红毛藻多糖的化学组成及其体外免疫诱导活性研究

目的:对红毛藻中多糖组分进行提取、分离纯化,分析其化学组成和体外免疫诱导活性,阐明红毛藻具有提高免疫力食药用功效机制,为红毛藻的高值化利用提供科学依据。方法:通过水提醇沉法从红毛藻中提取红毛藻粗多糖,经阳离子交换柱层析和Sephadex G75柱层析纯化得到红毛藻多糖(BFP),再用DEAE-cellulose52柱层析对BFP进行分级纯化得到3个多糖组分F1、F2和F3;采用PMP柱前衍生、HPLC及化学方法分析其单糖组成和化学成分;通过RAW264.7细胞模型分析BFP、F1、F2和F3的体外免疫诱导活性和其相关细胞信号传导通路。结果:组成分析结果表明BFP、F1、F2和F3均为杂多糖且单糖组成存在较大差异。细胞模型结果表明,BFP、F1、F2和F3在所测定质量浓度范围(0～100μg/mL)均显著诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和分泌TNF-α,而不诱导ROS的产生。细胞信号传导通路抑制试验结果表明BFP具有体外免疫诱导活性与细胞的NF-κB、JNK MAPK、ERK MAPK和p38 MAPK信号通路的激活相关;F1与细胞的NF-κB、JNK MAPK、ERK MAPK和p38 MAPK信号通路的激活有关;而F2和F3作用机制相似,分别与细胞的NF-κB、JNK MAPK和ERK MAPK信号通路的激活相关。结论:红毛藻多糖具有显著的体外免疫诱导活性,其中分级纯化多糖组分F1和F2是BFP中主要的免疫诱导活性组分;BFP、F1、F2和F3诱导RAW264.7细胞活化释放NO的共同的信号传导通路主要有两条:即NF-κB和JNK MAPK信号途径;而诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α的共同信号通路主要是JNK MAPK和ERK MAPK信号途径。     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

牛肝菌多酚细胞抗氧化活性评价模型研究

目的:确定牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性评价模型。方法:基于人结肠癌细胞Caco-2、人肝细胞L02和人肝癌细胞HepG2 3种细胞,检测黄牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,确定适宜的细胞抗氧化评价模型。采用适宜细胞模型测定红牛肝菌、黄牛肝菌和黑牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,并与牛肝菌的多酚提取率、氧化自由基吸收能力进行相关性分析,验证方法的有效性和准确性。结果:3种细胞模型均能检出黄牛肝菌多酚的细胞抗氧化活性,而在检测多酚浓度范围、灵敏度方面存在差异,Caco-2、L02和HepG2模型检出限分别为0.025,0.1,0.2 g黄牛肝菌提取的多酚,其中Caco-2检出限最低,明显优于L02和HepG2模型。基于Caco-2细胞模型测定3种牛肝菌多酚的抗氧化能力,与牛肝菌的多酚提取率、ORAC相关系数分别为0.9662和0.9156,为显著性相关,Caco-2细胞模型有效、准确。结论:Caco-2细胞模型更适用于牛肝菌多酚细胞抗氧化活性检测,可与ORAC等体外化学评价方法联合评价牛肝菌多酚的抗氧化活性。     

菜籽蛋白水解物的分离纯化及抗肿瘤活性研究

本研究将菜籽蛋白通过碱性蛋白酶-风味蛋白酶分步酶解制备得到菜籽蛋白水解物(RPH),在经过超滤、葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-15)以及半制备液相(RP-HPLC)分离纯化得到各级分离组分。采用MTT比色法分析菜籽蛋白水解物各组分RPHs(MW1 ku)对人体肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MBA-MD-231及人体结肠癌细胞Caco-2的体外抗增殖活性。当RPHs质量浓度为50～1 000μg/mL时,RPHs对HepG2细胞、MBA-MD-231细胞及Caco-2细胞均有一定的抑制作用,且抑制效果与样品浓度之间呈现出剂量依赖性;其中,HepG2细胞对RPHs的作用最为敏感。经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到2个洗脱峰,收集并测定其活性,发现组分RPHs-F2具有更强的抗肿瘤细胞增殖活性;再进一步对其经半制备液相分离得到的组分进行体外抗增殖活性分析发现,除组分RPHs-F2-4外,其他3个分离组分都具有显著的抑制作用,而组分RPHs-F2-3对HepG2细胞具有最高的体外增殖抑制率,当作用质量浓度为1 000μg/mL时,抑制率为(51.53±5.59)%。因此认为菜籽蛋白酶解物分离组分RPHs-F2-3具有较好的抗肿瘤活性,可以作为功能性成分用于抗肿瘤相关的功能食品及保健品的开发。     

茶叶籽油酚类化合物分离纯化组分分析及HepG2细胞增殖活性抑制

以茶叶籽油为材料,采用60%甲醇溶液提取酚类化合物,经硅胶柱层析后,选取Sephadex LH-20柱对酚类化合物进行分离纯化,并采用反相高效液相色谱-二极管阵列检测技术分析纯化后酚类化合物的组分。以HepG2细胞为供试细胞,结合主成分分析,初步确定茶叶籽油中具有抑制癌细胞活性的酚类化合物。结果表明,Sephadex LH-20柱分离的3个组分中,Fr1组分所含5种化合物主要为儿茶素类或黄酮类,其中儿茶素类占62.60%;Fr2组分主要含酚酸类及黄酮类;Fr3组分中黄酮类占78.70%。Fr1、Fr2、Fr3组分抑制HepG2细胞增殖的IC50值分别为1.76%、16.24%及12.35%。对Fr1、Fr2、Fr3组分中酚类化合物及各组分IC50值进行主成分分析,表明茶叶籽油中儿茶素、芦丁为主要HepG2细胞增殖活性抑制成分。     

胶网藻多糖分离纯化、化学组成及其抗氧化活性

研究胶网藻（Dictyosphaerium sp.1A10）多糖的抗氧化活性并分析多糖的基本结构特征。采用超声辅助提取法对胶网藻多糖进行提取,并用DEAE-52纤维素柱层析和Sepharose CL-6B凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,测定其 2,2-二苯基-1-苦基肼 [2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH]、2,2''-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸 [2,2''-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）,ABTS]、羟自由基清除率和还原能力,通过紫外光谱（ultraviolet spectrum,UV）、红外光谱（infrared spectrum,IR）、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）和高效凝胶色谱（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）等技术进行基本结构分析。结果表明：（1）经过DEAE-52纤维素柱层析分离得到4个组分PC-1、PC-2、PC-3和PC-4,对抗氧化活性较高的多糖组分PC-4进行Sepharose CL-6B凝胶柱层析进一步纯化得到PCP-4;（2）胶网藻纯化多糖组分PC-4、PCP-4均具有一定的抗氧化能力;（3）胶网藻纯化多糖组分PCP-4的重均分子量（weight average molecular weight,Mw）为121 762 Da。多糖组分PCP-4含有吡喃糖和硫酸基。多糖组分PCP-4主要由鼠李糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成,还有少量的葡萄糖醛酸、葡萄糖和半乳糖。     

雨生红球藻多糖的分离纯化和免疫活性组分鉴定

以虾青素提取后的雨生红球藻渣为原料,在体外免疫细胞模型活性跟踪下,对超声辅助提取的雨生红球藻粗多糖（Haematococcus pluvialis polysaccharide,HPP）采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析和Sephacryl S400葡聚糖凝胶柱层析进行分离纯化,使用高效凝胶渗透色谱法测定各组分多糖分子质量。结果表明：HPP经DEAE-52柱层析分离得到HPP-c1、HPP-c2、HPP-c3、HPP-c4和HPP-c5五个多糖组分,其中HPP-c3免疫活性较好且含量最高;HPP-c3经Sephacryl?S400柱层析分离得到HPP-c3-s1、HPP-c3-s2和HPP-c3-s3,其中HPP-c3-s1在0～250?μg/mL质量浓度范围内极显著刺激小鼠脾细胞的增殖（P＜0.01）,并呈现剂量效应,最高刺激指数达1.34,高于HPP-c3-s2和HPP-c3-s3。经纯度鉴定,HPP-c3-s1为均一多糖,分子质量为23?413?kDa。研究结果可为雨生红球藻的高值化综合利用提供有利指导。     

榛仁降脂活性肽分离纯化及结构鉴定

采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15、反相高效液相色谱及质谱对榛仁分离蛋白降脂活性肽进行分离纯化及结构鉴定,并通过测定3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中脂质积累、总胆固醇及甘油三酯水平,筛选出具有较高降脂活性的肽段。结果表明,经Sephadex G-15分离得到的C3组分的胰脂肪酶抑制、胆固醇胶束吸附及细胞降脂活性均显著高于其他组分。进一步经质谱解析筛选出的肽段Phe-Leu-Leu-Pro-His（FLLPH）与模型组相比,可抑制26.31%的总脂形成,降低32.67%胆固醇和23.87%甘油三酯水平。FLLPH具有较好的降脂活性,本研究可为榛仁降脂活性肽的开发提供理论参考。     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及抗氧化、抗肿瘤活性分析

采用水提醇沉法制备桑黄菌丝体粗多糖，分别用终浓度为30%、45%和60%的硫酸铵溶液对桑黄菌丝体中粗多糖进行粗分离，并比较所得各多糖组分的抗氧化、抗肿瘤活性。对其中活性强的组分采用离子交换树脂柱色谱纯化，采用高效排阻色谱-折光示差检测器-多角度光散射仪对纯化多糖进行均一性分析和分子量测定。结果显示，45%硫酸铵分离多糖IPS45显示最强的抗肿瘤活性及较好的清除超氧阴离子活性，IPS45经DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得到四个级分，经高效排阻色谱分析，其中蒸馏水洗脱级分（IPS45-W）为均一多糖，重均分子量为79.1 kDa；气相色谱分析其单糖组成为甘露糖:葡萄糖:半乳糖:未知单糖，摩尔比为1.57:8.38:1.09:1.00。IPS45-W可抑制HepG2细胞生长，当浓度为50μg/mL时，对HepG2细胞的抑制率为56.74%，高于前期研究的乙醇沉淀分离所得桑黄菌丝体均一多糖同浓度下11%～35%的抑制率。该结果为不同组成的桑黄多糖的分离和应用提供依据。     

胶红酵母CICC 33013胞外多糖抑制肝癌细胞活性研究

采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法对胶红酵母胞外多糖组分(Rhodotorula mucilaginosa exo-polysaccharide2-A,REPS2-A)抑制10种常见癌细胞(血癌细胞K562、胃癌细胞BGC823、胃癌细胞SGC7901、胃癌细胞MKN28、肝癌细胞HepG2、BEL7402、Hep3B、胰腺癌细胞HS66T、乳腺癌细胞SKBR3、宫颈癌细胞HeLa)能力进行了筛选,结果证明胞外多糖组分REPS2-A对肝癌细胞HepG2有较好的抑制效果。通过胞外多糖组分REPS2-A对HepG2细胞抑制作用最佳浓度及时效性的研究,探讨胞外多糖组分REPS2-A对肝癌HepG2细胞的生长抑制及其作用机制。结果表明:当胞外多糖组分REPS2-A的浓度为1mg/mL时,肝癌细胞HepG2的抑制率高于IC50时的抑制率,抑制效果明显优于其他浓度。肝癌细胞HepG2的自发凋亡率为0.40%,当胞外多糖组分REPS2-A浓度为1mg/mL,分别处理24,48,72h,肝癌细胞HepG2的凋亡率依次为77.70%,88.18%,97.08%。胞外多糖组分REPS2-A能有效抑制肝癌细胞的增殖,使肝癌细胞HepG2阻滞发生在G1/S期,并诱导肝癌细胞HepG2凋亡,且存在剂量效应。     

碱提醇沉黑木耳多糖体外和体内降血脂功能

目的:探讨黑木耳多糖体内和体外降血脂功能。方法:采用离体实验模拟人体胃和肠道的p H值环境,探讨不同溶剂提取黑木耳多糖及其不同醇沉片段对胆酸盐的结合能力,评价其体外降血脂功能。以高脂饲料喂养小鼠建立高血脂模型,通过黑木耳多糖的治疗,比较治疗前后小鼠体质量、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、总甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度总胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度总胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量及其关键酶卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin cholesterol acyltransferase,LCAT)、肝脂酶(liver lipase,HL)和脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)的活性,研究碱提黑木耳多糖对高血脂模型小鼠的降血脂作用。结果:体外降血脂实验结果表明:3种不同的黑木耳多糖样品中,碱提黑木耳多糖的结合效果最好;不同体积分数乙醇醇沉黑木耳多糖片段的结合效果比较显示,70%醇沉片段结合胆酸盐效果最好。体内降血脂实验结果发现,碱提+70%醇沉黑木耳多糖能够缓解小鼠体质量的增长,显著缓解TC、TG和LDL-C含量的下降,显著提升HDL-C水平,控制LCAT含量、HL和LPL活性的降低。结论:碱提+70%醇沉黑木耳多糖具有降血脂功能。     

红毛藻可溶性成分提取方法

对用不同方法提取红毛藻可溶性成分的提取效果进行了比较，同时用正交实验确定了酶解的最佳提取条件。结果表明：酶解法的提取效果最好，能有效地保持红毛藻的天然颜色，经纤维素酶（1％）预处理后，红毛藻的提取率可达59.15%。     

红毛菜多糖组成及结构的初步研究

对福建产红毛菜(Bangiafusco-purpurea)的热水提取物采用Sevage法脱蛋白,乙醇沉淀得粗多糖。经DEAE-32和SephadexG-200柱层析纯化,得到3种多糖PY1、PY2和PY3,其中PY3为主要的多糖。PY3紫外光谱和理化鉴定显示它不含蛋白质和核酸;化学组成分析得出该多糖半乳糖的含量为65.9%,硫酸根含量为9.53%;元素分析表明该多糖C:N:S摩尔比约为72:2:3;该多糖的水解产物经气相色谱分析,主要由半乳糖及其衍生物组成,有少量木糖存在,半乳糖和木糖的摩尔比值为11:1;红外光谱揭示它基本不含3,6-内醚一半乳糖的特征吸收,却有较强的硫酸基吸收峰;推测该多糖可能主要由6-硫酸基-半乳糖和β-D-半乳吡喃糖为重复二糖的多糖,可能是一种原琼胶。     

红毛藻营养成分分析与评价

为了对红毛藻的营养价值进行全面的分析及评价。采用国家标准生化测定法检测红毛藻（Bangia fusco-purpurea）的营养成分。测得红毛藻干品的水分、灰分、粗脂肪、粗蛋白质以及粗纤维的质量分数分别为10.90%、10.00%、3.78%、39.42%和17.20%;检出含有18种氨基酸,必需氨基酸质量分数为总量的35.53%,鲜味和甜味氨基酸质量分数占总氨基酸的49.87%,谷氨酸的质量分数最高（4.79%）;测得脂肪酸总质量分数为3.77%,其中?棕-3系列的多不饱和脂肪EPA的质量分数最高,占总脂肪酸质量分数的39.26%;红毛藻中含有多种矿物质如 钾、钠、磷、镁、锰、钙、铁等元素,宏量及微量元素里质量分数最高分别为钾（2 627.17 mg/hg）和铁元素（31.80 mg/hg）。研究表明,红毛藻为高蛋白质和膳食纤维、营养价值丰富的经济海藻,具有较好的开发前景。     

辣木叶多糖的分离纯化及其体外降糖活性研究

目的研究辣木叶多糖的制备、单糖组成以及体外降糖活性。方法采用水提醇沉、Sevage法、大孔树脂-阴阳离子交换树脂联用技术得到较高纯度辣木叶粗多糖,再进一步通过二乙氨基乙基纤维素和葡聚糖凝胶柱层析分离得到2个主要多糖组分(MOs-2-a、MOs-2-b),并通过水解衍生化对其单糖组成进行分析。此外,采用HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,以细胞葡萄糖消耗量为指标,考察辣木叶多糖的降糖作用。结果本文采用的制备工艺可以得到较高纯度的辣木叶粗多糖(纯度为73.10%),辣木叶多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖组成,其中各单糖摩尔比为0.49:3.65:0.63:1.27。与模型组相比,辣木叶多糖组分MOs-2-a、MOs-2-b均能显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量(P0.05)。结论辣木叶多糖MOs-2-a、MOs-2-b具有良好的降糖效果,本文可以为辣木叶多糖作为功能食品发展的提供科学依据。     

大豆多肽的分离纯化及其体外降血脂功能研究

通过HepG2肝癌细胞构建高胆固醇细胞模型,以大豆蛋白为对照组,分析了大豆多肽的体外降血脂活性,并通过凝胶过滤层析法和纳米技术-高效液相色谱-串联质谱（Nano-HPLC-MS/MS）技术对大豆多肽进行了初步纯化和鉴定。结果表明,大豆多肽对HepG2细胞内甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的产生具有一定的抑制作用,对HepG2细胞内高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的产生和超氧化物歧化酶（SOD）活力具有促进作用,且大豆多肽对HepG2细胞内TG、LDL-C的抑制作用及对HDL-C和SOD活力的促进作用均强于对照组,具有良好的体外降血脂活性。大豆多肽经分离纯化,最终鉴定并筛选出5个多肽,分别编号为LLDTN、FLEHAF、DFGKFF、LVGLKLY和LIDSVLDVVRK,相应的分子质量分别为574.30 Da、762.37 Da、759.36 Da、804.51 Da和1 255.75 Da。     

黑木耳发酵产物对HepG2细胞脂质代谢及糖代谢的影响

目的:通过建立体外HepG2细胞脂肪累积模型及正常HepG2细胞模型评价不同分子质量黑木耳发酵产物对HepG2细胞脂质代谢及糖代谢的影响,揭示不同分子质量黑木耳发酵产物对细胞脂质代谢及糖代谢的调节作用及差异.方法:采用超滤法将黑木耳发酵上清液分为0～10,10～50,50～100,100～300 ku,以及>300 k...