裂殖壶菌胞内油脂尼罗红荧光染色快速检测方法的研究北大核心CSCD

为了建立快速检测裂殖壶菌胞内油脂的方法,探讨了尼罗红荧光染色法检测裂殖壶菌油脂含量的检测条件。通过考察裂殖壶菌重悬液中添加二甲基亚砜体积分数、尼罗红染液用量、染色温度、染色时间及细胞密度对荧光强度的影响,确立最优检测条件,进一步考察细胞油脂含量与荧光强度的关系,从而建立尼罗红荧光检测法的定量关系。结果表明,最优检测条件为：每毫升裂殖壶菌重悬液中二甲基亚砜体积分数和尼罗红染液用量分别为25%和15μL,染色温度50℃,染色时间15 min。在最优检测条件下,细胞密度不超过0.218×10^8个/m L范围内,菌液油脂含量（X）与荧光强度（Y）呈现良好的线性关系,其线性关系式为Y=798.55X-3.44,相关系数R2为0.996 4。因此,采用尼罗红荧光染色法可以快速检测裂殖壶菌的油脂含量。     

微拟球藻油脂提取动力学研究

对不同条件下微拟球藻油脂提取过程进行了动力学分析,以动力学方程C=C_e×(1-exp~(-kt))进行数据拟合,研究了溶剂、料液比、提取温度、振荡和超声波处理对提油率的影响。结果表明:该过程符合Fick第二定律,该方程能够较为准确地模拟微拟球藻的油脂提取过程,总提油率C_e和传质系数k随着提取条件不同而表现出差异;以石油醚为溶剂,在料液比1∶5、提取温度50℃、超声波辅助条件下,微拟球藻的提油率达到24.68%,比对照组(静置处理)提高了1.44倍,最大有效扩散率D_(eff)达到1.158 6×10~(-16)m~2/s。     

尼罗红荧光光谱法快速测定解脂耶氏酵母油脂含量的研究

为了建立快速简便检测解脂耶氏酵母油脂含量的方法,探讨了尼罗红-光谱法测定解脂耶氏酵母油脂含量的检测条件。通过研究解脂耶氏酵母最佳发射光波长、细胞密度、尼罗红染液用量、染色时间、不同助溶剂效能及最佳体积分数对荧光强度的影响,确定了最佳检测条件,得到细胞油脂含量与荧光强度的线性关系。解脂耶氏酵母在激发光560 nm、发射光650 nm处有最高荧光值,每毫升菌液加入质量分数为0.1 mg/m L的尼罗红染液20μL,加入体积分数为15%的异丙醇,黑暗染色5 min,在细胞OD600=0¹.3的范围内,菌液的油脂含量（X）与荧光值（Y）呈较好的线性关系,线性关系式为Y=6.3651X+10.097,R2=0.9902,灵敏度达0.0001 g。该方法能够准确地反映出解脂耶氏酵母胞内油脂含量。尼罗红-荧光法可成为一种快速检测解脂耶氏酵母胞内油脂含量的新方法。      

尼罗红-荧光光谱法测定布朗葡萄藻油脂含量的方法研究

布朗葡萄藻因胞外分泌物多、细胞壁厚、聚集生长等原因,不能用传统的尼罗红染色方法进行油脂含量测定。通过探索染色前处理和染色条件,优化了布朗葡萄藻的染色方法:藻液摇匀后超声波处理3 min(超声波参数为温度20℃、发射功率100 W、频率40 k Hz),3 000×g离心去除培养基,用体积分数8%的DMSO重悬细胞,调整悬液OD750到0.16,每1 m L样品加入10#L 120μg/m L的尼罗红丙酮溶液(尼罗红质量浓度1.2#g/m L),40℃水浴锅中染色10 min,荧光激发光波长520nm。改进的方法促进了尼罗红与布朗葡萄藻的结合,提高了测定的稳定性和准确度。     

基因组改组技术快速提高拟微绿球藻油脂含量

以拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)为原始藻株,经过紫外线和甲基磺酸乙酯分别诱变处理,获得5株油脂含量有所提高的出发藻株。以PEG作为融合剂,对获得的5株出发藻株进行两轮递归式原生质体融合,筛选到遗传稳定的改组藻株F2N2和F2N4,其油脂含量分别达到55.32%与57.75%,较原始藻株分别提高了69.07%与76.50%。对拟微绿球藻的原始藻株和改组藻株的油脂脂肪酸组成及含量进行分析,结果表明改组前后拟微绿球藻的油脂脂肪酸组成变化不大,但脂肪酸含量有较大差别。     

微拟球藻总脂提取方法的研究

本实验以膨化破壁微拟球藻为原料,采用溶剂法提取微藻总脂,研究了溶剂种类、液料比、提取温度、提取时间及提取次数等因素对总脂提取率的影响.结果 表明:最佳工艺参数为液料比5.5∶1,提取温度55℃,提取时间5.5h,提取4次,提取率可达96.3％,工艺简洁,有着较为广阔的应用前景.     

微拟球藻总脂中甘油酯组成定量分析及EPA的存在形式研究

采用正己烷-乙醇混合溶剂提取微拟球藻总脂,分级后得到中性脂、糖脂和磷脂,采用薄层层析分离3组分,并采用气相色谱法定量分析各组分在总脂中的含量及脂肪酸组成,同时分析了EPA在各脂质中的分布。结果表明：微拟球藻总脂甘油酯的中性脂、糖脂、磷脂占比分别为3342%、38.22%和28.36%;中性脂主要组分为甘油三酯（TAG）和游离脂肪酸（FFA）,在总脂中的含量分别为9.27 g/100 g和5.79 g/100 g;糖脂主要组分为单半乳糖甘油二酯（MGDG）和双半乳糖甘油二酯（DGDG）,在总脂中的含量分别为14.03 g/100 g和5.81 g/100 g;磷脂主要组分为磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）和磷脂酰肌醇（PI）,在总脂中的含量分别为6.22、3.53 g/100 g和1.53 g/100 g。3类脂质之和占微拟球藻总脂的51.49%;不同脂类脂肪酸组成差别较大,EPA在甘油一酯（MAG）、MGDG、DGDG和PE中比例较高,分别占各组分脂肪酸总量的16.94%、3724%、1432%和10.51%,EPA在中性脂中分布最低,83.59%的EPA以糖脂形式存在。     

荧光光谱法检测微藻中油脂

研究了尼罗红染色荧光光谱法检测微藻中油脂含量的方法.探讨了染色时间、尼罗红质量浓度、二甲基亚砜体积分数、细胞密度对藻液细胞发射光谱的影响,得到最佳测定条件为:染色时间6min,尼罗红质量浓度0.8 μg/mL,二甲基亚砜体积分数20%,细胞密度(0.248～0.448)×10<'9>个/mL.该研究为规模化筛选高含油量藻株及跟踪产油微藻油脂积累过程奠定了基础.     

基于尼罗红荧光染色的小球藻脂质快速检测方法研究

尼罗红荧光染色的脂质测定方法已经应用到一些种类的微藻当中,但在细胞壁较厚的一些绿藻中因不易染色而无法应用.选用了4株小球藻,对尼罗红荧光染色测定脂质的方法进行改进,采用20％二甲基亚砜溶液作为渗透剂,在35 ～ 40℃下对藻细胞进行前处理,加强尼罗红与胞内脂质的结合;藻细胞密度的OD540在0.8～1.1范围内,加入15 μL质量浓度为0.1 mg/mL的尼罗红丙酮溶液染色可以有效提高荧光发射强度.该方法能够较为准确地反映胞内脂质含量,可以作为自然界中广泛筛选富脂绿藻的快速检测方法.     

脱脂微拟球藻酶解工艺优化研究

为了提高微拟球藻提油后副产物的利用率和附加值,本研究以脱脂微拟球藻为原料,采用酶解破壁法制备微拟球藻浓缩蛋白。以蛋白质含量、回收率及核酸脱除率为评价指标,探究酶添加量、酶解时间、酶解温度、pH和料液比对酶解产物的影响。在单因素实验的基础上,进行正交试验分析,优化酶解工艺条件。结果表明,最佳酶解工艺条件为：酶添加量1.5%、酶解温度55℃、酶解时间3h、pH 6.0。在此条件下,微藻蛋白质含量达到84.47±0.48%。显微镜镜检、还原糖浓度测定及扫描电镜分析显示,酶处理后微藻细胞壁得到了有效破碎。     

响应面法优化拟微绿球藻藻油脱色工艺

以海洋微藻拟微绿球藻中提取的富含二十碳五烯酸的粗藻油为原料,探究脱色材料及脱色工艺对粗藻油脱色效果的影响。在单因素试验结果的基础上,以脱色剂用量、脱色温度、脱色时间为影响因素,以藻油脱色率和藻油回收率为响应值,应用Box-Behnken试验设计建立数学模型,进行响应面分析,优化脱色工艺条件。结果表明,活性炭对拟微绿球藻藻油的脱色效果最好,响应面优化的最佳脱色工艺条件为:活性炭用量3.8 g/100 mL、脱色温度68℃、脱色时间54 min。在此条件下,微藻藻油的脱色率达到98.05%,经3次解吸后,藻油总回收率达到81.45%。     

拟微绿球藻中二十碳五烯酸提取工艺的比较研究

以拟微绿球藻为原料,比较不同有机溶剂体系及超临界CO_2(SC-CO_2)萃取对微藻油得率和EPA含量的影响,并采用响应面法对SC-CO_2萃取工艺进行优化。结果表明:有机溶剂体系石油醚-丙酮-乙醇(体积比2∶1∶0.5)可以获得较好的萃取效果,此条件下微藻油得率为23.74%,EPA含量为31.34%;SC-CO_2萃取最佳夹带剂为甲醇,最佳萃取工艺参数为萃取压力26 MPa、萃取温度48℃、萃取时间168 min,此条件下微藻油得率为8.34%,EPA含量为25.66%。GC-MS分析显示,两种方法所得微藻油脂肪酸组成一致,且均以不饱和脂肪酸为主。考虑到设备成本、能耗等问题,溶剂浸提法相比于SC-CO_2更具有一定优势。     

流式细胞仪检测微细胶黏物中尼罗红染料选择性吸附的研究

采用尼罗红(Nile Red)染料分别对旧报纸(ONP)浆和旧瓦楞箱纸板(OCC)浆的白水、苯-醇抽提前后漂白硫酸盐针叶木浆(漂白浆)的白水、纤维素酶处理前后的漂白浆白水进行染色,随后用流式细胞仪检测分析。结果表明,Nile Red染料可吸附废纸浆白水中疏水性物质,在检测过程中激发荧光产生标记。但用自来水(模拟造纸用水)也可被激发荧光,表明废纸浆中可被检测的颗粒不全是微细胶黏物;使用苯-醇抽提漂白浆以排除抽出物的干扰,抽提后其白水中颗粒浓度为269个/μL,颗粒平均粒径为3.24μm,与抽提前相比无明显变化,表明不含抽出物漂白浆的白水中仍存在可被Nile Red染料吸附的物质;纤维素酶处理后白水中颗粒浓度从246个/μL减少到61个/μL,颗粒平均粒径从3.19μm减少为2.98μm,细小纤维的降解使白水中能够被染料吸附的颗粒减少,表明漂白浆白水中细小纤维可被Nile Red染料吸附并影响检测结果。最后确定流式细胞仪检测废纸浆颗粒浓度结果校正系数为85%。     

高效液相色谱法测定食用油中邻苯二甲酸酯类污染物总量

建立了检测食用油中邻苯二甲酸酯总量的高效液相色谱方法。采用皂化酸解工艺,将食用油中邻苯二甲酸酯转化为邻苯二甲酸,经正己烷萃取弃除脂肪酸,再用乙酸乙酯萃取邻苯二甲酸,旋转蒸发浓缩,用甲醇溶解,C18色谱柱分离,紫外检测器分析,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲溶液(浓度25 mmol/L,pH 2.5)进行梯度洗脱,总流速为1 mL/min,测定邻苯二甲酸的含量,并进一步估算出邻苯二甲酸酯的总含量。所建立的方法相对标准偏差为2.67%～9.51%,回收率在79.12%～110.01%之间。该方法前处理简单,有利于大批量样品中邻苯二甲酸酯总量的检测,适用于初步判定食用油是否受到邻苯二甲酸酯的污染及其受污染程度。     

GC-MS测定藻油中角鲨烯含量

基于GB/T 22110—2008,建立一种利用GC-MS简单、快速测定藻油中角鲨烯含量的方法。考察了甲酯化试剂用量对甲酯化程度的影响与不同色谱柱对角鲨烯分离程度的影响。0.2 g藻油经1 m L 0.5 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液进行甲酯化,正己烷提取后经HP-5MS色谱柱分离,用GC-MS选择离子监测模式对角鲨烯进行定量测定。方法在10~500 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r=0.999 8,检出限为0.10 mg/L,加标回收率为92.14%~96.47%,此法也适用于其他植物油中角鲨烯含量的测定。通过比较"复合型"藻油和"非复合型"藻油样品成分及含量上的差异,得出两种类型的藻油除了脂肪酸含量存在差异外,"非复合型"藻油比"复合型"藻油角鲨烯含量高10倍多。     

浊度仪法快速测定菜籽油中蜡质含量

为了适应菜籽油中蜡质含量快速测定的要求,根据植物油中的蜡质在低温时会结晶析出,引起植物油浊度变化,利用浊度仪建立了菜籽油中蜡质含量的快速测定方法。考察了溶剂种类、溶剂与油的体积比(溶剂比)、冷却时间对菜籽油中蜡质含量测定的影响。结果表明:以丙酮为溶剂、溶剂比为1∶1、冷却时间为30 min,在蜡质含量为0~250 mg/kg时,所建立方法的线性方程为Y=0.078 7X-0.036 5,相关系数R2=0.999,加标回收率为87.84%~110.42%,相对标准偏差(RSD)为1.13%~2.89%。该方法具有良好的准确度和可行性,数据分析简单,对操作人员的专业要求不高,适合工厂蜡质含量的监控要求。     

紫外二阶导数分光光度法测定香油含量

根据香油和其他植物油在299.3nm处吸收的不同,采用紫外二阶导数分光光度法测定香油的含量,其测定的线性范围2~25μL.mL-1,标准偏差0.77%,加标回收率95.3%~99.4%。该方法简便、快捷,其精密度和准确度均较好,可批量进行检测。