离子色谱法测定母乳和牛乳中的N-乙酰神经氨酸

目的:母乳及动物乳汁中含有丰富的N-乙酰神经氨酸。本研究拟建立方法用于测定不同乳汁中N-乙酰神经氨酸。方法:本文采用高效阴离子交换色谱偶联脉冲安培检测器法(HPAEC-PAD)建立并验证测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的方法。结果:方法前处理简单,在较宽的分析范围(20.7～4 000 mg/L)内线性良好,相关系数大于0.999,母乳样品中的检出及定量限分别为4.3 mg/L和20.7 mg/L,准确性和精密度良好,加标回收率在86.1%～99.3%之间,平均回收率92.7%,6次重复测量RSD低于1.9%。测定不同泌乳阶段的母乳及市售牛乳中N-乙酰神经氨酸的结果显示,产后1年内母乳中总N-乙酰神经氨酸含量在187.1～1 334.7 mg/L,其随泌乳期的延长呈下降趋势。其中,游离态N-乙酰神经氨酸的比例在1.0%～2.5%。5种市售牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量范围为177.6～228.9 mg/L,其中游离态N-乙酰神经氨酸的比例在8.5%～11.2%。结论:该方法可用于快速准确地测定母乳及牛乳中总N-乙酰神经氨酸的含量。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定母乳及牛乳中5种磷脂质量浓度

建立并优化高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)用于测定母乳和牛乳中5种主要磷脂-磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰胆碱(PC)和鞘磷脂(SM)的质量浓度,并初步探讨母乳和牛乳中磷脂质量浓度和组成的差异。采用氯仿-甲醇混合液(2∶1,体积比)提取乳样中的磷脂,经过盐溶液净化、再次提取、氮气蒸发、复溶等步骤,通过HPLC-ELSD进行定量测定。结果表明:母乳样品的总磷脂质量浓度显著高于3种不同生产工艺的全脂牛乳(P0.05),同时发现,母乳磷脂与牛乳磷脂构成相似,其中以PE、PC和SM为主(约占磷脂总量的80%)。总之,我们建立的方法具有良好的准确性和精密度,其分析范围、检出限(LOD)、定量限(LOQ)均能满足母乳和牛乳中磷脂的检测要求,是常规分析中鉴定和定量5类磷脂的一种快速、可靠的方法。     

核磁共振磷谱法测定乳制品中的磷脂含量

为了测定乳制品中的磷脂含量,建立了基于核磁共振磷谱(³¹P NMR)的磷脂分析方法,并采用内标法对磷脂进行了定量。利用建立的方法对不同哺乳期母乳(初乳、过渡乳、成熟乳)、奶粉(全脂奶粉、婴幼儿配方奶粉)、富含乳磷脂的乳清蛋白粉、大豆磷脂及鸡蛋磷脂中的磷脂组成及含量进行了分析。结果表明：9种磷脂标准品的检出限范围为48.97～85.76μg/mL,定量限范围为97.94～171.52μg/mL,具有合理的加标回收率(83.40%～108.52%)和精密度(相对标准偏差小于15%)。母乳中总磷脂含量平均为19.27 mg/100 mL,随着哺乳期的延长总磷脂含量逐渐降低。不同来源的样品中磷脂的组成有较大差异,母乳中含量最高的磷脂类型为鞘磷脂,其他样品中的磷脂主要类型为磷脂酰胆碱。     

明党参中游离氨基酸与核苷类成分的同时测定及品质评价

建立同时测定11种游离氨基酸与11种核苷类成分含量的超快速液相色谱-四极杆离子阱质谱联用方法,并分析明党参原植物和组织培养样品中游离氨基酸及核苷类含量。采用Waters XBridge Amide (2.1 mm×100 mm,3.5 μm)色谱柱,柱温30℃,0.2%甲酸-0.2%甲酸乙腈溶液以0.6 mL·min-1流速梯度洗脱,以多反应监测模式进行正离子检测,结合主成分分析法和逼近理想点排序法探讨不同样品品质差异。结果表明,精密度、重复性、稳定性和回收率考察结果相对标准偏差均小于5%,加样回收率在98.62%~100.64%之间,被测成分线性关系良好,表明该检测方法准确、可行;明党参样品中游离氨基酸与核苷类成分差异较大,柄悬浮细胞测得游离氨基酸总含量(3682.01 μg·g-1)与核苷总含量(6241.90 μg·g-1)均为最高;分别以氨基酸和核苷为指标,主成分分析最高评分分属原植物根和柄悬浮细胞,逼近理想点排序表明柄悬浮细胞综合品质最优。本实验所建方法可用于明党参中22种游离氨基酸与核苷含量的同时快速测定,品质评价结果提示明党参根、叶、柄悬浮细胞和再生叶具开发利用价值,可为合理利用明党参资源提供参考。     

不同泌乳期人乳与牛乳中游离氨基酸的对比

利用同位素标记相对和绝对定量技术结合高效液相色谱-串联质谱技术对不同泌乳期人乳与牛乳中游离氨基酸的种类及含量进行检测及对比分析。结果表明,人乳中游离氨基酸种类较牛乳更为丰富,含量也高于牛乳,且随着泌乳时间的延长其总量呈下降趋势。牛初乳、牛常乳、人初乳和人常乳中游离氨基酸总量分别为0.32、0.16、0.63?g/L和0.37?g/L。实验测定的42?种游离氨基酸中,人常乳中检出35?种,牛常乳中测得31?种,其中人常乳中有25?种游离氨基酸的含量高于牛常乳,人乳中组氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸等含量显著高于牛乳（P＜0.05）,游离谷氨酸在人初乳、人常乳、牛常乳中含量均为最高,而牛初乳中游离牛磺酸含量最高。本研究分析了人乳、牛乳中游离氨基酸种类和含量的差异,可为详细的研究母乳氨基酸功能和氨基酸代谢组学提供了一定的理论依据,也可为生产婴幼儿奶粉和功能性乳制品提供参考。     

婴幼儿配方食品和乳粉中核苷酸的测定方法

采用碱性磷酸酶先将样品中的核苷酸酶解为核苷,然后用高效液相色谱法测定婴幼儿配方食品和乳粉中核苷酸总量。试样经水提取,通过调pH值沉淀蛋白质,样液中的核苷酸经碱性磷酸酶水解生成核苷,再通过快速加热的方式终止酶解反应,同时进一步去除杂质,用磷酸二氢钾及甲醇作流动相,用普通C18色谱柱,采用梯度洗脱的模式对5种核苷进行有效分离。本方法回收率在92.4%～103.7%之间,相对标准差2.0%～8.0%。核苷酸各组分定量限:CMP为0.6 mg/100g,UMP为0.7 mg/100g,IMP+AMP为0.5 mg/100 g,GMP为0.4 mg/100 g(均为质量分数)。该方法简便、快速、准确,完全能满足婴幼儿配方食品中核苷酸总量测定的要求。为核苷酸检测开辟了全新的途径。     

牛乳中游离棉酚及其旋光异构体含量高效液相色谱法测定

为了检测牛乳中游离棉酚及其旋光异构体的含量,建立了牛乳中游离棉酚及其旋光异构体含量的HPLC内标检测方法。采用乙腈与甲酸的混合溶剂提取牛乳中游离棉酚及其旋光异构体,以甘草次酸为内标物,建立浓度与峰面积比值的标准曲线方程;以(R)-(-)-2-胺基-1-丙醇为手性拆分试剂,用10%冰醋酸的乙腈作为溶剂,对棉酚进行柱前衍生。同时对乌鲁木齐市各散装牛乳点样品进行检测,未检出游离棉酚及其旋光异构体。实验所建立的提取及检测方法,具有良好的准确度和精密度,样品处理方法简单,为该方法的建立提供实验数据支持。     

牛乳及婴儿粉蛋白质原料中核酸类物质含量的研究

利用核酸检测技术,通过对牛乳初乳、成熟乳以及婴儿配方奶粉蛋白原料中核酸类物质进行检测,以分析不同泌乳期牛乳核酸类物质含量的变化,以及不同蛋白原料中核酸类物质的含量,为开发添加核苷酸的婴儿配方粉提供基础数据。结果表明,牛乳初乳和成熟乳核酸类物质含量差异较大(初乳为1.933 mg/g粉,成熟乳为0.840 mg/g粉),且牛初乳中含量较高的核苷酸为尿苷酸(UMP),牛成熟乳中含量较高的为鸟苷酸(GMP)。同时,婴儿粉中的蛋白质原料中核苷酸与母乳中核苷酸相比,含量非常低,因此有必要在婴儿粉中添加接近母乳的核苷酸。     

基于衍生化反应的母乳低聚糖质谱检测方法的建立

对比2-氨基苯甲酸、2-氨基苯甲酰胺和2-氨基吖啶酮这3种衍生剂,选择2-氨基苯甲酸作为最优衍生剂,基于此建立一种超高效液相色谱-串联质谱法定量检测母乳中6种母乳低聚糖(HMOs)含量的方法。样品经除脂、除蛋白、衍生后,采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱分离,多反应离子监测(MRM)模式定量测定HMOs含量。方法学验证结果表明,各HMO在设定的浓度范围线性关系良好,相关系数大于0.99。在高、中、低3个水平加标试验中,回收率在83.2%～119.9%之间,日内精密度在1.0%～7.9%之间,日间精密度在4.5%～7.4%之间。2’-岩藻糖基乳糖和3’-岩藻糖基乳糖的定量限为1.5 mg/L,3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖和乳-N-岩藻五糖-I的定量限为5.0 mg/L,乳-N-岩藻五糖-V的定量限为4.5 mg/L,有较好的灵敏度。方法的精密度与准确度良好,可满足母乳中6种HMO的准确定量需求。     

UPLC-MS/MS测定燕窝中18种氨基酸

应用超高效液相色谱-串联质谱联用技术测定燕窝中的氨基酸含量。应用盐酸水解和碱性水解法处理燕窝样品,超高效液相-质谱/质谱联用仪(UPLC-MS/MS)测定燕窝中氨基酸含量及其组成成分,以不同取样量考察方法准确度与精密度。结果表明:该方法的相对偏差在0.01%～13.6%之间, SRSD在0.85%～4.98%之间, 30批干燕窝中18种氨基酸总量在59.10～68.73 g/100 g之间;必需氨基酸含量20.91～25.57 g/100 g,必需氨基酸占总氨基酸比例35.3%～39.60%,必需氨基酸总量占氨基酸总量约37.0%。该方法简单快速,灵敏度高,可为高蛋白质食品中氨基酸的快速高效检测提供参考依据。     

基于牛乳非蛋白生物标志物定量检测山羊乳中掺加的牛乳

为克服酶联免疫吸附法无法检测羊乳中掺加的经过热处理的牛乳的局限，本研究首先通过气相色谱-质谱法发现牛乳区别于山羊乳的关键非蛋白生物标志物为N-乙酰氨基葡萄糖，然后基于该标志物开发基于高效液相色谱手段定量检测山羊乳中掺加的牛乳的方法。样品在70?℃经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生60?min后，在高效液相色谱仪上使用反相C18色谱柱对目标物进行分离，在245?nm紫外波长下对其进行检测，根据N-乙酰氨基葡萄糖含量推算山羊乳中掺加的牛乳量。该方法的牛乳掺加量检出限和定量限分别为0.3%和1.0%，在1%～100%的牛乳掺加范围内线性良好，相关系数为0.999?4，该方法的加标回收率为100.4%～105.1%，在10、50?mg/L和100?mg/L加标质量浓度下，日内和日间精密度分别为1.8%和2.0%、1.7%和3.7%、2.6%和2.7%。该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度，可用于山羊乳中掺加牛乳的定量分析。     

Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in Italian milk by HPLC with fluorescence detection

The presence of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in Italian commercial milk samples is reported. The study was carried out on lactating (cow and goat) and plant (rice, soya, oat) milk. The quantitative determination involved liquid–liquid extraction of PAHs, a pre-concentration and determination by HPLC using a fluorescence detector. The recovery of analytes was in the range of 70–115%. The precision of the method was found to be between 6% and 24%. The detection limit ranged from 0.66 to 33.3 µg l^–1 corresponding to 0.03–1.66 µg kg^–1 milk (wet weight), at a signal-to-noise ratio of 3, depending on the compound. By this procedure, the levels of more volatile PAHs (two to three aromatic rings) were confirmed in 34 commercial milk and three plant milk samples, whereas benzo[a]pyrene was found only in five pasteurised milk samples at a mean concentration of 0.17 µg kg^–1 milk. These results provide evidence that PAH levels are influenced by heat treatments and skimming processes of milk production.     

酸性品红-B-R体系共振光散射法测定牛奶中的新霉素

为建立一种快速测定牛奶中新霉素的新方法,以市售超高温灭菌纯牛奶为样品,基于样品中残留新霉素与酸性品红在pH5.50的B-R(Britton-Robinson)缓冲溶液中形成新的缔合物,利用共振光散射技术进行测定。结果表明：其最大共振光散射峰位于625nm波长处,在0.00～2.50μg/mL范围内新霉素质量浓度与体系的相对散射光强度(ΔI)有良好的线性关系,相关系数r=0.9978,检出限为0.013μg/mL;样品测定的RSD小于2.5%(n=5),加标回收率为84.0%～96.7%。此法快速简便、灵敏度较高,用于牛奶中新霉素残留量的测定,结果满意。     

HPLC测定乳制品中的甲醛含量

针对奶糖及奶制品的甲醛残留问题,建立了一种灵敏、快速和有效的HPLC-UV检测乳制品中甲醛的方法。牛奶和奶粉样品中甲醛经三氯乙酸(TCA)提取,奶糖另添加乙酸锌和亚铁氰化钾进行辅助沉淀,用1mg/mL2,4-二硝基苯肼(DNPH),在60℃条件下衍生30min后,用HPLC-UV分离测定,外标法定量。该方法对3种奶制品平均加标回收率在95%以上,日内精密度和日间精密度在5%以下,甲醛含量在0.03～4.00μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限和定量限分别为0.03μg/mL和0.10μg/mL,对常见醛类和醇类有较好的抗干扰性。该方法具有操作简单,准确性高,稳定性好,抗干扰性强的特点,是一种测定乳制品中甲醛的有效分析技术。     

双向电泳技术鉴别牛羊乳品真实性

采用双向电泳技术对牛羊乳品的蛋白质指纹进行分析。首先通过全乳图谱分析牛羊乳的差异蛋白,然后针对婴幼儿配方粉、乳清粉等开展方法特异性研究,通过婴幼儿配方粉添加实验开展方法灵敏度研究,最后对市售配方粉、液态乳、酸乳等进行检测。总体上,双向电泳技术信息丰度高,信息直观,重复性良好,能准确分辨牛羊乳及乳清,灵敏度达到5%。通过检测,8 份市售样品中有1 份酸羊乳实际为牛乳,图谱蛋白指纹信息清晰,直观反映产品真实性。     

超高效液相色谱串联质谱法快速测定乳及乳制品中三聚氰胺

建立快速、经济测定乳及乳制品中三聚氰胺的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。乳及乳制品样品中加入乙腈-水溶液,通过超声波提取和二氯甲烷液液萃取除去蛋白质、脂肪等杂质,进一步稀释后直接进样。经超高效液相色谱(UPLC)快速分离,采用电喷雾正离子(ESI+)多反应监测模式(MRM),实现对三聚氰胺的定性和外标法定量。乳及乳制品样品在1.2 min内完成分析,且具有良好的线性关系(r=0.999 1);方法检出限和定量限(LOQ)分别为0.005 mg/kg、0.017 mg/kg;在0.5～100μg/L的基质添加浓度范围内,平均回收率为91.3%～97.1%,相对标准偏差(RSD)小于9.03%。     

高效液相色谱法测定奶粉中的三聚氰胺及其不确定度分析

建立高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺结果不确定度评定的数学模型,全面考虑测量过程中的不确定度来源,分别运用最小二乘法对标准曲线拟合的不确定度,以及极差法对测定次数较少时引起的不确定度进行评定。结果表明,取样量2.00mg 时,测定奶粉中三聚氰胺含量为(2.00 ± 0.088)mg/kg。本方法适用于高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的不确定度评定。     

UPLC-MS/MS法测定牛奶和豆乳中百草枯和敌草快的残留量

建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定牛奶和豆乳两种基质中百草枯和敌草快残留量的检测方法。5 g样品经甲酸酸化超声20 min,涡旋振荡5 min辅助提取,加入10 m L甲醇,涡旋振荡5 min,15 000 r/min离心10 min。上清液经正己烷脱脂,在电喷雾离子源正离子条件下检测,同时考察了牛奶和豆乳样品的基质效应。结果表明,牛奶和豆乳基质中百草枯和敌草快检出限均为0.001 5 mg/kg,定量限均为0.002 5 mg/kg。百草枯和敌草快在两种基质中的基质效应较强,需要以基质内标标准曲线进行定量校正。在百草枯和敌草快标准品添加范围为0.0025～0.025 mg/kg时,回收率在74.8%～115.6%之间,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为2.8%～7.7%。方法操作简单快速,适用于牛奶和豆乳样品中百草枯和敌草快的检测。     

QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定牛奶和奶粉中42 种类固醇激素

采用分散固相萃取Qu ECh ERS结合超高效液相色谱-串联质谱技术,研究同时测定牛奶和奶粉中42种类固醇激素残留量的样品前处理技术并优化检测条件,建立快速准确的检测方法。结果表明,样品用0.1%甲酸-乙腈提取,无水硫酸镁和氯化钠盐析,离心后经50 mg十八烷基硅烷(C18)、100 mg乙二胺-N-丙基硅烷(primary secondary amine,PSA)和300 mg中性氧化铝(Al_2O_3-N)净化,40%乙腈溶液复溶,使用Waters ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱分离,以乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾-正离子多反应监测模式,基质匹配外标法定量。在0.5～500μg/L的质量浓度范围内,42种类固醇激素的相关系数均大于0.99,该方法的检出限在0.06～1.5μg/kg之间。在牛奶和奶粉中分别进行3个水平添加实验(n=6),42种类固醇激素的回收率为70.3%～118.1%,相对标准偏差为0.6%～14.7%。本方法简单快速、准确度好、精密度高,适合于牛奶和奶粉中42种类固醇激素残留量的同时检测。