品或焙烤食品中.核桃综合深加工将会带来巨大的经济效益.     

核桃仁保健饮料的生产工艺

介绍了核桃奶的生产工艺 ,并描述了加工过程中因通过不同的方法对核桃仁皮衣进行处理而使产品核桃奶的品质有些微妙变化。     

核桃仁的水剂法加工技术

核桃仁中的粗脂肪含量60%以上,其中不饱和脂肪酸可达到90%,是一种优质的油脂原料,适合水剂法加工。核桃仁水剂法加工的技术要点为研磨、分离、破乳及产品包装,其加工的产品有核桃油、核桃粉和核桃饮料。核桃仁的水剂法加工技术具有良好的推广应用前景,其中分离机是关键设备。     

核桃仁脱皮和蛋白提取研究

该文采用正交实验研究核桃仁脱皮效果和核桃蛋白提取工艺。结果表明,在65℃下,以0.6％NaOH溶液,将核桃仁浸泡15min,所得核桃仁颜色和质地最好;对核桃蛋白提取工艺研究表明,在核桃仁浓度为4％,pH9.0下碱溶,在pH5.0酸沉,核桃蛋白质得率最高,为70.0％左右。     

核桃多肽的制备及核桃多肽酒的研制

采用中性蛋白酶对核桃蛋白进行水解,得到最适反应条件是：酶解4.0h,底物浓度3%,加酶量6500U/g底物,温度50℃、pH7.5,水解度达到11.6%。核桃多肽酒最佳发酵工艺条件为：温度24℃,接种量0.05%,pH4.0,时间6d。发酵结束后为了掩蔽轻微的苦味,加入0.6% β-环糊精和4%蔗糖,最终产品口感良好。     

核桃资源的综合开发利用

综述了核桃油、核桃蛋白、核桃粉的开发利用技术及研究进展,为核桃深加工技术研究、核桃新食品开发提供参考。     

核桃油研究进展

该文介绍核桃油营养成份、功能特性、提取工艺、抗氧化性能,并针对我国核桃加工产业发展现状及存在问题提出建议。     

核桃蛋白（肽）粉生产工艺实践

以低温压榨后的核桃饼为原料,通过核桃蛋白(肽)粉制备中试生产线进行工艺实践,并给出了详细工艺参数。核桃饼经亚临界低温逆流萃取后,粕粉中残油为0. 92%,蛋白质含量为54%;经核桃蛋白(肽)粉制备工艺后,蛋白粉中蛋白质含量达80%,肽粉中酸溶性蛋白含量达75%;核桃蛋白粉得率为37%,肽粉得率为17. 5%,即每吨脱脂粕粉可获得核桃蛋白粉370 kg或肽粉175 kg;获得的核桃精炼油、蛋白粉、肽粉、酶解渣粉等可直接应用于功能性食品开发,实现了资源综合利用。     

不同品种核桃仁成分及烘烤对其油脂品质 和内源性蛋白酶活性的影响

旨在为工业去衣核桃仁的烘烤处理条件提供参考,选择我国4个品种核桃仁作为研究对象,比较了4种核桃仁的蛋白质和脂肪含量,分析了其氨基酸和脂肪酸组成,并考察了烘烤（60~140 ℃烘烤1~3 h使水分含量降至5%以下）对这4种去衣核桃仁油脂品质及内源性蛋白酶活性的影响。结果表明：核桃仁蛋白质（13.73%~17.54%）、脂肪（69.10%~72.77%）含量及其油脂亚麻酸含量（8.77%~13.23%）在品种间存在显著性差异（p<0.05）,而氨基酸组成未表现出明显差异;随着烘烤温度的升高,4种去衣核桃仁油脂的酸值及过氧化值均呈现不断上升的趋势,但均未超过国家标准要求;未烘烤核桃仁内源性蛋白酶活性在品种间也存在显著性差异（p<005）;烘烤温度对核桃仁内源性蛋白酶活性有显著影响,60~80 ℃烘烤尚且保留了大部分的内源性蛋白酶活性,而100~140 ℃烘烤核桃仁内源性蛋白酶活性大幅度下降甚至丧失。综上,烘烤对去衣核桃仁油脂及内源性蛋白酶的影响并不因核桃品种的不同而产生差异,60~80 ℃的烘烤适合生产高内源性蛋白酶活性的去衣核桃仁（坚果类产品）。     

水剂法同时提取核桃仁油脂及蛋白质研究

研究了水剂法提取核桃油及蛋白质的工艺中料液比、兑水pH、浸提温度、浸提时间对油脂提取率的影响。结果表明:最佳工艺条件为,料液比(g:mL)1∶3,兑水pH5.5,浸提温度60℃,浸提时间8h。该工艺条件下油脂得率为19.52%,蛋白质得率为10.81%,并利用冷冻干燥法得到蛋白粉。