进出口蜂王浆及其制品中10-羟基-α-癸烯酸的分析与评估

目的 了解掌握蜂王浆及其制品中的主要营养成分质量情况，以确保蜂王浆在进出口贸易时得到相应的法律保障。方法 样品经乙醇提取，溶出10-羟基-α-癸烯酸(以下简称10-HDA)，并沉淀蛋白质，加内标后用乙醇定容，经离心或放置过夜，上清液过滤，HPLC测定。结果有代表性的进出口的蜂王浆及蜂王浆胶襄样品均含有一定量10-HDA。结论蜂王浆含果糖、氨基酸、多种酶、乙酰胆碱及丰富的维生素、芸香甙、促进性腺样物质和抗菌素类物质等，而其中10-HAD由于具有一定稳定性，因此是检验蜂王浆营养品质的主要指标。     

高效液相色谱法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸

建立了外标法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的高效液相色谱检测方法。10-羟基-2-癸烯酸经乙醇超声提取后,以甲醇∶甲酸(0.1%)=55∶45为流动相,经C₁₈色谱柱分离,紫外检测器检测。结果显示,在50~500 μg/mL浓度范围内,线性关系良好,r=0.999 9,RSD<3%,加标回收率97%~105%。     

进出口蜂王浆及其制品中10-羟基-α-癸烯酸的分析与评估

目的 了解掌握蜂王浆及其制品中的主要营养成分质量情况,以确保蜂王浆在进出口贸易时得到相应的法律保障。方法 样品经乙醇提取,溶出10-羟基-α-癸烯酸(以下简称10-HDA),并沉淀蛋白质,加内标后用乙醇定容,经离心或放置过夜,上清液过滤,HPLC测定。结果 有代表性的进出口的蜂王浆及蜂王浆胶襄样品均含有一定量10-HDA。结论 蜂王浆含果糖、氨基酸、多种酶、乙酰胆碱及丰富的维生素、芸香甙、促进性腺样物质和抗菌素类物质等,而其中10-HAD由于具有一定稳定性,因此是检验蜂王浆营养品质的主要指标。     

反相高效液相色谱法测定蜂王浆中的10-羟基-2-癸烯酸

采用反相高效液相色谱法测定蜂王浆中的10-羟基-2-癸烯酸.采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱,以甲醇:磷酸1%溶液(50:50, v/v)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长210 nm.该法简便、快速、重现性好、回收率高.     

高效液相色谱法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的含量

用高效液相色谱法测定了蜂王浆中的10-羟基-2-癸烯酸。样品用无水乙醇超声提取，以保留时间定性，以峰面积定量。用C18色谱柱，紫外检测器，检测波长210nm。结果显示在50-400mg／L范围内呈良好线性关系（r=0．9991），方法的回收率为90％-95％，相对标准偏差为3．02％。     

蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量测定的不确定度评定

本文依据《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012）评定高效液相色谱法测定蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸含量的不确定度。通过建立数学模型,分析测量不确定度与影响不确定度的因素。结果表明,蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸结果平均值为1.041%,相对扩展不确定度为0.040 8%,得出标准溶液配制、标准曲线拟合、样品前处理过程和测量重复性等不确定度分量影响了最终结果。     

气相色谱─质谱法测定蜂王浆及其制品中10-羟基-α-癸烯酸

试样（鲜浆、冻干粉、口服液）经稀盐酸溶液调节pH为30以下,以乙醚萃取,气相色谱-质谱法（GCMSD）测定,外标法定量。方法简便、快速、准确,回收率97．6％~98．9％,相对标准偏差2．08％~4．39％。     

胶束电动毛细管色谱法测定蜂王浆及制品中的10—羟基癸烯酸

本文建立了胶束电动毛细管色谱法测定蜂王浆及制品中１０－羟基癸烯酸的方法，讨论了ｐＨ值，硼砂浓度、胶束浓度、工作电压对测定的影响。其测定结果与液相色谱相一致，被测物中其他脂肪酸对测定无干扰。     

大孔吸附树脂法分离提取蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸

研究不同大孔吸附树脂对蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的吸附性能,对吸附性能优良的树脂进行解吸性能比较,并对解吸剂进行筛选。结果表明：X-5树脂对10-羟基-2-癸烯酸的吸附及解吸性能最好,其饱和吸附量为9.7mg/g,最佳解吸剂为体积分数90%的乙醇溶液,以90%乙醇溶液进行动态解吸,解吸率达91.7%。真空冷冻干燥获得白色粉末状10-羟基-2-癸烯酸,经高效液相色谱法检测其纯度为80.4%。     

超高效液相色谱—串联质谱法测定蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸

目的：为蜂蜜的真假鉴别提供一种内源性成分分析方法。方法：采用超高效液相色谱—串联质谱（UHPLC-MS/MS）检测方法,样品用甲醇—水溶液提取,经PLS固相萃取柱净化,用Agilent ZORBAX SB C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm） 分离,以甲醇—5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子扫描,多反应监测模式检测,外标法定量。结果：10-羟基-2-癸烯酸在质量浓度为0.05~0.80 μg/mL内呈良好的线性关系,相关系数为0.995;方法检出限为 0.03 mg/kg,定量限为 0.10 mg/kg。在0.10,0.20,1.00 mg/kg添加浓度下,10-羟基-2-癸烯酸平均回收率为96.9%~108.3%,相对标准偏差为4.5%~10.7%;日内精密度和日间精密度分别为5.9%~9.2%和3.5%~14.3%。结论：该方法适用于蜂蜜中10-羟基-2-癸烯酸的检测,实际样品测定结果表明10-羟基-2-癸烯酸作为内源性成分在蜂蜜中是普遍存在的。     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞周期、自噬、凋亡的保护作用

目的：探讨玉米黄素对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法：分别设置空白对照组（不作处理）、玉米黄素组（5 μmol/L玉米黄素）、TM损伤组（5 μg/mL TM）和损伤加保护组（5 μmol/L玉米黄素预处理＋5 μg/mL TM进一步共处理）,采用噻唑蓝法检测各处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响,从而筛选药物共处理时间;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;通过Western blot法测定自噬相关蛋白Beclin1、Beclin1-C和微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,BCL2）的表达量。结果：玉米黄素（5 μmol/L）能减轻TM对SH-SY5Y细胞存活率的抑制作用,与TM损伤组相比,损伤加保护组在处理时间为36 h时差异极显著（P＜0.01）,48 h时差异显著（P＜0.05）;而TM损伤组相较于空白对照组在处理24、36、48 h时均表现出极显著差异（P＜0.01）。与空白对照组相比,TM处理可以极显著增加细胞周期中G0/G1期细胞数量（P＜0.01）,显著或极显著增加LC3B（P＜0.01）、Beclin1（P＜0.05）及Beclin1-C（P＜0.05）表达水平,极显著降低G2/M期细胞数量（P＜0.01）、抗凋亡蛋白BCL2表达水平（P＜0.01）。而玉米黄素联合TM处理与TM损伤组比较,均能减轻TM引起的改变,其中BCL2蛋白水平显著提高（P＜0.05）。结论：玉米黄素可减轻TM处理引起的SH-SY5Y细胞周期G1期阻滞、促细胞自噬与促凋亡作用,其作用机制与玉米黄素对细胞存活率、细胞周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达的调节有关。     

山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法：体外培养SMMC-7721细胞,噻唑蓝法检测不同质量浓度山楂原花青素对细胞增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达;检测每组细胞中过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、Na＋K＋-ATP酶活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显著抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05）,促进细胞凋亡;与对照组相比,SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na＋K＋-ATP酶活力降低,MDA含量升高;细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加,Bcl-2表达量降低。结论：山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖,促进细胞凋亡。     

君迁子叶杨梅苷诱导HepG2细胞凋亡及其作用机制

目的:探究君迁子叶杨梅苷诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:噻唑蓝法测定杨梅苷对细胞存活率的影响;激光共聚焦显微镜结合Hoechst 33342染色观察杨梅苷对细胞形态的影响;流式细胞分析仪检测杨梅苷对细胞凋亡、周期阻滞、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和单丹璜酰...     

原花青素B2诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

本研究旨在探讨原花青素B2（procyanidin B2,PCB2）对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及其机制。采用噻唑蓝法分析PCB2在不同浓度和不同处理时间下对MCF-7细胞存活率的影响;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2＋浓度变化并观察Hoechst 33342染色后的细胞凋亡形态;采用流式细胞分析仪检测PCB2对MCF-7细胞凋亡率、周期、胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平及线粒体膜电位变化的影响;通过Western blot检测PCB2对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果表明,当浓度在10～80 μmol/L范围内时,PCB2能显著降低MCF-7细胞的存活率（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,处理24、48、72 h时对MCF-7细胞存活率的半抑制浓度分别为114.82、57.15 μmol/L和55.64 μmol/L。PCB2能显著增加MCF-7细胞凋亡率、胞内ROS水平（P＜0.05）、细胞核荧光强度,并破坏Ca2＋平衡,同时显著降低线粒体膜电位（P＜0.05）,并将细胞周期阻滞在G0/G1期进而诱导细胞凋亡。PCB2可上调Bax、细胞色素c、Caspase-12和Caspase-3蛋白的相对表达水平,下调Bcl-2蛋白相对表达水平。综上可知,PCB2具有抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体和内质网介导的凋亡通路、周期阻滞和细胞内ROS水平增加有关。     

芡实壳醇提物抑制人胃癌SGC7901细胞和人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡

为明确芡实壳醇提物对SGC7901及HepG2细胞体外抑制作用及机制。该研究采用75%乙醇对芡实壳超声提取,采用福林酚法测定醇提物总酚含量,采用CCK-8法检测醇提物对SGC7901和HepG2细胞的增殖作用抑制率并计算IC50值,使用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期、细胞线粒体膜电位及胞内钙离子浓度。结果表明,醇提物对SGC7901和HePG2细胞具有增殖抑制作用,浓度为200 μg/mL的醇提物作用细胞48 h后,抑制率分别为92.63%和72.40%。细胞周期检测表明,浓度为200~800 μg/mL的醇提物可使SGC7901细胞阻滞于G0/G1期;浓度为50~200 μg/mL的醇提物可使HepG2细胞阻滞于S期。细胞线粒体膜电位测定表明,醇提物可使SGC7901和HePG2细胞线粒体膜电位下降且具浓度依赖性,醇提物浓度为200 μg/mL时,细胞线粒体膜电位相较对照组分别下降21.92%和53.81%。细胞钙离子浓度测定表明,醇提物可使SGC7901和HePG2细胞内钙离子浓度升高且具浓度依赖性,醇提物浓度为200 μg/mL时,胞内钙离子浓度相较对照组分别上升21.85%和14.14%。实验表明芡实壳醇提物可抑制SGC7901和HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞线粒体膜电位降低及胞内钙离子浓度升高有关。     

姜黄素抑制Cu~(2+)诱导的转APP_(695)基因SH-SY5Y细胞氧化损伤和凋亡作用

目的:研究Cu~(2+)诱导的转β-淀粉样前体蛋白(amyloid-β precursor protein,APP)基因SH-SY5Y(SHSY5Y-APP_(695))细胞氧化损伤、凋亡及姜黄素的抑制作用。方法:在姜黄素预保护和无姜黄素预保护条件下,50 μmol/L Cu~(2+)处理细胞24 h,测定细胞存活率、胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平、胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)水平、线粒体膜电位、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8和caspase-9活力,蛋白免疫印迹法测定核转录NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)Ser40位点磷酸化(p Ser40-Nrf2)水平以及血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1蛋白表达水平。结果:与空白对照相比,Cu~(2+)损伤组细胞存活率降低,胞内ROS水平和胞外LDH活性升高,线粒体膜电位下降,caspase-9和caspase-3活性明显升高,p Ser40-Nrf2和HO-1含量增加,而姜黄素保护组细胞存活率升高,胞内ROS水平和LDH释放水平降低,线粒体膜电位恢复升高,caspase-9和caspase-3活性明显降低,p Ser40-Nrf2和HO-1表达量减少。结论:姜黄素在一定程度上减弱了Cu~(2+)诱导的氧化损伤和细胞凋亡作用。