我国葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母的检测和鉴定

为快速且准确地检测葡萄酒中布鲁塞尔酒香酵母的存在情况,本研究比较了酒香酵母鉴别培养基（Dekkera bruxellensis differential medium,DBDM）和WLN（wallersteins laboratory nurtrient）培养基分离检测布鲁塞尔酒香酵母的效果,并利用特异聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增法对上述两种培养基的分离检测效果作了进一步验证。结果表明,上述两种培养基均能对葡萄酒中的布鲁塞尔酒香酵母进行分离鉴别,而DBDM培养基较少出现假阳性菌落,具有更好的选择性,结合特异PCR扩增可准确鉴定布鲁塞尔酒香酵母。此外,利用DBDM培养基结合特异PCR扩增法对国内5 个主要葡萄酒产区的酒样进行布鲁塞尔酒香酵母感染情况的调查发现,河北、山东和吉林的葡萄酒中存在布鲁塞尔酒香酵母感染的情况,尤其是在橡木桶中陈酿的葡萄酒。因此,国内葡萄酒行业应对酒香酵母感染问题足够重视。     

夏黑葡萄附生酵母菌分离及多相分类鉴定

葡萄野生酵母是酿造优质葡萄酒的重要菌种来源,为发现有价值的野生葡萄酵母,本研究以夏黑葡萄为研究对象,采用平板划线分离的方法得到3株葡萄野生酵母YYMPT-1、YYMPT-2和YYMPT-3,利用扫描电子显微镜（SEM）进行形态观察,PCR扩增26S核糖体DNA的D1/D2区（26S r DNA D1/D2）、核糖体内转录间隔区（ITS1-5.8SITS2）和肌动蛋白基因（Actin gene）区域,并构建系统发育树,将3株酵母菌分别鉴定为有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）、近玫色锁掷酵母（Sporidiobolus pararoseus）和假丝酵母（Candida zemplinina）。本研究结果为优质葡萄酒酿造和改善葡萄酒风味提供了3株具有潜在工业化应用价值的资源菌。      

食品中腐败酵母的实时荧光PCR鉴定

为研究食品中腐败酵母实时荧光PCR快速鉴定方法,设计和筛选出了可用于腐败酵母鉴定的多条探针和引物,并建立了针对酿酒酵母、鲁氏接合酵母、斯巴达克毕赤酵母和布鲁塞尔德克酵母等4种腐败酵母菌的实时荧光PCR鉴定方法。用文中建立的方法对从糕点、蜂蜜、饮料等市售食品中分离出的60余株酵母菌进行了鉴定,发现其中4株为酿酒酵母,21株为鲁氏酵母,其他为与上述4种不同的酵母。以实时荧光PCR方法鉴定酵母,全过程仅需约3 h,与常用的生化鉴定方法相比,简化了鉴定步骤,提高了鉴定准确性,缩短了鉴定时间。     

ERIC—RAPD指纹技术用于野生酵母签定和标准谱库的构建

开发了ERIC—RAPD指纹技术，建立了酵母种的ERIC—DNA“指纹”，组成野生酵母的标准图谱库。对未知酵母种进行遗传聚类分析，确定其分类地位。并将该技术应用于生产样品分离野生酵母的菌种鉴定。     

大肠杆菌O157:H7特异基因的实时荧光定量PCR检测

为建立快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RT-PCR)方法,针对大肠杆菌O157:H7的特异基因rfbE设计一对特异引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,并进行灵敏度、重复性和特异性实验,同时与常规PCR方法进行比较。结果显示所建立的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法可以快速、特异地检测出大肠杆菌O157:H7,细菌纯培养物中其灵敏度可达2×101CFU/mL,临床模拟污染肉样中能最低能检测到1×102CFU/mL的大肠杆菌O157:H7。与常规PCR方法相比,SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法对临床样品中大肠杆菌O157:H7的检出率大大提高。本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地检测大肠杆菌O157:H7。     

乳酸菌定量分析方法研究进展

传统的微生物定量检测方法主要运用纯培养技术根据细胞的形态特征或通过使用细胞计数仪来进行定量。近年来,随着分子生物学及生物技术的发展,依赖于特异核酸序列的分子生物学定量技术如:点杂交和狭线杂交、荧光原位杂交、PCR-DGGE以及实时荧光定量PCR技术已经被广泛应用。文中综述了用于乳酸菌定量检测的几种方法,简单概括了各种方法的原理、特点以及其研究应用现状。     

实时荧光PCR法检测食品中亚利桑那沙门氏菌

沙门氏菌（Salmonella）是食品检测过程中最常见的致病菌之一,亚利桑那沙门氏菌（Salmonella arizonae）又是沙门氏菌中比 较难鉴定的亚种。该实验通过实时荧光聚合酶链式反应（PCR）方法快速准确的检测亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌。根据GenBank 公布的亚利桑那沙门氏菌和其他沙门氏菌gud D基因序列, 分别设计引物和Taqman探针。 使用10株不同血清型的沙门氏菌标准菌 株、88株沙门氏菌分离株和29株食品中常见食源性致病菌进行实时荧光PCR特异性实验。结果显示,该实验所设计的引物探针特异 性非常好。 实时荧光PCR灵敏性试验结果表明,检测灵敏度可达到1～10 CFU/mL的添加浓度。 经模拟污染样品验证,所建立的实时 荧光PCR方法与传统方法的检测结果相一致,具有检测周期短、操作简便的优势。     

啤酒生产中腐败微生物鉴定新技术

啤酒生产过程中的污染微生物主要有野生酵母，细菌，放线菌和霉菌四大类。新的快速检测技术有聚合酶链式反应（PCR）技术，伏安型生物传感器，自动微生物检测系统（AMS），改良MRS培养基和三磷酸腺苷（ATP）法等，较传统方法迅速，准确。     

红提葡萄中酵母菌多样性的研究

为研究红提葡萄酵母菌多样性,以石河子地区的红提葡萄为原料,采用传统分离培养方法从中筛选酵母菌,并通过形态 观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。 结果表明,共筛选鉴定出24株酵母菌。 其中毕赤酵母属（Pichia）16株、汉逊 酵母属（Hanseniaspora）4株、梅奇酵母属（Metschnikowia）4株。 库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）为优势种,占分离菌株的50%。 该 研究可为红提葡萄酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。     

实时荧光PCR定量检测食品中单增李斯特菌

目的建立快速、敏感、特异的食品中单增李斯特菌检测方法。方法针对单增李斯特菌溶素A基因（hlyA）设计一对引物和一条探针，并用该引物和探针运用实时荧光PCR技术对单增李斯特菌的DNA、细胞、质粒和样品进行实时荧光PCR定量检测。结果利用实时荧光PCR技术，建立了DNA校正曲线、细胞校正曲线和质粒校正曲线。DNA校正曲线在1～32CFU/ml、细胞校正曲线在32—320CFU／ml、质粒校正曲线在1—37Copies／ml，线形关系良好，且三种校正曲线检测样品得出的结果基本吻合。结论本试验建立起来的实时荧光PCR定量检测单增李斯特菌的方法灵敏度高、特异性好、准确，可应用于食品中单增李斯特菌的检测。     

黑比诺葡萄接种发酵过程酵母菌的变化监控

采用WL营养琼脂培养基和Interdella指纹图谱分析以及UPGMA聚类分析,对接种工业酵母RC212的黑比诺葡萄酒发酵过程中分离的63株酵母进行种类区分与鉴定,并对其中的49株酿酒酵母单菌落进行菌株区分,以监控发酵过程中酵母菌的种类和动态变化,明确工业酵母是否主导发酵过程,探讨野生酿酒酵母与工业酵母之间的竞争性,为葡萄酒发酵过程中的微生物控制提供依据.结果表明,接种发酵过程中共分离得4种不同培养类型的酵母菌,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、红冬孢酵母(Rhodotorula mucilaqinosa)和酿酒酵母(Soccharomyces cerevisiae).用Interdelta指纹图谱将酿酒酵母区分为3种基因型,包括2种野生酿酒酵母和已接种的工业酵母RC212.工业酵母在发酵初、中、后期分别占酿酒酵母的6.25%、18.75%、100%.工业酵母在发酵末期才成为发酵优势菌,野生酿酒酵母在发酵初期和中期都位据优势地位,表现出很强的竞争力.     

啤酒酿造中野生酵母的研究

啤酒酿造中野生酵母的研究吴文芳，张成刚，吕安国，李波（中国科学院沈阳应用生态所）金连武，蒋玲，孙喜春（辽宁铁岭市清河啤酒厂）所谓野生酵母，是指在啤酒酿造过程中出现的除培养酵母之外的所有酵母而言。威尔斯对野生酵母的定义是：任何未经严密选用与控制的酵母，...     

纺织品中大肠杆菌O157:H7的检测方法

为建立一种灵敏、特异、快速、高效地鉴定纺织品基质中大肠杆菌O157:H7的方法,筛选出大肠杆菌O157:H7特有的rfbE基因保守序列,设计PCR特异性引物和荧光双标记探针,结合免疫磁珠技术,集成创新开发一种目标菌低浓度、不可培养情况下的样品中高效、快速富集分离大肠杆菌O157:H7的技术,建立了一种针对纺织品基质的免疫磁珠富集-实时荧光定量PCR方法,其检测下限可达8 CFU/mL。利用该方法对收集到的30份阳性样品进行鉴定,鉴定结果与传统方法结果100%吻合。结果表明,新建方法稳定性强,实现了纺织品中大肠杆菌O157:H7的快速灵敏鉴定。     

老白干酒曲中酵母菌多样性分析

采用微生物分离培养与分子鉴定相结合的方法,在对酒曲中的酵母菌进行分离、纯化和形态学鉴定基础上,进行菌株核糖体26S rDNA聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析技术结合的分子鉴定。并采用非培养方法,直接提取酒曲中的总DNA进行聚合酶链式反应扩增、电泳和切胶与回收,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳（polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE）法鉴定酵母菌。结果表明,采用培养方式分离到57?株6?种不同形态的酵母菌,经鉴定为5?种分子类型,分别为奥默毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）、葡萄牙棒孢酵母（Clavispora lusitaniae）、异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）、胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）、阿氏丝孢酵母（Trichosporon asahii）。经PCR-DGGE法鉴定得到10 株酵母菌,分别为W. anomalus、Wickerhamomyces sp.、T. asahii、热带假丝酵母（Candida tropicalis）和Candida sp.各1 株,Hyphopichia burtonii 2?株,另有uncultured Saccharomycopsis 3?株。培养与非培养两种方式共鉴定得到10 株酵母菌,分别属于8?个属,包括P. kudriavzevii、C. lusitaniae、W. anomalus、R. mucilaginosa、T. asahii、uncultured Saccharomycopsis、H. burtonii、Wickerhamomyces sp.、C. tropicalis、Candida sp.,该研究结果可为进一步研究酒曲的发酵能力提供参考。     

3种方法检测婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌

目的对市售婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检测方法进行研究。方法分别用常规培养鉴定方法、常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌分离鉴定。结果32份样品中检出2株阳性株，阳性率为6．25％，3种鉴定方法结果相符。结论联合使用多种鉴定方法可提高阪崎肠杆菌检测的可靠性。     

食源性致病菌免疫及分子检濒新技术研究进展

食源性致病菌是指以食物为载体，导致人类发生疾病的细菌。传统的以培养为基础的检测方法操作复杂、特异性不强、所需时间长，而近年来发展起来的免疫学方法及分子生物学方法广泛应用于食源性致病菌的检测，克服了传统检测方法的不足。目前常用的免疫学方法主要包括ELISA、免疫磁性分离技术和免疫胶体金技术等；分子生物学方法则主要有依赖PCR的DNA指纹图谱技术、多重PCR、基因芯片、定量PCR和实时荧光定量PCR等技术。     

中国东部啤酒厂腐败细菌和野生酵母的检测

本文根据分离的100株啤酒腐败细菌和22株野生酵母,研究了中国东部7家啤酒厂的污染程度评价和质量控制工艺。从每家啤酒厂的五个主要点取样：酿造水和麦汁;发酵液：种酵母;设备、空气和周围环境以及成品啤酒。通过比较分离微生物菌株的16S rDNA,把菌株鉴定到属或种水平,野生酵母鉴定到非酵母属（non-Saccharomyces）和酵母属（Saccharomyces）。在市售脱气lager啤酒中测定微生物生长,表明80％的细菌可引起啤酒污染。中国东部啤酒厂污染情况的研究表明,有害微生物检测对提高这些啤酒厂的卫生质量控制十分重要。     

ERIC-RAPO指纹技术用于野生酵母鉴定和标准谱库的构建

开发了ERIC-RAPD指纹技术,建立了酵母种的ERIC-DNA“指纹”,组成野生酵母的标准图谱库。对未知酵母种进行遗传聚类分析,确定其分类地位。并将该技术应用于生产样品分离野生酵母的菌种鉴定。     

实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分

采用实时荧光PCR技术，建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性，特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分，还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法，即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0．1％)，也可以用于定性检测，或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。     

木枣产香酵母的分离筛选和应用

为了解决枣酒残糖较高、缺少风味等共性问题,从红枣产区野生酵母中分离、筛选适宜的产香酵母并用于枣酒酿造。该研究从不同自然发酵时期的木枣中分离产香酵母菌,对其进行分子生物学鉴定,并采用顶空固相微萃取-气质联用（HS-SPME-GC-MS）技术分析其发酵枣汁的香气成分。结果表明,共分离出232株产香酵母菌株,筛选出一株产香特性最好的菌株Z228,被鉴定为季也蒙毕赤酵母（Meyerozyma guilliermondii）,其单独发酵枣汁酒精度为6.2%vol,酸度为1.6 g/L,香气浓,发酵枣汁中共测得46种香气成分,主要为醇类、酸类和酚类;菌株Z228与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）协同发酵,枣酒酒精度为13.3%vol,残糖含量为5.6%,香气清香明显、协调,香气成分有层次感。